检索结果-南通市图书馆

猫重组变应原Fel d 1与乙肝病毒核心抗原融合基因的原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2016年第11期43卷 2826-2833页

作者：裴业春安晓荣侯健陈永福闫凤祥关宏韦双双王大勇海南大学农学院生物技术与分子药理学实验室海口570228 中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193

为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之... 详细信息

为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之间的氨基酸。经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28aHBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Western blotting和透射电镜检测。结果显示,本试验成功表达了HBcAg-r Fel d 1融合蛋白,并利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-rFel d 1融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAgrFel d 1融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。HBcAg-rFel d 1融合蛋白能自发形成病毒样颗粒结构,为猫过敏症的预防与治疗性疫苗的开发奠定基础。

关键词：猫变应原乙肝病毒核心抗原 Fel d 1 病毒样颗粒

乙肝病毒核心抗原展示载体的原核表达与电镜检测

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

热带医学杂志 2017年第10期17卷 1297-1300页

作者：开丽霞刘安康朱贵坤肖正泮韦双双王大勇裴业春海南大学热带农林学院动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口570228 海南大学热带农林学院生物学院海南海口570228

目的将多克隆酶切位点MCS插入乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的loop区,构建乙肝病毒核心抗原展示载体。方法将多克隆酶切位点MCS插入到HBcAg的c/e1 loop区,取代了HBcAg c/e1 loop区的Pro79与Ala80氨基酸残基,成功构建了pET28a-HBcAg-MCS原核... 详细信息

目的将多克隆酶切位点MCS插入乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的loop区,构建乙肝病毒核心抗原展示载体。方法将多克隆酶切位点MCS插入到HBcAg的c/e1 loop区,取代了HBcAg c/e1 loop区的Pro79与Ala80氨基酸残基,成功构建了pET28a-HBcAg-MCS原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用不同IPTG浓度梯度进行原核诱导表达与NI-NTA亲和层析纯化,利用SDS-PAGE电泳和透射电镜检测。结果成功表达了HBcAg-MCS融合蛋白,且最佳的IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-MCS融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAg-MCS融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。结论 HBcAg-MCS融合蛋白能够自发形成病毒样颗粒结构,为乙肝核心抗原HBcAg作为展示载体的广泛应用打下基础。

关键词：乙肝病毒核心抗原病毒样颗粒多克隆酶切位点

乙肝病毒核心抗原单链抗体细胞内免疫抗乙肝病毒基因治疗研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

世界华人消化杂志 2002年第7期10卷 765-769页

作者：陆荫英王琳刘妍于敏李克王业东张玲霞成军中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心北京大学第一医院感染病科北京市100034

目的:研究乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)人源单链抗体(ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用。方法:用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBcAg人源可变区单链抗体,聚合酶链反应(PCR)法和基因重组技术体外扩增HBcAg单链抗体基... 详细信息

目的:研究乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)人源单链抗体(ScFv)细胞内免疫抗乙型肝炎病毒(HBV)基因治疗的作用。方法:用噬菌体表面展示技术筛选特异性的HBcAg人源可变区单链抗体,聚合酶链反应(PCR)法和基因重组技术体外扩增HBcAg单链抗体基因,并构建表达HBcAgScFv基因的重组逆转录病毒载体pLXSN-HBcAg,转染PA317细胞,逆转录PCR(RT-PCR)方法验证细胞培养液上清分泌的假病毒颗粒中HBcAg ScFv的表达;将假病毒颗粒感染2.2.15细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测其上清HBsAg和HBeAg,定量检测HBV DNA。结果:成功筛选出HBcAg ScFv,PCR扩增出750bp的全基因,构建HBcAg ScFv基因的逆转录病毒载体,转染PA317细胞,在上清中检测出含HBcAg ScFv假病毒颗粒的存在,上清感染2.2.15细胞后第3、5、7、14天,HBsAg、HBeAg逐渐下降,到14d时HBsAg已变为阴性,DNA定量检测无明显变化。结论:HBcAg ScFV能成功地在逆转录病毒载体中表达,并有抑制HBsAg、HBeAg表达的作用。

关键词：乙肝病毒核心抗原单链抗体细胞内免疫抗乙肝病毒基因治疗

插入CpG序列的乙肝病毒核心抗原基因真核表达质粒的构建及鉴定

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国现代医学杂志 2008年第20期18卷 2962-2964,2968页

作者：周健田德英章述军许东华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科湖北武汉430030

目的构建pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)基因真核表达载体,为研制乙肝治疗性疫苗奠定基础。方法根据乙肝病毒核心抗原基因序列,设计合成3对引物,在引物中引入分别针对人、鼠敏感的CpG片段和不含CpG的片段,用PCR方法从慢性乙肝患者血清DNA中... 详细信息

目的构建pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)基因真核表达载体,为研制乙肝治疗性疫苗奠定基础。方法根据乙肝病毒核心抗原基因序列,设计合成3对引物,在引物中引入分别针对人、鼠敏感的CpG片段和不含CpG的片段,用PCR方法从慢性乙肝患者血清DNA中扩增出乙肝核心抗原基因片段,将扩增的产物与真核表达质粒pZeoSV2(+)连接,构建重组体pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS),进行酶切、PCR及测序鉴定。结果乙肝核心抗原基因体外扩增产物大小约为530bp。所构建的pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)重组体经双酶切及PCR鉴定,与预期片段的大小相符;测序结果与GenBank中收录的HBcAg全长序列一致,表明pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)真核表达载体构建正确。结论成功地构建了真核重组表达载体pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS),为CpG的功能研究和乙肝治疗性疫苗的研制提供了物质基础。

关键词：乙肝病毒核心抗原 CpG基序 Toll受体疫苗

丙肝病毒复合多表位抗原与乙肝病毒核心抗原融合基因的克隆及表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

丙肝病毒复合多表位抗原与乙肝病毒核心抗原融合基因的克隆及表达

作者：王诺吉林大学

学位级别：硕士

本研究为丙肝核酸疫苗的基础性研究工作。应用重叠延伸PCR技术,获得了HCV复合多表位抗原与HBV核心抗原(HBcAg)的融合基因,命名为CMCe。实验进行过程中,设立HBc基因(C基因)平行对照组。将CMCe定向克隆于pET-28a(+)原核表达载体,构建原核... 详细信息

本研究为丙肝核酸疫苗的基础性研究工作。应用重叠延伸PCR技术,获得了HCV复合多表位抗原与HBV核心抗原(HBcAg)的融合基因,命名为CMCe。实验进行过程中,设立HBc基因(C基因)平行对照组。将CMCe定向克隆于pET-28a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-28a(+)-CMCe,转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,测序正确后筛选阳性克隆,转化至BL21(DE3)宿主菌中,利用IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达。经过western blot分析后,表达产物能与慢性丙型肝炎病人血清中的抗体发生特异性的抗原-抗体反应。表明融合基因所表达的蛋白有良好的免疫原性。

关键词：丙肝病毒表位抗原乙肝病毒核心抗原融合基因表达

甲肝病毒表位抗原与乙肝病毒核心抗原融合基因表达的研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

甲肝病毒表位抗原与乙肝病毒核心抗原融合基因表达的研究

作者：张蕾吉林大学

学位级别：硕士

本研究为甲肝核酸疫苗的基础性研究工作。应用重叠延伸PCR 技术,获得了HAV 表位抗原与HBV 核心抗原(HBcAg)的融合基因,命名为CVPX。实验进行过程中,设立HBc 基因(C 基因)平行对照组。将CVPX定向克隆于pET-28a(+) 原核表达载体, 构建原... 详细信息

本研究为甲肝核酸疫苗的基础性研究工作。应用重叠延伸PCR 技术,获得了HAV 表位抗原与HBV 核心抗原(HBcAg)的融合基因,命名为CVPX。实验进行过程中,设立HBc 基因(C 基因)平行对照组。将CVPX定向克隆于pET-28a(+) 原核表达载体, 构建原核表达质粒pET-28a(+)-CVPX,转化入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆,转化至BL21(DE3)宿主菌中,利用IPTG 诱导目的基因在大肠杆菌中表达,表达产物以包涵体形式存在。表达产物能与抗-HAV 抗体发生特异性的抗原-抗体反应。同时将CVPX定向克隆于pVAX1 真核表达载体,成功构建真核表达质粒pVAX1-CVPX,利用脂质体转染CHO 细胞,mRNA 水平上检测到目的基因进行了有效转录,蛋白质水平上检测到表达的蛋白具有HAV 抗原的反应原性。

关键词：甲肝病毒表位抗原乙肝病毒核心抗原融合基因表达

嵌合新抗原Adpgk的乙肝病毒核心抗原病毒样颗粒的构建及表达

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术通讯 2020年第1期31卷 1-6页

作者：赵振伯杨怡姝马洪涛盛望北京工业大学生命科学与生物工程学院北京100124

目的:制备嵌合结肠癌新抗原Adpgk的乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒(VLP)。方法:通过重叠PCR将新抗原编码序列插入截短型HBcAg(1~149 aa)第78、79位氨基酸编码序列之间,并将融合基因克隆至原核表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(D... 详细信息

目的:制备嵌合结肠癌新抗原Adpgk的乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒(VLP)。方法:通过重叠PCR将新抗原编码序列插入截短型HBcAg(1~149 aa)第78、79位氨基酸编码序列之间,并将融合基因克隆至原核表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,利用亲和层析与超滤管纯化浓缩目的蛋白,通过Western印迹、粒径分析与透射电镜成像鉴定嵌合病毒样颗粒。结果:构建了pET-22b(+)重组表达载体并转入大肠杆菌BL21(DE3),SDS-PAGE结果显示在30℃经1 mmol/L IPTG诱导5 h即可获得高浓度的可溶性蛋白,通过亲和层析与超滤浓缩得到了纯度良好的目的蛋白;Western印迹结果表明连有His标签的目的蛋白获得表达且浓度较高;透射电镜成像可见密集的大小均一、空心的球形病毒样颗粒结构。结论:制备出浓度与纯度良好且组装正确的嵌合HBcAg VLP。

关键词：结肠癌新抗原乙肝病毒核心抗原原核表达

插入CpG序列的乙肝病毒核心抗原基因真核表达质粒的构建及在树突状细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中西医结合肝病杂志 2008年第6期18卷 339-341,359页

作者：许东周健田德英黄元成宋佩辉华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科湖北武汉430030

目的:构建pEGFP-N1/CpG-HBcAg(ISS)真核表达载体,探讨乙肝病毒核心抗原(HBcAg)在树突状细胞(DC)中的表达,为研制乙肝治疗性疫苗奠定基础。方法:根据HBcAg基因序列,设计合成两对引物,在引物中引入针对人敏感的CpG基序和不含CpG的片段,用... 详细信息

目的:构建pEGFP-N1/CpG-HBcAg(ISS)真核表达载体,探讨乙肝病毒核心抗原(HBcAg)在树突状细胞(DC)中的表达,为研制乙肝治疗性疫苗奠定基础。方法:根据HBcAg基因序列,设计合成两对引物,在引物中引入针对人敏感的CpG基序和不含CpG的片段,用PCR方法从慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增出HBcAg基因片段,将扩增产物与pEGFP-N1连接,构建重组体pEGFP-N1/CpG-HBcAg,进行酶切、PCR及测序鉴定;分离人外周血单个核细胞(PBMC),体外诱导分化为DC,通过脂质体将重组质粒pEGFP-N1/CpG-HBcAg和空载体分别转染DC,Western blot检测HBcAg在DC的表达。结果:HBcAg基因体外扩增产物大小为530bp。所构建的pEGFP-N1/CpG-HBcAg经双酶切及PCR鉴定,与预期片段的大小相符。测序结果与GenBank中收录的HBcAg全长序列一致,表明pEGFP-N1/CpG-HBcAg真核表达体构建正确;PBMC体外成功刺激分化为DC,HBcAg可在DC中表达。结论:成功构建了真核重组表达载体pEGFP-N1/CpG-HBcAg,且可在DC中表达,为CpG的功能研究和乙型肝炎治疗性疫苗的研制奠定基础。

关键词：乙肝病毒核心抗原 CpG基序树突状细胞 Toll样受体

禽类血管活性肠肽与乙肝病毒核心抗原融合基因的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华南农业大学学报 2001年第3期22卷 60-63页

作者：施振旦黄运茂曹永长毕英佐华南农业大学动物科学系广东广州510642

:在制备以禽类血管活性肠肽 (VIP)为基础的基因工程疫苗工作中 ,选择乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)作为载体来提高鹅VIP的免疫原性 .首先将克隆于鹅VIPcDNA和HBc基因第 1至 435bp的序列片段先后插入到质粒pRSETA的BamHI\EcoRI和NheI\BamHI... 详细信息

:在制备以禽类血管活性肠肽 (VIP)为基础的基因工程疫苗工作中 ,选择乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)作为载体来提高鹅VIP的免疫原性 .首先将克隆于鹅VIPcDNA和HBc基因第 1至 435bp的序列片段先后插入到质粒pRSETA的BamHI\EcoRI和NheI\BamHI克隆位点之间 ,构建成VIP序列位于HBc序列之后的VIP融合基因的重组质粒pHBc -VIP .其次将HBc第 1至 2 2 5bp序列的扩增片段和HBc第 2 44bp之后包括VIP的序列经扩增、EcoRI酶切、连接、再扩增的片段先后插入到质粒pBSKS + / -的BamHI\PstI和PstI\HindIII克隆位点 ,构建成VIP插入到HBc基因中间 (HBcAg的第 75和 82位氨基酸之间 )融合基因的重组质粒pVIP HBc .

关键词：血管活性肠肽乙肝病毒核心抗原融合基因禽类