检索结果-南通市图书馆

作者：叶媛媛重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白诱导上皮细胞间质化转变和肝细胞肝癌进程的机制及SIP1在其中发挥的作用。方法:1、pHBx质粒转染SMMC-7721细胞与HepG2细胞后,运用Transwell实验观察细胞迁移能力变化,检测细胞中SIP1及EMT相关蛋白的表达情况... 详细信息

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白诱导上皮细胞间质化转变和肝细胞肝癌进程的机制及SIP1在其中发挥的作用。方法:1、pHBx质粒转染SMMC-7721细胞与HepG2细胞后,运用Transwell实验观察细胞迁移能力变化,检测细胞中SIP1及EMT相关蛋白的表达情况。2、构建稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-X,运用Trasnwell实验观察细胞迁移能力变化,运用Western-blot、qPCR及免疫荧光技术检测细胞SIP1及EMT相关蛋白的表达情况。3、siHBx质粒转染HepG-X细胞,或者在表达HBx的HepG2细胞中敲减SIP1,用Western-blot验证HBx及SIP1敲减情况并检测相关蛋白的表达水平。4、用质粒pRL-PK与pGL3-Basic或pGL3-E-cadherin-luc共转染由HBx处理的肝癌细胞系,酶标仪检测相对荧光素活性。5、HBX转染HepG2细胞12、24、36及48h后,用q-PCR检测各时间点E-cadherin mRNA的变化,选取mRNA发生明显变化的时间作为最佳时间点,用ChIP检测该时间点的E-cadherin基因启动子与SIP1结合情况。选择以下位点进行分析:转录起始位点附近E-box区域、转录起始位点上下游远端区域。6、用质粒pGL3-E-cadherin-luc或者pGL3-E-cad-MUT-luc与pRL-PK共转染由HBx及shSIP1处理的HepG2细胞,酶标仪检测相对荧光素酶活性。7、选取TSA的浓度范围(依推荐浓度为中间值),用不同浓度的TSA分别作用HepG2细胞及HepG2-X细胞72h,每24h更换一次新鲜液体,WB检测各组细胞蛋白表达水平确定TSA最佳作用浓度;采用最佳浓度TSA刺激HepG2细胞及HepG2-X并在72h后检测E-cadherin及HDAC1蛋白表达水平。8、用质粒pGL3-E-cadherin-luc与p RL-PK共转染由TSA以及SIP1质粒或者shSIP1处理的稳定表达HBx的HepG2细胞,酶标仪检测E-cadherin启动子的相对荧光素酶活性。9、HepG2细胞分别转染pcDNA3.1+shControl/pHBX+shControl/pHBX+shSIP1,用ChIP检测E-cadherin基因启动子区结合水平及组蛋白修饰事件。10、通过Co-IP检测HBx、SIP1及HDAC1在肝癌细胞内的相互作用,免疫荧光技术检测HBx及SIP1在细胞共同定位。11、运用CCK8实验检测HBx过表达及SIP1敲减后对肝癌细胞增殖的影响,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。12、动物实验:将HepG2和两组HepG2-X分别转染shControl/shControl/shSIP1并扩大培养,通过腋下分别注入三组4-6周龄裸鼠(荷瘤鼠)体内,约四周时间后观察肿瘤大小并通过组织蛋白提取检测相应蛋白的表达水平;同时取部分新鲜肿瘤组织切成小块状种植于三组6-8周龄裸鼠(种瘤鼠)肝脏上造成肝脏原位肿瘤模型,待原位肝脏肿瘤模型小鼠自然死亡后,取各小鼠内脏器官做HE染色,观察肿瘤转移情况。结果:1、HBx使肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721细胞迁移能力提高,细胞内蛋白和mRNA发生变化:上皮化标志物E-cadherin减少,SIP1增加及间质化标志物Vimintin增加。2、稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-X构建成功,Transwell实验结果示该细胞迁移能力提高,细胞内SIP1蛋白和mRNA增加,E-cadherin减少;而敲减HepG-X细胞内HBx后,细胞内SIP1蛋白减少,而E-cadherin表达量增加。3、在表达HBx的HepG2细胞中敲减SIP1后,细胞的迁移能力下降,Western-blot及免疫荧光结果示E-cadherin增加而Vimintin减少。4、HBx对E-cadherin启动子活性有明显抑制作用,TSA、SIP1过表达及敲减均影响HBV X对E-cadherin启动子活性的作用。5、ChIP结果显示:过表达HBx的HepG2细胞中SIP1与E-cadherin基因结合水平发生变化,在转录起始位点附近区域呈明显升高(但远离转录起始位点的远端上下游区域则无明显变化)。同时,过表达HBx可以增加HDAC1与E-cadherin基因启动子结合水平,而SIP1敲减则降低这种结合。6、HBx导致的E-cadherin表达量减少可在一定程度上被TSA恢复。7、Co-IP显示HBx、SIP1及HDAC1在肝癌细胞内具有相互作用,免疫荧光技术的结果表明三者在细胞核内有共同定位区域。8、HBx促进肝癌细胞增殖,抑制凋亡,而敲减SIP1则达到相反效果;过表达HBx促进人肝癌细胞周期由G0/G1期向S期过渡,而敲减SI

关键词：肝癌 SIP1 乙型肝炎病毒上皮细胞间质化转变

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Snail对宫颈癌细胞侵袭转移的影响

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华中医学杂志 2009年第5期33卷 225-228页

作者：纪腾夏曦胡问成方勇王世宣周剑峰卢运萍马丁华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心武汉430030

目的研究Snail与宫颈癌侵袭转移间的关系,并探讨其分子机制。方法构建正义全长Snail真核表达载体并转染宫颈癌细胞系HeLa、SiHa。采用Western blot方法分析相关基因表达,细胞伤痕愈合实验,Trans well模型穿膜细胞计数检测细胞侵袭转移... 详细信息

目的研究Snail与宫颈癌侵袭转移间的关系,并探讨其分子机制。方法构建正义全长Snail真核表达载体并转染宫颈癌细胞系HeLa、SiHa。采用Western blot方法分析相关基因表达,细胞伤痕愈合实验,Trans well模型穿膜细胞计数检测细胞侵袭转移能力。结果①在转染pEGFPC1/Snail的宫颈癌细胞株HeLa、SiHa中E-cadherin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调(P细胞系HeLa、SiHa转染正义全长Snail真核表达载体,12h细胞伤痕愈合能力显著提高(P细胞12h穿膜细胞数明显增多(P细胞株HeLa、SiHa的侵袭转移潜能。结论转录因子Snail促进宫颈癌上皮细胞间质化转变(EMT),并提高其侵袭转移能力。

关键词： Snail 宫颈癌上皮细胞间质化转变上皮细胞钙黏蛋白

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SiRNA干扰FOXF2对人宫颈癌Hela细胞的上皮-间质转化的影响

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中国现代医药杂志 2017年第5期19卷 6-10页

作者：刘丽敏刘植华何芳广东省深圳市妇幼保健院 518000

目的研究siRNA干扰叉头框转录因子F2(forkhead box F2,FOXF2)对人宫颈癌Hela细胞的上皮-间质转化的影响。方法采用Real Time-PCR、Western blot分别检测siRNA干扰FOXF2前后Hela细胞中FOXF2mRNA、蛋白的表达变化来验证转染成功;同时用RT-... 详细信息

目的研究siRNA干扰叉头框转录因子F2(forkhead box F2,FOXF2)对人宫颈癌Hela细胞的上皮-间质转化的影响。方法采用Real Time-PCR、Western blot分别检测siRNA干扰FOXF2前后Hela细胞中FOXF2mRNA、蛋白的表达变化来验证转染成功;同时用RT-PCR检测siRNA干扰FOXF2前后,Hela细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、Snail、Twist、P53、E2F1、RBmRNA的变化;Western blot检测siRNA干扰FOXF2前后,Hela细胞中E-cadherin、vimentin、Snail、P53、E2F1蛋白的变化。结果 siRNA干扰FOXF2后,RT-PCR、WB检测显示siRNA-FOXF2 1415组FOXF2的蛋白、mRNA均明显下降,验证转染率较高(P细胞的上皮间质转化(EMT),并加速了肿瘤的进展。

关键词：宫颈癌 Hela细胞上皮细胞间质化转变上皮细胞钙黏蛋白

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砷诱导人结肠癌细胞迁移的分子机制探究

砷诱导人结肠癌细胞迁移的分子机制探究

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中国毒理学会第十次全国毒理学大会

作者：张睿佳孙琎陈保卫水产动物疫病防控与健康养殖全国重点实验室中山大学生命科学学院南方海洋科学与工程广东省实验室中山大学海洋科学学院

亚砷酸盐(iAsIII)诱导肿瘤细胞的迁移与癌症转移密切相关。因此,了解iAsIII暴露后肿瘤细胞迁移的转录和代谢特征对探究iAsIII暴露和癌症发生发展的关系具有重要的意义。我们利用转录组学和非靶向代谢组学方法,并结合比较毒理学数据库(C... 详细信息

亚砷酸盐(iAsIII)诱导肿瘤细胞的迁移与癌症转移密切相关。因此,了解iAsIII暴露后肿瘤细胞迁移的转录和代谢特征对探究iAsIII暴露和癌症发生发展的关系具有重要的意义。我们利用转录组学和非靶向代谢组学方法,并结合比较毒理学数据库(CTD)的生物信息学分析,构建iAsIII暴露后人类结直肠癌细胞(DLD-1)的功能基因和代谢物的交互网络。在iAsIII暴露组中,DLD-1细胞通过Transwell膜的数量至少是对照组的6倍。iAsIII处理后,ZEB1和SLUG的表达显著上调,而CRB2的表达下调(P细胞发生了上皮-间质转化(EMT)。同时,在iAsIII处理下,SLUG增强了整合素和胶原介导的生物粘附。iAsIII促进基质金属酶(MMP)基因(例如:MMP1,MMP3和MMP14)的表达,基质金属酶具有降解细胞外基质的功能。此外,iAsIII暴露引起了DLD-1细胞的自噬(NES=1.91,P细胞的自噬来清除受损的线粒体。在代谢特征方面,iAsIII可显著干扰谷氨酰胺代谢,并且补充谷氨酰胺能有效增强DLD-1细胞的迁移。CTD分析进一步显示,EMT和生物粘附是iAsIII诱导结直肠癌细胞迁移的关键事件。总之,我们的结果表明,iAsIII可通过一系列细胞事件促进DLD-1细胞迁移,包括激活EMT、改变细胞粘附、MMP依赖性基质降解,同时伴有特异性的谷氨酰胺代谢。

关键词：砷上皮细胞间质化转变细胞外基质谷氨酰胺

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Twist和E-cadherin在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及其意义

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浙江预防医学 2015年第2期27卷 137-141页

作者：赵建珍詹宏马俊彦林俊浙江大学医学院附属妇产科医院浙江杭州310006

目的探讨上皮间质转化因子Twist1、Twist2和上皮黏附分子E-cadherin在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及其意义。方法采用SP免疫组织化学法检测24例正常内膜(正常对照组)和卵巢型子宫内膜异位症异位内膜I-II期24例及III-IV期30例(异位组)... 详细信息

目的探讨上皮间质转化因子Twist1、Twist2和上皮黏附分子E-cadherin在卵巢型子宫内膜异位症中的表达及其意义。方法采用SP免疫组织化学法检测24例正常内膜(正常对照组)和卵巢型子宫内膜异位症异位内膜I-II期24例及III-IV期30例(异位组)的Twist1、Twist2及E-cadherin蛋白的表达染色评分分值情况,并作不同组间的比较。结果 Twist1、Twist2染色评分异位组I-II期(4.25±0.79,3.83±0.96)及IIIIV期(4.67±0.88,4.30±0.95)均高于正常组(3.50±0.83,3.54±0.88)(P均细胞侵袭转移能力的增强可能与Twist1、Twist2的高表达和E-cadherin的低表达有关。

关键词：子宫内膜异位症 Twist1 Twist2 E-cadherin 上皮细胞间质化转变

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