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“禽康散”对DPV和DHV感染鸭胚及成纤维细胞的保护效应研究

“禽康散”对DPV和DHV感染鸭胚及成纤维细胞的保护效应研究

引用

作者：刘小雪四川农业大学

学位级别：硕士

鸭瘟是由鸭瘟病毒(DPV)引起鸭和鹅的一种急性接触性传染病。不同年龄和品种的鸭均可感染该病毒,以麻鸭、番鸭和绵鸭感染性最高。在自然流行中,成年鸭和产蛋母鸭发病和死亡较严重。鸭病毒性肝炎是由鸭病毒性肝炎病毒(DHV)引起小鸭的一种... 详细信息

鸭瘟是由鸭瘟病毒(DPV)引起鸭和鹅的一种急性接触性传染病。不同年龄和品种的鸭均可感染该病毒,以麻鸭、番鸭和绵鸭感染性最高。在自然流行中,成年鸭和产蛋母鸭发病和死亡较严重。鸭病毒性肝炎是由鸭病毒性肝炎病毒(DHV)引起小鸭的一种高度致死性病毒传染病。病的特征是发病急、传播快、死亡率高。本病发病急,传播迅速,一般死亡多发生在3-4d内。雏鸭的发病率和死亡率均很高,1周龄内的雏鸭病死率可达95%。鸭瘟和鸭病毒性肝炎主要通过疫苗接种种鸭以及雏鸭来预防。众多文献报道,多种中药的有效成分在细胞内和胚内对病毒具有明显的拮抗作用。同时,通过近几年的研究表明,复方中药“禽康散”对禽类的多种细菌性疾病、病毒性疾病均有预防和治疗作用,对机体免疫力的提高亦有促进作用。鉴此,开展了“禽康散”对鸭瘟病毒和鸭病毒性肝病毒的抑制作用研究。本试验以复方中药“禽康散”的水煎剂为研究对象,在鸭胚和鸭胚成纤维细胞两个层面上研究其对鸭瘟和鸭病毒性肝炎病毒的抑制效果及其作用机理,为更深入研究该中药方剂对鸭传染病的防治提供试验数据和支持。试验一、“禽康散”对DPV、DHV感染鸭胚的保护效应研究将48枚10日龄非免疫鸭胚随机分为6组,每组8枚。中药杀毒组分别将100mg、25mg中药与0.1ml 100ELD50的病毒液先感作1h后进行鸭胚尿囊膜接种;中药预防组先分别接种100mg、25mg中药24h后,再接种0.1ml 100ELD50的病毒液;阳性对照组接种0.1ml 100ELD50病毒液和0.1ml细胞维持液;阴性对照组接种0.2ml PBS液。试验结果：阳性对照组鸭胚分别在120h、144h内全部死亡;高剂量预防组(1 OOmg禽康散)对DHV、DPV感染的鸭胚保护率分别为100%、87.5%;低剂量预防组(25mg禽康散)对DHV、DPV感染的鸭胚保护率分别为62.5%、50%;高剂量杀毒组(100mg禽康散)对DHV、DPV感染的鸭胚保护率分别为50%、25%;低剂量杀毒组(25mg禽康散)对DHV、DPV感染的鸭胚保护率分别为25%、12.50%。试验结果表明,“禽康散”在10日龄鸭胚内对DHV和DPV具有显著的杀灭和阻断感染的作用。试验二、“禽康散”对鸭胚成纤维细胞(DEF)增殖的影响取培养良好的DEF培养板,每孔分别加入0、2-4、2-5、2-6、2-7、2-8g/ml中药提取液100μl,每个浓度重复4孔;重复5个细胞板。分别在加药后12h、24h、36h、48h、60h时各取1个细胞板,用MTT法测定细胞增殖情况。试验结果表明,“禽康散”对鸭胚成纤维细胞的最大安全浓度为2-4g/ml,在2-4-2-8g/ml浓度范围内对细胞有显著的增殖作用,其中2-5g/ml的中药提取液对DEF的增殖作用最强。试验三、“禽康散”对DPV和DHV人工感染鸭胚成纤维细胞的保护效应研究采用了三种不同加样方式：①不同浓度药液(2-4-2-8g/ml)与100TCID50病毒液(DHV、DPV)等体积混合后37℃作用4h,取200μl接种到DEF内;②先接种100μl病毒液,4h后再分别加入各浓度梯度药液100μl;③先加入各浓度药液100μl,4h后再接种病毒100μl。空白对照组(细胞维持液200μl);阳性对照组(DHV或DPV病毒100μl,细胞维持液100μl)。结果表明：“禽康散”提取液各浓度均在一定程度上降低了DHV、DPV抑制DEF生长的作用;先加入药液的中药预防组效果优于其余两种。禽康散减弱DHV对DEF的抑制作用在2-6-2-4g/ml浓度时,采用先加药液后接种病毒的方式效果最好,与药物阴性对照组相比,差异极显著(P禽康散减弱DPV对DEF的抑制作用在2-5-2-4g/ml浓度时,采用先加药液后接种病毒的方式效果最好与药物阴性对照组相比,差异极显著(P<0.01)。

关键词： DPV DHV “禽康散”提取液鸭胚成纤维细胞

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