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il-37基因启动子的克隆及其荧光素酶报告基因载体的构建

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生物技术 2015年第6期25卷 520-523,551页

作者：朱建冬梁庄严王森侯为烨邓小红陈章权广东医学院广东省医学分子诊断重点实验室广东东莞523808 广东医学院医学检验学院广东东莞523808

[目的]克隆白介素-37(il-37)基因启动子,构建其荧光素酶报告基因载体,并分析活性。[方法]用PCR方法扩增il-37基因5'端上游区3个不同长度的启动子片段,分别克隆入荧光素酶报告基因载体p GL3,构建il-37基因启动子荧光素酶报告基因质粒。... 详细信息

[目的]克隆白介素-37(il-37)基因启动子,构建其荧光素酶报告基因载体,并分析活性。[方法]用PCR方法扩增il-37基因5'端上游区3个不同长度的启动子片段,分别克隆入荧光素酶报告基因载体p GL3,构建il-37基因启动子荧光素酶报告基因质粒。将所构建的质粒转染HEK-293细胞,通过双荧光素酶报告基因系统分析启动子的转录活性。[结果]754、1 017、2 043 bp等3个il-37启动子片段正确亚克隆入荧光素酶报告基因载体,重组质粒转染HEK-293细胞后,双荧光素酶活性分析显示1 017 bp的启动子片段具有较强转录活性,约为对照组(空载体p GL3-basic)的10.9倍。[结论]成功克隆il-37基因启动子,构建了大小为1 017 bp的il-37基因启动子荧光素酶报告基因载体,为il-37表达的调控机制的研究提供有效的工具。

关键词：白介素-37 启动子荧光素酶报告基因载体

草鱼il-23不同亚基对比较菌性感染的应答及其二聚化特征

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草鱼IL-23不同亚基对比较菌性感染的应答及其二聚化特征

作者：许绪芳苏州大学

学位级别：硕士

目的:白细胞介素-23（interleukin-23,il-23）是一种炎性细胞因子,主要由活化的树突状细胞、巨噬细胞、内皮细胞和T细胞分泌,在生物体抗感染免疫应答中起到重要的生理及病理作用。il-23是由p19和p40两个亚基通过二硫键相连接形成的异源... 详细信息

目的:白细胞介素-23（interleukin-23,il-23）是一种炎性细胞因子,主要由活化的树突状细胞、巨噬细胞、内皮细胞和T细胞分泌,在生物体抗感染免疫应答中起到重要的生理及病理作用。il-23是由p19和p40两个亚基通过二硫键相连接形成的异源二聚体,只有当p19和p40共同表达才具有生物学功能。多种鱼类已鉴定出三种p40同源基因p40a/b/c（p40a、p40b、p40c）,但它们是否都能与p19形成异源二聚体,目前还没有确凿的证据。众所周知,草鱼是中国“四大家鱼”之一,是我国重要的淡水养殖鱼类,但由于其易受各种病原菌和病毒的危害,引起炎症反应甚至发生聚集性死亡,导致养殖户经济损失严重。本研究旨在明确p40a/b/c与p19基因在正常草鱼组织中的表达差异、对细菌性感染的应答反应,以及它们之间形成异源二聚体的特征,预期为鱼类肠道炎症的病理机制研究奠定基础。方法:（1）通过NCBI获取草鱼p19及p40a/b/c的完整mRNA序列,设计相应qPCR引物,运用qPCR技术检测上述基因在健康草鱼以及使用嗜水气单胞菌腹腔刺激草鱼24 h后各组织中的转录水平;另采用腹腔注射和肛灌两种方式使草鱼感染嗜水气单胞菌,分别于1 d、3 d、7 d检测草鱼肠道组织中p19及p40a/b/c的相对表达量。（2）根据p19及p40a/b/c完整编码区序列,设计普通PCR引物获得各ORF序列,基于原核表达载体pET32a（+）及大肠杆菌原核表达系统重组表达p19及p40a/b/c融合蛋白（rgcp19、rgcp40a/b/c）,以割胶纯化的rgcp40a/b/c为免疫原;另根据p19完整氨基酸序列设计短肽并与载体KLH交联成rgcp19-KLH,作为p19多克隆抗体的免疫原,制备抗草鱼rgcp40a/b/c及p 19多克隆抗体（rgcp40a/b/c pAb、rgcp19 pAb）,通过琼脂糖免疫双扩散及ELISA实验检测多抗效价,Western blot验证其特异性。（3）利用制备的兔源rgcp19 pAb及鼠源rgcp40a/b/c pAb,通过Western blot 验证上述基因在草鱼肾组织细胞（Ctenopharyngodon idella kidney,CIK）的特异性表达,以及细菌脂多糖（LPS）刺激CIK后il-23各亚基的表达变化。（4）利用制备的兔源rgcp19 pAb及鼠源rgcp40a/b/c pAb通过免疫共沉淀实验（Co-IP）分析p19与p40a/b/c在草鱼CIK细胞中的相互结合的特征,另构建p19及p40a/b/c的真核荧光表达系统,通过脂质体转染小鼠胚胎成纤维细胞系（NIH-3T3）观察p19和p40的细胞共定位表达,明确p19及p40a/b/c形成il-23异源二聚体的特征;使用LPS、poly（I:C）刺激NIH-3T3细胞,观察il-23各异型体对抗感染的应答反应特性。结果:（1）p19及p40a/b/c在健康草鱼肌肉、肝脏、肠道、表皮、尾鳍、心脏、胸腺、脑、体肾、头肾、鳃和脾脏共12个组织及血液中均有表达。其中p19与p40c在鳃中表达量最高,其次为表皮和体肾;p40a在血液中表达量最高,其次是体肾、鳃;p40b在表皮中转录水平最高,其次是鳃、肠道、心脏、头肾。健康草鱼经注射嗜水气单胞菌感染24 h后,p19和p40的转录水平均发生变化。p19相对表达水平除了在心脏中基本没变化外,其余组织中都有不同程度的上调,其中头肾、血液、鳃和体肾上调幅度较大;p40a在鳃中上调幅度最大,其次是脾脏、胸腺和头肾,而在脑和体肾中基本没变化;p40b在头肾中上调幅度最大,其次是血液、表皮、胸腺,而在表皮和心脏中呈显著下调趋势;p40c在头肾、血液、鳃、肠道、脾脏、肝脏和体肾中的表达量显著上调,在表皮、心脏、尾鳍、肌肉、脑等多种组织中显著下调。腹腔注射嗜水气单胞菌至健康草鱼1 d、3d、7 d后在肠道组织中,p19及p40a/b/c的转录水平都是在第1 d显著上调,第3d上调幅度略下降,到第7 d显著下调且低于正常水平;肛灌方式下,p19的表达量在三个时间点都呈显著上调趋势,p40a与p40b的转录水平都是在第1 d显著上调,第3 d下调且显著低于草鱼肠道中的正常表达水平,第7 d又呈上调趋势,p40c在第1 d显著上调,第3 d和第7 d恢复至基础状态。（2）p19及p40a/b/c的ORF长依次为567、990、939、897 bp,原核诱导表达融合蛋白大小依次为37.67、54.28、52.71和50.71 kDa;琼脂糖免疫双扩散实验表明,p40a/c多克隆抗体效价为1:32,p40b多抗效价为1:64;采用ELISA法检测p19多克隆抗体的效价,结果为1:80000;Western blot结果显示,所制备

关键词： p19、p40a/b/c 草鱼肠道炎症表达模式重组表达多克隆抗体 Co-IP 细胞共定位抗细菌、病毒

Correlation between Hypovitaminosis D Status and Hyperactivation of il-6/STAT3 Signaling in Clear Cell Renal Cell Carcinoma

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Proceedings of Anticancer Research 2023年第2期7卷 6-11页

作者： Juan Ji Deqiang Gu Jing-Yang Guo Wei Liang Xue Zhao Lin Li Song Li Department of Nephrology Affiliated Hospital of Hebei UniversityBaoding 071000Hebei ProvinceChina Department of Urology Affiliated Hospital of Hebei UniversityBaoding 071000Hebei ProvinceChina

Objective:To analyze serum vitamin D levels in patients with clear cell renal cell carcinoma(ccRCC)by flow cytometry and to investigate the relationship between hypovitaminosis D status and hyperactivation of il-6/STAT3 signaling in ***:Eighty patients diagnosed with ccRCC by our oncology department from January 2019 to December 2021 were selected as study subjects,and the control subjects were selected from patients who were receiving health check-up from our hospital(matched according to case group:control group,1:2),with 160 healthy *** serum samples collected from the case-control subjects were allowed to stand for 1–2 hours,centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes,and stored in a-80°C refrigerator,from which they were removed and thawed to measure 25-hydroxyvitamin D(25(OH)D)and interleukin 6(il-6)***:The blood calcium level of patients in the cancer group was significantly lower than that of patients in the non-cancer group,and the difference was statistically significant(P il-6 level of the cancer group was significantly higher than that of the non-cancer *** high vitamin D state,the il-6 level of the non-cancer group was higher than that of the cancer group,and the average concentration of il-6 in both the cancer group and the non-cancer group was significantly higher in low vitamin D state compared with high vitamin D state(P il-6 levels were elevated in the cancer group and circulating serum 25(OH)D levels were negatively correlated with il-6 *** addition,signal transducer and activator of transcription 3(STAT3)signaling in RCC tissues was activated in ccRCC patients and in those with low vitamin D status among the cancer group and was higher than that in those with high vitamin D *** results suggest that hypovitaminosis D status in ccRCC patients is associated wit

关键词： Clear cell renal cell carcinoma Vitamin D Interleukin 6 STAT3 Hyperactivation

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刺血疗法对AA大鼠局部il-1的影响

四川中医 2004年第6期22卷 14-15页

作者：刘雨星梁繁荣付弋余曙光黄迪君周奇志李学智成都中医药大学针灸推拿学院成都610075

目的 :探讨刺血疗法对佐剂性关节炎 (AA)大鼠炎症局部il - 1的调整作用。方法 :本实验以AA模型大鼠为研究对象 ,采用ilISA法检测局部il - 1的浓度。结果 :模型组炎症局部il - 1的含量明显高于正常组 (P 0 0 5 )。结论 :刺血疗法能降低A... 详细信息

目的 :探讨刺血疗法对佐剂性关节炎 (AA)大鼠炎症局部il - 1的调整作用。方法 :本实验以AA模型大鼠为研究对象 ,采用ilISA法检测局部il - 1的浓度。结果 :模型组炎症局部il - 1的含量明显高于正常组 (P 0 0 5 )。结论 :刺血疗法能降低AA模型大鼠局部il - 1炎症介质 ,从而降低炎症反应水平 ,达到泻热的作用。

关键词：刺血疗法 AA 大鼠佐剂性关节炎局部il-1 炎症反应白介素-1

狼疮性肾炎患者miR-155-5p与Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA的表达及临床意义

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狼疮性肾炎患者miR-155-5p与Caspase-1mRNA、IL-1βmRNA、IL-18mR...

作者：覃卿右江民族医学院

学位级别：硕士

目的:本实验通过检测狼疮性肾炎患者血液和尿液中miR-155-5p和炎症因子（Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA）的表达情况,分析miR-155-5p与Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA的关系,并分析miR-155-5p、Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA与一般临床资料的关系,探讨狼疮性肾炎患者miR-155-5p与炎症因子的表达关系,研究其可能的作用机制。方法:（1）收集2020年4月至2020年11月在右江民族医学院附属医院诊断明确并有疾病活动的狼疮性肾炎患者血液和新鲜中段晨尿液标本各35例。另外收集健康体检者血液和新鲜中段晨尿液标本各20例作为对照组。（2）通过RT-PCR分别测定外周血单个核细胞（PBMC）和尿沉淀细胞中miR-155-5p、Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA、il-18BPmRNA的表达情况。（3）狼疮性肾炎患者PBMC和尿沉淀细胞中miR-155-5p与炎症因子（Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA）表达情况进行相关性分析。（4）收集狼疮性肾炎患者的一般临床资料并分别与miR-155-5p、炎症因子（Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA）进行相关性分析。结果:（1）狼疮性肾炎患者PBMC中miR-155-5p、Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA、il-18BPmRNA较对照组表达均升高（P＜0.01）;尿沉淀细胞中Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA、il-18BPmRNA较对照组表达均升高（P＜0.01）,miR-155-5p较对照组表达降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。（2）狼疮性肾炎患者PBMC中miR-155-5p表达与Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA表达均呈正相关（P＜0.01）;尿沉淀细胞中miR-155-5p表达与Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA表达无明显相关,差异均无统计学意义（P＞0.05）。（3）狼疮性肾炎患者尿沉淀细胞中miR-155-5p表达与C3正相关（P＜0.05）;狼疮性肾炎患者PBMC和尿沉淀细胞中的Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA与C3均负相关（P＜0.05）;狼疮性肾炎患者PBMC中il-18mRNA与SLEDAI正相关（P＜0.05）。（4）狼疮性肾炎患者PBMC中miR-155-5p诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.786,Caspase-1mRNA诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.913,il-1βmRNA诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.885,il-18mRNA诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.881,与0.5相比均有统计学意义（P＜0.05）;狼疮性肾炎患者尿沉淀细胞中miR-155-5p诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.240,与0.5相比无统计学意义;狼疮性肾炎患者尿沉淀细胞中Caspase-1mRNA诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.851,il-1βmRNA诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.815,il-18mRNA诊断狼疮性肾炎的AUC值=0.899,与0.5相比均有统计学意义（P＜0.05）。结论:（1）狼疮性肾炎患者血液和尿液中Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA表达水平增高,PBMC中的miR-155-5p的表达水平增高。（2）在狼疮性肾炎PBMC中miR-155-5p表达和炎症因子（Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA）表达呈正相关性,miR-155-5p与Caspase-1、il-1β、il-18之间可能存在调控关系。（3）炎症因子（Caspase-1mRNA、il-1βmRNA、il-18mRNA）与临床炎症活动指标呈相关性,miR-155-5p与炎症因子对于狼疮性肾炎的诊断准确性较高,miR-155-5p与炎症因子可作为狼疮性肾炎的新型炎症标志物。

关键词：狼疮性肾炎 miR-155-5p Caspase-1 il-1β il-18

氟比洛芬酯对内热针治疗患者PG、il-6、il-8、TNF-α因子的影响

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中国现代药物应用 2018年第24期12卷 112-114页

作者：于俊芳金俊邹伟伟龚桢玉林吉力广东省中山市火炬开发区医院麻醉科 528430

目的分析氟比洛芬酯对内热针治疗患者前列腺素(PG)、白细胞介素-6(il-6)、白细胞介素-8(il-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)因子的影响。方法 150例行枕颈肩内热针治疗的患者,按照随机数字表法分为N组、K1组、K2组,每组50例。N组患者给予舒... 详细信息

目的分析氟比洛芬酯对内热针治疗患者前列腺素(PG)、白细胞介素-6(il-6)、白细胞介素-8(il-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)因子的影响。方法 150例行枕颈肩内热针治疗的患者,按照随机数字表法分为N组、K1组、K2组,每组50例。N组患者给予舒芬太尼0.4μg/kg治疗, K1组患者给予舒芬太尼0.4μg/kg+氟比洛芬酯1 mg/kg治疗, K2组患者给予氟比洛芬酯1 mg/kg+舒芬太尼0.1μg/kg治疗。对比三组患者的治疗开始时前(T1)、结束时(T2)、结束后6 h(T3)的一般指标和特异性指标以及不良反应发生情况。结果 T1时, N组、K1组、K2组的PG、il-6、il-8、TNF-α水平组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);T2、T3时, K1组、K2组的PG、il-6、il-8、TNF-α水平均显著低于N组,K1组的PG、il-6、il-8、TNF-α水平均显著低于K2组,差异具有统计学意义(P0.05);T2、T3时, K1组、K2组患者的视觉模拟评分法(VAS)评分显著低于N组, K1组患者的VAS评分显著低于K2组,差异具有统计学意义(Pil-6、il-8、TNF-α水平,镇痛效果显著。

关键词：内热针氟比洛芬酯注射液炎性因子

太平洋牡蛎中Cg-il-17和Cg-TGF-β的表达及其免疫作用的研究

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海洋学报 2015年第2期37卷 104-110页

作者：董洪亮刘乃国倪娜李彩玉郑静苗双滨州医学院附属医院临床医学实验室山东滨州256600

目的:探讨Cg-il-17和Cg-TGF-β在太平洋牡蛎中表达的组织定位、免疫作用及其可能的机制。方法:采用Real-time PCR、原位杂交和图像分析的方法进行研究。结果:实时定量PCR研究表明,Cg-il-17和Cg-TGF-β在弧菌感染后的太平洋牡蛎的鳃、外... 详细信息

目的:探讨Cg-il-17和Cg-TGF-β在太平洋牡蛎中表达的组织定位、免疫作用及其可能的机制。方法:采用Real-time PCR、原位杂交和图像分析的方法进行研究。结果:实时定量PCR研究表明,Cg-il-17和Cg-TGF-β在弧菌感染后的太平洋牡蛎的鳃、外套膜、心包液、唇须、消化道和闭壳肌中表达明显增强。原位杂交实验结果表明,Cg-il-17和Cg-TGF-β在未染菌组牡蛎的消化道、消化腺、鳃、唇须、外套膜中都有表达;染菌组以上各组织中的Cg-il-17和Cg-TGF-β表达量均有显著增高,而消化道、消化腺中的表达量明显高于其他组织,闭壳肌中也均有微弱表达;感染弧菌前后两种基因在性腺中均未见表达。相关性分析发现这两种基因表达量在唇须和外套膜中具有明显的相关性。结论:Cg-il-17和Cg-TGF-β具有多种生物学效应,且都参与了太平洋牡蛎的固有免疫反应;消化道可能是牡蛎主要的免疫反应器官之一;Cg-il-17和Cg-TGF-β在唇须和外套膜中可能存在调控关系或协同作用。

关键词：太平洋牡蛎牡蛎il-17 牡蛎TGF-β 组织定位免疫反应

痰热清注射液对合并COPD肺癌患者围手术期TNF-α、il-6、il-8和il-10的影响

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世界科学技术-中医药现代化 2015年第10期17卷 2083-2087页

作者：熊国江吴俊宏吕伟尚龙华熊汉鹏刘小雄王丽华江西中医药大学附属医院南昌330006 南昌市中西医结合医院南昌330006

目的:探讨痰热清能否减轻合并COPD肺癌患者术后炎性反应和肺损伤的程度。方法:选择39例合并COPD肺癌患者(痰热瘀肺型),随机分为被试组18例和对照组21例。所有患者行胸腔镜辅助下小切口手术。对照组用西医常规治疗,被试组加用痰热清注射... 详细信息

目的:探讨痰热清能否减轻合并COPD肺癌患者术后炎性反应和肺损伤的程度。方法:选择39例合并COPD肺癌患者(痰热瘀肺型),随机分为被试组18例和对照组21例。所有患者行胸腔镜辅助下小切口手术。对照组用西医常规治疗,被试组加用痰热清注射液。在术前1天(T1)、术后第1天(T2)、第3天(T3)、第7天(T4)采集血清标本,测定两组血清中TNF-α、il-6、il-8和il-10的浓度。结果:在T1、T2时间,两组患者体内TNF-α、il-6、il-8和il-10水平比较无显著性差异(P>0.05);在T3时间,被试组患者体内TNF-α、il-6和il-8水平低于对照组,差异具有统计学意义(Pil-10水平高于对照组,差异具有统计学意义(Pil-6和il-8水平低于对照组,差异具有统计学意义(Pil-6、il-8水平逐渐下降,与T2时间水平比较及相互比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:痰热清注射液能减少合并COPD肺癌围手术期间炎性细胞因子的释放,增加抗炎因子生成,从而减轻炎性反应程度,减轻肺脏损伤,保护肺功能。

关键词：痰热清注射液合并COPD肺癌炎性细胞因子肺损伤

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结肠癌组织中il-17的表达及临床意义

家庭医药.就医选药 2019年第2期 105-106页

作者：赵学勤王东明朴纪颖段旭峰中国人民解放军第266医院普通外科

目的:探讨在结肠癌组织中il-17的表达水平,并对其相关性与临床意义进行分析。方法:选取我院在2017年1月至2017年12月期间收治的50例结肠癌患者为研究对象,并选取同期30例正常结肠癌旁组织标本为对照。采用免疫组化技术对结肠癌组织与癌... 详细信息

目的:探讨在结肠癌组织中il-17的表达水平,并对其相关性与临床意义进行分析。方法:选取我院在2017年1月至2017年12月期间收治的50例结肠癌患者为研究对象,并选取同期30例正常结肠癌旁组织标本为对照。采用免疫组化技术对结肠癌组织与癌旁正常组织中的il-17表达水平进行检测,并对结肠癌临床病理特征与il-17表达水平的相关性进行分析。结果:在50例结肠癌组织中有24例(48.00%)il-17阳性高表达,而在30例正常癌旁结肠组织中,il-17表达水平均为阴性,差异具有统计学意义(Pil-17表达水平的相关性中,其与肿瘤TNM分期、淋巴结转移具有密切相关性(Pil-17阳性表达率较高,与年龄、性别以及肿瘤大小无相关性,但il-17表达水平与患者肿瘤TNM分期、淋巴结转移具有密切相关性,值得临床进一步研究与探讨。

关键词：结肠癌组织 il-17 表达水平临床意义