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miR-10b介导NKG2D调节脑胶质瘤细胞免疫效应的实验研究

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中国免疫学杂志 2024年第3期40卷 507-512页

作者：袁岗巨虎肖宗宇李文辉曹立新惠超杰青海大学附属医院神经外科西宁810001

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组... 详细信息

目的:观察微小核糖核酸-10b(miR-10b)对脑胶质瘤细胞免疫效应的调节作用并探讨其作用机制。方法:取人脑胶质瘤细胞U251进行培养和传代,获得处于对数生长期的细胞。按照1.0×105个/ml浓度制备细胞悬液,并设置对照组、过表达组、低表达组、空白组,每组6个复孔。对照组、过表达组、低表达组分别采用脂质体转染法转染阴性对照、miR-10b模拟物、miR-10b抑制剂,空白组予以等量无菌生理盐水。分离和培养1例健康志愿者外周血自然杀伤(NK)细胞。MTT法检测不同效靶比时NK细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测各组NK细胞表面NK细胞激活受体(NKG2D)表达,并检测各组人脑胶质瘤细胞U251表面主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A(MICA)、UL16结合蛋白2(ULBP2)、UL16结合蛋白3(ULBP3)表达。结果:对照组、过表达组、低表达组转染效率分别为(93.55±2.05)%、(95.67±3.14)%、(94.18±3.26)%;与对照组和空白组相比,过表达组miR-10b表达升高,低表达组miR-10b表达降低,差异均有统计学意义(P0.05);与对照组和空白组相比,过表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均降低、NKG2D表达降低,低表达组NK细胞不同效靶比杀伤活性均增高、NKG2D表达增高,差异均有统计学意义(P0.05);与对照组和空白组相比,过表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均降低,低表达组人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达均增高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:抑制miR-10b表达能够增加NK细胞表面NKG2D和人脑胶质瘤细胞U251表面MICA、ULBP2、ULBP3表达,增强NK细胞对人脑胶质瘤细胞U251的杀伤活性。

关键词：微小核糖核酸-10b 脑胶质瘤 NK细胞激活受体主要组织相容性复合物Ⅰ链相关基因A UL16结合蛋白2 UL16结合蛋白3

二十五味鬼臼丸激活PI3K/Akt/mTOR介导的自噬缓解去势大鼠骨质疏松作用

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中国实验方剂学杂志 2024年第22期 43-51页

作者：江宇楠张立雪段方林余瑶李凤辉马莉娜吴佩峰李长兴青海大学医学院西北民族大学

目的：探讨二十五味鬼臼丸通过激活磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路抑制过度自噬防治绝经后骨质疏松（PMOP）症的作用机制。方法：将雌性SD大鼠通过手术去势，随机分为假手术（Sham）... 详细信息

目的：探讨二十五味鬼臼丸通过激活磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路抑制过度自噬防治绝经后骨质疏松（PMOP）症的作用机制。方法：将雌性SD大鼠通过手术去势，随机分为假手术（Sham）组、手术（OVX）组、二十五味鬼臼丸（GJ）组、盐酸雷洛昔芬（RLX）组，每组10只。用酶联免疫吸附测定法（ELISA）、比色法检测血清中雌激素、骨代谢标志物和胫骨组织中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平，流式细胞术检测骨髓间充质干细胞内活性氧（ROS）水平，马松（Masson）染色观察胫骨近端病理变化，微计算机断层扫描技术（Micro-CT）观察胫骨微结构参数变化，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测胫骨组织中自噬效应蛋白（Beclin1）、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、微管相关蛋白5(Atg5)、PI3K、Akt、mTOR的表达情况。结果：与Sham组比较，OVX组大鼠血清雌二醇（E2）、钙离子（Ca2+）及骨组织T-SOD、GSH-Px、PI3K、Akt、mTOR mRNA明显下降（P<0.05,P<0.01）；胫骨内骨密度（BMD）、骨表面积和骨体积比（BS/BV）、骨小梁厚度（***）、骨小梁数目（Tb.N）、骨小梁连接性（Con）明显下降（P<0.05,P<0.01），骨骺生长板较薄，骨髓腔内充满脂肪空泡；磷（P）、MDA、ROS和Beclin1、LC3、Atg5 mRNA、蛋白水平及骨小梁分离度（***）明显升高（P<0.05,P<0.01）。与OVX组比较，GJ、RLX组大鼠血清E2、Ca2+及骨组织SOD、GSH-Px、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平明显上升（P<0.05,P<0.01）；胫骨内BMD、BS/BV、***、Tb.N、Con明显升高，骨骺生长板相对增厚，骨髓腔内脂肪空泡明显减少（P<0.05,P<0.01）;P、MDA、ROS、Beclin1、LC3、Atg5 mRNA、蛋白及***水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR信号通路，在OVX组中显著降低（P<0.01），在GJ、RLX组中显著增高（P<0.01）。结论：二十五味鬼臼丸降低氧化应激抑制自噬，防治绝经后骨质疏松，其机制可能激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬有关。

关键词：二十五味鬼臼丸绝经后骨质疏松氧化应激自噬磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路

盐梯度太阳池热性能数值模拟及其供热应用研究

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太阳能学报 2024年第9期45卷 414-420页

作者：郭永庆杨艳司杨陈晓弢麻林瑞青海大学新能源光伏产业研究中心青海省清洁能源高效利用重点实验室西宁810016

首先,在构建太阳池一维瞬态模型的基础上,利用有限差分法对太阳池在不同结构尺寸和提热速率下的热性能进行数值仿真分析;进一步,结合数值仿真结果设计太阳池集成供热系统,探讨其在普通居民建筑供热方面的供热性能。结果表明,太阳池内温... 详细信息

首先,在构建太阳池一维瞬态模型的基础上,利用有限差分法对太阳池在不同结构尺寸和提热速率下的热性能进行数值仿真分析;进一步,结合数值仿真结果设计太阳池集成供热系统,探讨其在普通居民建筑供热方面的供热性能。结果表明,太阳池内温度将会因其结构尺寸的不同而产生差异,且当采用最佳结构尺寸时,系统将获得最高温度和能源效率。同时,为实现太阳池存储热量的有效利用,系统提热量应低于其最大提热速率。对于深度为1.5 m的小型太阳池,其下对流层全年温度在66.68~106.77℃间变化,年均能效为2.52%。同时,当以此小型太阳池为建筑面积200 m^(2)的普通住户供应日常生活所需热能时,应配套太阳池面积至少为250 m^(2)。

关键词：太阳池盐度梯度数值分析效率储热供热

青藏高原野生宽叶羌活根际土壤微环境变化对光合作用的影响

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中国土壤与肥料 2024年第7期 184-191页

作者：胥生荣马瑞丽田国鹏祁焕华徐吉媛韩梅花青海大学医学院/青海省糖脂代谢疾病防控中医药重点实验室青海西宁8810001

为进一步研究青藏高原野生宽叶羌活药材形成对土壤环境的响应特性,明确土壤环境在宽叶羌活不同生长年限的差异,以不同生长年限野生宽叶羌活根际土壤为试验材料,研究根际土壤酶活性和有机碳含量的变化规律。结果表明,宽叶羌活对根围土壤... 详细信息

为进一步研究青藏高原野生宽叶羌活药材形成对土壤环境的响应特性,明确土壤环境在宽叶羌活不同生长年限的差异,以不同生长年限野生宽叶羌活根际土壤为试验材料,研究根际土壤酶活性和有机碳含量的变化规律。结果表明,宽叶羌活对根围土壤孔隙度的影响主要在土层0~40cm深处,5年生地块平均土壤孔隙度减小至对照的88.56%,对土层50~100cm处影响较小。土壤含水量在土层0~50cm处变化显著,前3年根围土壤含水量逐年增大,达到对照的105.59%,土层60cm以下的土壤水分含量变化规律一致且差异不显著。土壤有机碳含量逐渐下降,从对照到5年生地块,土壤总有机碳含量降低到原来的41.75%,其中,可溶性有机碳含量降低到原来的51.78%,颗粒有机碳含量降低到原来的18.30%,活性有机碳含量降低到原来的24.42%,易氧化有机碳含量降低到原来的21.76%,微生物量碳含量降低到原来的47.31%;可溶性有机碳含量在3年生和5年生土壤间差异不显著,活性有机碳和易氧化有机碳含量在2年生和3年生土壤间差异不显著。随着生长年限增长,土壤脲酶、多酚氧化酶和过氧化氢酶活性呈先降低后升高的变化趋势,土壤脱氢酶和蔗糖酶活性没有明显变化趋势,土壤磷酸酶活性呈显著升高的变化趋势。随着株龄增大,叶片表观量子效率显著减小,光补偿点、光饱和点和暗呼吸速率均显著增大;叶片的原初光能转换效率、光化学淬灭系数和光合电子传递效率均表现不同程度的减小,非光化学淬灭系数表现显著增大,综合分析表明,随着生长年限的增加,土壤理化活性和部分土壤酶及有机碳含量降低,土壤微环境对根系生物活性的影响作用增大,根系生存环境的变化影响植株对土壤水分和营养物质的吸收,植株叶片同化效率降低,进而影响宽叶羌活药材质量和品质形成。

关键词：青藏高原宽叶羌活有机碳土壤酶光合作用

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肝泡型棘球蚴病患者中性粒细胞胞外诱捕网表达及吞噬功能初探

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第1期36卷 25-33页

作者：仁增卓嘎樊海宁杨康洁王志鑫张耀刚芦永良王海久青海大学附属医院肝胆胰外科青海西宁810001 青海省包虫病研究重点实验室青海西宁810001 西藏自治区拉萨市人民医院麻醉科西藏拉萨850000 山东大学第二医院检验医学中心山东济南250033 青海大学附属医院检验科青海西宁810001

目的探索肝泡型棘球蚴病(hepatic alveolar echinococcosis,HAE)患者外周血中中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)表达水平及吞噬功能变化,以及其与临床炎性指标和肝生化指标间的相关性。方法选取2022年8月—202... 详细信息

目的探索肝泡型棘球蚴病(hepatic alveolar echinococcosis,HAE)患者外周血中中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)表达水平及吞噬功能变化,以及其与临床炎性指标和肝生化指标间的相关性。方法选取2022年8月—2023年6月青海大学附属医院肝胆外科收治的50例HAE患者作为HAE患者组,选择同期在该院体检中心体检的年龄、性别匹配的50例健康志愿者作为健康对照组,采用酶联免疫吸附法(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组研究对象外周血中NETs标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和中性粒细胞弹性酶(neutrophil elastase,NE)水平。同时,采用密度梯度离心法分离两组研究对象外周血中性粒细胞;经佛波酯(phorbol 12⁃myristate 13⁃acetate,PMA)体外刺激后,采用流式细胞术分别定量检测中性粒细胞胞外释放的MPO和瓜氨酸化组蛋白(citrullinated histone H3,CitH3)水平。采用流式细胞术比较两组研究对象中性粒细胞吞噬能力差异,采用Spearman相关分析评价HAE患者NETs标志物含量与临床炎性指标及肝生化指标水平间的相关性。结果HAE患者外周血中NETs标志物MPO、NE、CitH3水平分别为(417.15±76.08)、(23.16±6.75)、(33.93±18.93)ng/mL,均显著高于健康对照组[(255.70±80.84)、(11.92±3.17)、(19.52±13.89)ng/mL](t=10.28、10.65、4.34,P均<0.05);但HAE组中性粒细胞吞噬率[(70.85±7.32)%]较健康对照组[(94.04±3.90)%]下降(t=20.18,P<0.05);经PMA体外刺激后,HAE患者组中性粒细胞形成NETs能力较健康对照组显著提高。Spearman相关分析显示,HAE组外周血中性粒细胞吞噬水平和血小板与淋巴细胞比例(platelet⁃to⁃lymphocyte ratio,PLR)、中性粒细胞与淋巴细胞比例(neutrophil⁃to⁃lymphocyte ratio,NLR)、白细胞介素(interleukin,IL)⁃6、C反应蛋白(C reactive protein,CRP)水平呈负相关(rs=−0.515~−0.392,P均<0.05),NETs标志物MPO、NE水平与NLR、PLR、CRP、IL⁃6水平均呈正相关(rs=0.333~0.445,P均<0.05),与天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、直接胆红素和总胆红素水平亦呈正相关(rs=0.290~0.628,P均<0.001)。结论HAE患者体内NETs形成过多,影响中性粒细胞吞噬能力,导致机体炎症水平升高。NETs标志物有望作为肝脏疾病早期诊断、监测和严重程度评估的新型生物学标志物。

关键词：肝泡型棘球蚴病吞噬能力中性粒细胞胞外诱捕网炎症水平

谷朊粉对青稞-小麦粉混合面团网络结构的影响

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现代食品科技 2024年

作者：吴小红宋洋波冯晓宁白文洁鱼雷张义全许丹青海大学医学院公共卫生系青海大学农牧学院

青稞作为青藏高原地区的主要粮食作物，具有丰富的营养价值和健康益处，但因面筋蛋白含量较低，不易加工成型。谷朊粉作为一种天然面筋蛋白，能有效改善面团的流变学特性。为了改善青稞面团的加工性能，该文探究了谷朊粉添加对青稞-小... 详细信息

青稞作为青藏高原地区的主要粮食作物，具有丰富的营养价值和健康益处，但因面筋蛋白含量较低，不易加工成型。谷朊粉作为一种天然面筋蛋白，能有效改善面团的流变学特性。为了改善青稞面团的加工性能，该文探究了谷朊粉添加对青稞-小麦混合面团网络结构的影响。通过红外光谱、拉曼光谱、扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜等技术，分析了面团的分子结构、二硫键的变化以及面筋蛋白的微观结构。结果表明，添加谷朊粉可以显著增强面团中的氢键和二硫键含量，促进蛋白质二级结构的有序化，其中40%青稞粉+8%谷朊粉组的二硫键含量最高（7.49μmol/g）。此外，谷朊粉的加入有效改善了青稞粉对面筋网络结构的破坏，使面团表现出更好的整体结构稳定性。综上所述，该研究为青稞粉在面制品中的应用与开发提供了科学依据，并揭示了通过添加谷朊粉提高青稞面团质量的潜力。

关键词：青稞粉谷朊粉拉曼光谱红外检测二硫键

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青稞粉对小麦面筋蛋白网络结构的影响

现代食品科技 2024年

作者：吴小红宋洋波冯晓宁鱼雷李泽柴怡宁许丹青海大学医学部公共卫生系青海大学农牧学院

该文探究了不同添加比例（10%、20%和50%）的青稞粉（Highland Barley Flour,HBF）对小麦面筋蛋白网络结构的影响。热机械学特性检测表明，随着青稞粉添加比例的增多，面团吸水率、形成时间和蛋白质弱化度（C2）显著升高（P<0.05），而... 详细信息

该文探究了不同添加比例（10%、20%和50%）的青稞粉（Highland Barley Flour,HBF）对小麦面筋蛋白网络结构的影响。热机械学特性检测表明，随着青稞粉添加比例的增多，面团吸水率、形成时间和蛋白质弱化度（C2）显著升高（P<0.05），而淀粉糊化特性、淀粉的稳定性和淀粉的回生值都整体呈现下降的趋势，表明青稞粉对面团中的蛋白质弱化及淀粉的糊化特性有明显的影响。扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜结果显示，较高的添加比例会阻碍面筋蛋白和淀粉的相互作用，从而破坏面筋蛋白的网络结构。拉曼光谱和红外光谱结果显示，蛋白质的空间结构发生了改变，二硫键由相对稳定的扭-扭-扭结构向不稳定的反-扭-反结构转变。二硫键测定结果显示，对照组的二硫键含量最高（14.41μmol/g），当添加50%青稞粉后，二硫键含量相比对照组降低了21.44%。综上所述，添加不同比例的青稞粉均会破坏小麦面筋蛋白的稳定性及空间结构。该研究可为开发青稞蛋糕提供理论依据和实践参考。

关键词：青稞粉热机械学特性拉曼光谱红外检测二硫键小麦面筋蛋白

柴达木盆地昆特依盐湖可培养嗜盐细菌多样性研究

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生物技术通报 2024年第7期40卷 285-298页

作者：马想蓉马欣陈胤勋龙启福王嵘邢江娃青海大学医学部基础医学研究中心西宁810016

【目的】探究不同富集时间、培养盐度、稀释梯度、培养基等对氯化物型昆特依高盐盐湖可培养嗜盐细菌多样性的影响,确定嗜盐细菌的最佳分离培养条件,挖掘更多的环境嗜盐细菌资源。【方法】从昆特依盐湖中采集水泥混合样本,选取7种培养基... 详细信息

【目的】探究不同富集时间、培养盐度、稀释梯度、培养基等对氯化物型昆特依高盐盐湖可培养嗜盐细菌多样性的影响,确定嗜盐细菌的最佳分离培养条件,挖掘更多的环境嗜盐细菌资源。【方法】从昆特依盐湖中采集水泥混合样本,选取7种培养基和10%、18% NaCl两个盐度,采用富集培养法、平板稀释涂布法和平板分区划线法分离嗜盐菌;通过16S rRNA基因测序与BLAST序列比对确定菌株系统分类学地位。同时采用免培养Illumina MiSeq高通量测序技术分析昆特依盐湖细菌群落结构多样性特征。【结果】免培养昆特依盐湖样本中共鉴定到细菌39门64纲101目219科703属,其中假单胞菌门(Pseudomonadota)、厚壁菌门(Bacillota)、拟杆菌门(Bacteroidota)和放线菌门(Actinomycetota)为主要的优势菌门。根据菌落的大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起状态和边缘特征等,共分离出436株嗜盐菌,隶属于3门3纲6目9科28属77种,其中16株可能为潜在新种。3门为厚壁菌门(Bacillota)、假单胞菌门(Pseudomonadota)和放线菌门(Actinomycetota),且均为免培养测序结果中的优势菌门。在属水平上,芽孢杆菌属(Bacillus)、盐单胞菌属(Halomonas)、喜盐芽孢杆菌属(Halobacillus)、枝芽孢菌属(Virgibacillus)和卤水杆菌属(Salicola)为优势菌属。肿块芽孢杆菌属(Tuberibacillus)、越南蔷薇菌属(Rossellomorea)和谷氨酸杆菌属(Glutamicibacter)是首次从盐湖中分离得到。18% NaCl分离得到的菌株数量明显少于10% NaCl,且多样性较低,芽孢乳杆菌科(Sporolactobacillaceae)是该条件下分出的特有菌科。7种培养基中,1/2 RCA培养基分离效果最好。最佳富集培养时间为0、7和60 d,最佳样品稀释梯度为10^(-2)和10^(-3)。【结论】从昆特依盐湖中共分离出嗜盐细菌3门3纲6目9科28属77种。应用多种培养基,设置不同盐度、富集培养时间和稀释梯度等可显著提升可培养嗜盐菌的多样性。

关键词：嗜盐细菌生物多样性氯化物型盐湖分离培养基富集培养梯度稀释高通量测序

长期降水变化和氮添加对青藏高原高寒草原物种多样性和生产力的影响

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草地学报 2024年第5期32卷 1448-1458页

作者：邓彤彤周国英肖元明靳玉婷李长斌青海大学农牧学院青海西宁810016 中国科学院西北高原生物研究所青海西宁810008

在全球气候变化背景下,降水变化和氮添加草地物种多样性和生产力,但高寒草原研究较少,尤其是长期水氮控制试验。为此,本试验于青海省三角城种羊场紫花针茅高寒草原开展降水变化和氮(N)添加野外控制试验,从植被盖度、物种多样性指数及地... 详细信息

在全球气候变化背景下,降水变化和氮添加草地物种多样性和生产力,但高寒草原研究较少,尤其是长期水氮控制试验。为此,本试验于青海省三角城种羊场紫花针茅高寒草原开展降水变化和氮(N)添加野外控制试验,从植被盖度、物种多样性指数及地上生物量进行测定,研究高寒草原长期降水变化和N添加对其物种多样性及生产力的影响。降水增加处理使群落盖度显著增加,而降水减少使群落盖度显著降低;N添加使高寒草原物种多样性指数均显著降低;N添加与降水增加处理对地上生物量有显著的促进作用,但降水减少对地上生物量的影响则相反;地上生物量与物种多样性指数呈极显著的负相关关系(P<0.01)。本研究将为我国草原生态系统的保护及草原管理提供科学依据,同时也为后续的生态模型的建立和科学的预测提供理论依据。

关键词：物种多样性生产力降水变化氮添加高寒草原青藏高原