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基于UHPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS的太白茶化学成分研究

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中国现代应用药学 2024年第1期41卷 71-79页

作者：李莎莎狄志彪胡静李雅娟毛阿娟李凡李芳张红王卫锋陕西省中医药研究院西安710003 陕西中医药大学陕西咸阳712046

目的应用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS)对太白茶醇提物进行快速定性研究。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯... 详细信息

目的应用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS)对太白茶醇提物进行快速定性研究。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(–1),柱温30℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),负离子模式扫描,扫描范围m/z 80~1 200。根据高分辨质谱数据分析,参考文献及对照品确认,对太白茶中的化学成分进行快速、全面的定性分析。结果从太白茶共鉴定出了39种成分,包括多取代单苯环类化合物9种,缩酚酸类11种,缩酚酸环醚类5种,二苯并呋喃类2种,脂肪酸类10种及其他2种。结论该方法可快速、全面鉴定太白茶中的化学成分,其中3种成分(苔色酸、松萝酸、黑茶渍素)与对照品比对后准确鉴定,19种成分首次在太白茶中发现,可为太白茶药效物质研究及质量评价提供重要依据。

关键词：太白茶液质联用化学成分

基于转录组测序探讨金天格胶囊调控滑膜间充质干细胞外泌体miRNA和关节软骨细胞mRNA治疗大鼠骨关节炎的作用机制

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中国现代应用药学 2024年第11期41卷 1464-1475页

作者：王智超张雪张小飞史亚军郭东艳栾飞翟秉涛邹俊波袁普卫陕西中医药大学药学院陕西省中药基础与新药研究重点实验室陕西咸阳712046 陕西中医药大学附属医院陕西咸阳712046 陕西中医药大学第一临床医学院陕西咸阳712046

目的对金天格胶囊治疗骨关节炎的药效进行确证,基于高通量测序技术探讨滑膜间充质干细胞外泌体(synovial mesenchymal stem cell exosomes,SMSC-Exos)与关节软骨细胞(articular chondrocytes,ACs)治疗骨关节炎的潜在作用机制。方法采用... 详细信息

目的对金天格胶囊治疗骨关节炎的药效进行确证,基于高通量测序技术探讨滑膜间充质干细胞外泌体(synovial mesenchymal stem cell exosomes,SMSC-Exos)与关节软骨细胞(articular chondrocytes,ACs)治疗骨关节炎的潜在作用机制。方法采用Ⅱ型胶原酶诱导大鼠骨关节炎,通过一般行为学观察、双足平衡差异试验、机械足反射阈值、MicroCT观察与番红固绿染色进行药效验证。将SMSC、ACs在适宜浓度的含药血清中培养,对照组、模型组和金天格组ACs进行mRNA测序以及SMSC-Exos进行miRNA测序。筛选差异表达mRNA与差异表达miRNA,并进行靶基因预测。通过Venn图对SMSC与ACs的差异表达基因求交集得到共同差异表达基因,运用Cytoscape软件构建miRNA-m RNA调控网络。对共同差异表达基因进行表达趋势分析以及对差异表达基因mRNA与miRNA、Micro-CT药效指标与差异表达基因mRNA进行相关性分析。结果骨关节炎病理状态下,miRNA-23a-3p、miRNA-342-3p、miRNA-146b-5p、mi RNA-501-3p、miRNA-214-3p表达下调,miRNA-222-3p、miRNA-30e-3p、miRNA-676-3p、miRNA-192-5p表达上调(P<0.05),这些miRNA的表达均在金天格胶囊含药血清干预后逆转表达,且趋势明显。Micro-CT药效指标、m RNA与miRNA之间存在一定的相关性。结论金天格胶囊治疗骨关节炎的药效作用明显,其作用机制可能与促进SMSC-Exos靶向ACs转运miRNA进而调控Serpinb10、Ntn1、Il1b、Tgm2、Megf10、Il11、Cd40、Slc15a3、Pou2f2等基因有关。

关键词：骨关节炎转录组测序金天格胶囊滑膜间充质干细胞外泌体关节软骨细胞

经典名方清宁散HPLC指纹图谱及其质量标志物(Q-Marker)预测分析

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中草药 2024年第6期55卷 1946-1959页

作者：刘玉婷李菡赵宇晴周晶晶柯昌华王燕子赵倩倩谢晓林张德柱高鸿梁承远陕西科技大学生物与医药学院陕西西安710021 陕西盘龙药业集团股份有限公司陕西西安710025 陕西帕尼尔生物科技有限公司陕西西安710082

目的建立清宁散HPLC指纹图谱检测方法,并对其质量标志物(quality markers,Q-Marker)进行预测分析,为清宁散质量控制提供参考依据。方法基于指纹图谱和网络药理学方法,通过响应面优化法确定清宁散基准样品的最佳制备工艺;采用HPLC法建立... 详细信息

目的建立清宁散HPLC指纹图谱检测方法,并对其质量标志物(quality markers,Q-Marker)进行预测分析,为清宁散质量控制提供参考依据。方法基于指纹图谱和网络药理学方法,通过响应面优化法确定清宁散基准样品的最佳制备工艺;采用HPLC法建立清宁散指纹图谱,对共有峰进行归属和指认;基于可行性和可追溯性进行活性成分筛选,通过网络药理学构建“成分-靶点-通路”网络,分析清宁散潜在的Q-Marker。结果确定了清宁散中桑白皮、赤茯苓、甘草的最佳炮制工艺,清宁散HPLC指纹图谱共标定了39个共有峰,通过对照品色谱及质谱,指认出18个共有成分,分别为1号峰异鼠李素、2号峰甘草苷、3号峰芥子碱硫氰酸盐、4号峰β-胡萝卜苷、10号峰松苓新酸、15号峰去氢土莫酸、16号峰甘草酸铵、19号峰槲皮素、20号峰绿原酸、21号峰甘草查耳酮A、22号峰桑黄酮G、24号峰京尼平苷酸、26号峰桑皮苷A、29号峰桑辛素、31号峰槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷、34号峰毛蕊花糖苷、35号峰芹菜素、38号峰茯苓新酸A,相似度均大于0.93;经网络药理学分析,筛选出桑皮苷A、桑辛素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷、茯苓新酸A、京尼平苷酸、毛蕊花糖苷、甘草苷、甘草酸铵8个活性成分,进行“成分-靶点-通路”网络构建分析,富集的通路包括T细胞受体信号通路、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase-protein kinase B,PI3K-Akt)信号通路等,根据连接度分析,初步预测8个活性成分可能通过调节相关信号通路达到清肺止咳的作用。结论响应面优化结合指纹图谱和网络药理学分析预测清宁散治疗疾病的Q-Marker,所建立的方法操作简捷,结果准确,稳定性好,可用于清宁散的质量控制评价,也为进一步研究清宁散的作用机制提供参考。

关键词：经典名方清宁散响应面优化指纹图谱网络药理学质量标志物基准样品桑白皮赤茯苓甘草异鼠李素甘草苷芥子碱硫氰酸盐甘草酸铵

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一测多评法同时测定华山参中5个成分的含量

药物分析杂志 2024年第09期 1604-1612页

作者：张玉茹张红孟雪张瑜王娣陈娟陕西省中医药研究院

目的:建立一测多评（QAMS）法同时测定华山参中东莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯等成分的含量。方法:采用Agilent 5 TC-C18（250 mm×4.6 mm, 5μm）色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·mi... 详细信息

目的:建立一测多评（QAMS）法同时测定华山参中东莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯等成分的含量。方法:采用Agilent 5 TC-C18（250 mm×4.6 mm, 5μm）色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1,检测波长为210 nm和344 nm,柱温30℃,进样量10μL。以山莨菪碱为内参物，计算东莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯的相对校正因子，测定其含量，并与外标法（ESM）测定结果进行比较。结果:5个成分在各自范围内线性关系良好（r=1.000）,东莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯的相对校正因子分别为0.951 8、0.562 6、0.830 4、0.433 9,重复性较好。QAMS法计算所得10个产地华山参中东莨菪碱、山莨菪碱、东莨菪苷、莨菪碱、东莨菪内酯的含量与ESM实测值无显著性差异。结论:该方法准确稳定，重复性好，可用于华山参的质量控制。

关键词：华山参生物碱一测多评法(QAMS) 含量测定相对校正因子(RCF)

基于质量源于设计理念的热炎宁合剂提取工艺优化及提取过程评价研究

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中国中药杂志 2024年第12期49卷 3229-3241页

作者：张颖邱金清魏玄雷璇唐莹莹屈琼赵小梅张新博孙静罗伟宋逍陕西中医药大学陕西咸阳712046 中药制药与新药开发教育部工程研究中心北京100029 清华德人西安幸福制药有限公司陕西西安710043

热炎宁合剂是“秦药”优势中成药品种之一,该研究基于质量源于设计(quality by design, QbD)理念,对热炎宁合剂的提取工艺进行优化研究,以咖啡酸、虎杖苷、大黄素和白藜芦醇为关键质量属性(critical quality attributes, CQAs),采用Plac... 详细信息

热炎宁合剂是“秦药”优势中成药品种之一,该研究基于质量源于设计(quality by design, QbD)理念,对热炎宁合剂的提取工艺进行优化研究,以咖啡酸、虎杖苷、大黄素和白藜芦醇为关键质量属性(critical quality attributes, CQAs),采用Plackett-Burman试验确定料液比、提取温度和提取时间为关键工艺参数(critical process parameters, CPPs),通过星点设计-效应面法试验设计建立数学模型,构建设计空间并验证,获取热炎宁合剂最优的提取工艺为料液比11.84 g·mL^(-1)、提取温度81℃、提取2次。在最佳提取工艺下采用近红外光谱法(near infrared spectroscopy, NIRS)结合高效液相色谱法(HPLC)建立提取过程中CQAs的偏最小二乘法(partial least-square, PLS)定量模型,结果显示,4个CQAs定量模型的校正集相关系数(R_c)和验证集相关系数(R_p)均超过0.9,校正集均方根误差(RMSEC)分别为0.744、6.71、3.95、1.53μg·mL^(-1),验证集均方根误差(RMSEP)分别为0.709、5.88、2.92、1.59μg·mL^(-1)。表明该研究优化得到的热炎宁合剂提取工艺合理、可行且稳定可靠,所建立的NIRS定量模型具有良好的预测性,可用于提取过程中CQAs含量的快速测定,可为热炎宁合剂的工艺研究及质量控制提供实验基础。

关键词：质量源于设计热炎宁合剂关键质量属性关键工艺参数近红外光谱

太白茶HPLC指纹图谱的建立及UHPLC-QExactive Focus MS/MS联用分析

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药物分析杂志 2024年第4期44卷 585-593页

作者：李莎莎李雅娟王晓婷毛阿娟李凡李芳张红王卫锋陕西省中医药研究院西安710003 陕西中医药大学咸阳712046

目的:建立太白茶药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析方法,并运用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法对太白茶中的特征峰进行定性分析。方法:采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱... 详细信息

目的:建立太白茶药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析方法,并运用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)法对太白茶中的特征峰进行定性分析。方法:采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长254 nm,进样量10μL。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012年版”,建立指纹图谱并进行相似度评价。化学成分分析选用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS技术,采用Waters Acquity UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温30℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),负离子模式扫描,扫描范围m/z 80~1200。结果:建立的太白茶特征指纹图谱中,标定共有峰8个,10批太白茶药材相似度均≥0.9,各批次之间共有峰的相对保留时间RSD均<0.5%。对8个共有峰中的4个峰进行了结构指认,依次为鳞片衣酸、羊角衣酸、thamnoliadepsides B、坝巴酸。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法稳定可靠,专属性好,结合UHPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS的定性分析,可用于太白茶药材的整体质量综合评价。

关键词：太白茶高效液相色谱指纹图谱质量评价超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱定性分析

甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎证候疗效评价量表的初步研制：基于专家咨询和临床调查

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中国全科医学 2024年

作者：马文源祁烁商建伟陈晓珩李哲李会龙户蕊李璐司新颖丁治国北京中医药大学东直门医院甲状腺病科北京中医药大学孙思邈医院甲状腺病院

背景中医药治疗甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎疗效日益显著，在当前病证结合的诊疗模式下，中医证候疗效评价是最能体现中医药优势的评价指标，但目前大多数临床研究仍缺乏定量化、标准化的证候疗效评定方法。目的初步研制甲状腺功能... 详细信息

背景中医药治疗甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎疗效日益显著，在当前病证结合的诊疗模式下，中医证候疗效评价是最能体现中医药优势的评价指标，但目前大多数临床研究仍缺乏定量化、标准化的证候疗效评定方法。目的初步研制甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎证候疗效评价量表。方法研究时间为2023年8月—2023年12月。依据国际量表的研制方法，以中医理论为指导，构建量表的理论框架，在文献检索和课题组前期临床调查的基础上建立量表初始条目池，采用主观筛选法中的德尔菲专家咨询法，结合客观筛选法中的条目分布考察法、离散趋势法、克朗巴赫α系数法和相关系数法，对条目进行筛选。结果两轮专家咨询共回收有效问卷44份，专家积极系数为95.83%、100.00%，专家权威系数为0.827、0.831，筛选得到重要性评分较高的8个证素及具有疗效评价属性的71个四诊信息条目。临床调查共回收有效问卷369份，综合4种数理统计方法结合专家小组讨论，删除气滞证5个条目，气虚证4个条目，痰证3个条目，阴虚证8个条目，血瘀证3个条目，阳虚证6个条目，火（热）证5个条目，血虚证2个条目，初步形成包含8个证素、51个四诊信息条目的甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎证候疗效评价量表，其中气滞证9个条目，气虚证10个条目，痰证8个条目，阴虚证9个条目，血瘀证5个条目，阳虚证13个条目，火（热）证8个条目，血虚证8个条目。结论本研究初步研制出甲状腺功能正常的桥本甲状腺炎证候疗效评价量表，可为下一步条目的量化提供依据，并为此类量表的编制提供了可借鉴的方法。

关键词：桥本甲状腺炎甲状腺疾病甲状腺功能正常症状体征和证候证候疗效评价疗效评价量表专家咨询条目筛选

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纳米技术在骨质疏松症治疗中的研究进展

中国骨质疏松杂志 2024年第10期 1548-1552页

作者：郭志杰刘静黄驰欢王尊刘兰英李邗峻柏凌张鑫王胜徐道明南京中医药大学附属医院南京中医药大学南京市秦淮区中医医院

目的总结纳米技术在骨质疏松症治疗中的研究进展，展望其在临床上的应用前景。方法应用计算机检索Pubmed、中国期刊全文数据库(CNKI)中2006-2023年的相关文献。在标题、摘要、关键词中以“nano, osteoporosis, bone marrow mesenchyma... 详细信息

目的总结纳米技术在骨质疏松症治疗中的研究进展，展望其在临床上的应用前景。方法应用计算机检索Pubmed、中国期刊全文数据库(CNKI)中2006-2023年的相关文献。在标题、摘要、关键词中以“nano, osteoporosis, bone marrow mesenchymal stem cells(BMMSCs),treatment”或“纳米，骨质疏松，骨髓间充质干细胞，治疗”为检索词进行检索。选择与纳米技术治疗骨质疏松症密切相关的文章，优先选择时间最近且发表于权威杂志的文章。结果对筛选到的文献进行精选得到34篇文献进行综述。结论纳米技术由于其高靶向性、高利用率和低不良反应的特性，在骨质疏松症的治疗研究中备受关注。目前常用的纳米技术包括药物纳米化和纳米载药两大类。但目前纳米技术尚未在临床上应用于骨质疏松症的治疗，仍有许多问题待解决。

关键词：纳米技术骨质疏松症药物纳米化纳米载药

基于指纹图谱及化学模式识别方法优选蜜枇杷叶药材产地

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药物分析杂志 2024年第2期44卷 340-350页

作者：张新博汪芸兰雷璇张颖宋逍陕西中医药大学咸阳712046 中药制药与新药开发教育部工程研究中心北京100029

目的:基于高效液相色谱指纹图谱和化学模式识别方法,评价不同产地蜜枇杷叶的质量,优选出蜜枇杷叶的最佳产地。方法:采用Acclaim^(TM)120A C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱进行检测,流动相为0.2%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~5 m... 详细信息

目的:基于高效液相色谱指纹图谱和化学模式识别方法,评价不同产地蜜枇杷叶的质量,优选出蜜枇杷叶的最佳产地。方法:采用Acclaim^(TM)120A C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱进行检测,流动相为0.2%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~5 min,5%B;5~6 min,5%B→10%B;6~20 min,10%B;20~50 min,10%B→25%B;50~60 min,25%B),体积流量1.0 mL·min^(-1),检测波长327 nm,柱温30℃,进样量10μL。建立30批不同产地蜜枇杷叶的指纹图谱,采用指纹图谱结合化学模式识别的方法对不同产地蜜枇杷叶进行综合分析,对不同产地蜜枇杷叶进行聚类分析(cluster ***)、主成分分析(principal component ***)及综合评分,采用正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)筛选出不同产地蜜枇杷叶的差异标志物,根据综合评分优选出蜜枇杷叶的产地。结果:建立了30批蜜枇杷叶的指纹图谱,标定出12个共有峰,根据对照品指认出4个色谱峰,确定为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷;CA将30批蜜枇杷叶样品分为6类;经PCA提取出3个主成分,累计方差贡献率为84.315%;根据OPLS-DA筛选得到6个差异标志物,其中2个确定为金丝桃苷、绿原酸;根据综合评分筛选出蜜枇杷叶的较优产地为四川、广西、广东、陕西。结论:指纹图谱及含量测定过程中的精密度、重复性和稳定性均良好。指纹图谱与化学模式识别相结合方法可全面综合评价蜜枇杷叶质量,此方法稳定、可靠,可为蜜枇杷叶的产地研究提供有效的参考依据。

关键词：蜜枇杷叶指纹图谱化学模式识别主成分分析新绿原酸绿原酸隐绿原酸金丝桃苷