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牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究

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河北农业大学学报 2011年第4期34卷 87-90,98页

作者：于永生罗晓彤曹阳张立春王晓阳吉林省农科院畜牧分院吉林公主岭136100

为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导... 详细信息

为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染细胞,通过G418筛选9 d获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后,利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明：细胞贴壁后9 d可获取原代皮肤成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9 d即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶基因整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶基因在转基因传代细胞中得到有效转录。本研究为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了条件。

关键词：牛耳皮肤成纤维细胞线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因转染脂质体

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线虫fat-1基因密码子优化设计

中国畜牧兽医 2010年第10期37卷 68-72页

作者：杜新华赵志辉于浩李俊雅高雪许尚忠中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

本研究旨在优化线虫fat-1基因,使其在牛肌肉组织中高效表达,为进一步生产fat-1转基因肉牛提供目的基因。试验在不改变fat-1基因编码氨基酸序列的基础上,参考了11个牛肌肉蛋白相关基因的密码子使用频率,对fat-1基因进行了密码子优化。结... 详细信息

本研究旨在优化线虫fat-1基因,使其在牛肌肉组织中高效表达,为进一步生产fat-1转基因肉牛提供目的基因。试验在不改变fat-1基因编码氨基酸序列的基础上,参考了11个牛肌肉蛋白相关基因的密码子使用频率,对fat-1基因进行了密码子优化。结果发现,共改变了65个碱基,涉及65个密码子、7个氨基酸,约占fat-1基因总碱基数的5.38%,G+C含量从45.08%上升到50.04%,且分布均匀利于基因的表达。结构预测结果显示,该优化后的基因能够在牛肌肉中高效表达。

关键词： fat-1基因密码子优化牛肌肉蛋白

草原红牛胎儿成纤维细胞的分离培养及性别鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2012年第5期 11-14页

作者：张立春张国梁于永生朴海仙曹阳金海国吉林省农业科学院畜牧分院延边大学农学院

为了获得高质量的草原红牛胎儿成纤维细胞,试验以发育40 d的草原红牛胎儿为材料,采用组织块贴壁法及胶原酶消化法分离纯化草原红牛胎儿成纤维细胞,并绘制生长曲线,再以SRY基因为模板设计性别鉴定引物,通过对已知性别草原红牛血液基因组... 详细信息

为了获得高质量的草原红牛胎儿成纤维细胞,试验以发育40 d的草原红牛胎儿为材料,采用组织块贴壁法及胶原酶消化法分离纯化草原红牛胎儿成纤维细胞,并绘制生长曲线,再以SRY基因为模板设计性别鉴定引物,通过对已知性别草原红牛血液基因组PCR扩增检验所设计引物的性别特异性,最后采用基因组PCR方法鉴定分离得到的成纤维细胞的性别。结果表明:成功分离纯化出草原红牛胚胎成纤维细胞,经基因组PCR检验该细胞株性别为雄性。

关键词：草原红牛胚胎成纤维细胞体外培养性别鉴定

UCP3基因遗传多态性与中国西门塔尔牛生长及育肥性状的遗传效应分析

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中国农学通报 2012年第5期28卷 13-18页

作者：陈翠张立敏陈晓杰刘喜冬李姣张路培高会江高雪李俊雅许尚忠中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193

为了分析UCP3基因SNPs与中国西门塔尔牛生长及育肥性状的相关性。以118头中国西门塔尔育肥牛为研究材料,通过DNA测序和PCR-RFLP技术检测UCP3基因BglI酶切位点SNPs,并进行相关分析。UCP3-BglI酶切位点表现多态,且处于Hardy-Weinberg平衡... 详细信息

为了分析UCP3基因SNPs与中国西门塔尔牛生长及育肥性状的相关性。以118头中国西门塔尔育肥牛为研究材料,通过DNA测序和PCR-RFLP技术检测UCP3基因BglI酶切位点SNPs,并进行相关分析。UCP3-BglI酶切位点表现多态,且处于Hardy-Weinberg平衡状态。与部分育肥性状的相关分析表明,该位点与饲料转化率性状和平均日增重性状表现显著相关(P基因型个体均值显著优于AB和BB基因型个体,料肉比较低,日增重较高;与部分生长性状的相关分析发现在15月龄体高、体长和胸围性状,12月龄体高性状,8月龄体长性状中UCP3-BglI多态位点差异显著,AA基因型个体表型值显著高于其他或其中一个基因型值(P基因型个体胴体长、胴体胸深和背膘厚性状的表型值显著高于BB基因型个体(P基因型与优良的生长育肥性状显著相关,对A等位基因的选择有利于优良性状的改良。

关键词： UCP3 生长性状育肥性状关联分析

ctsd、ctsl基因的多态性与“雪龙”黑牛胴体性状相关性研究

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中国农学通报 2012年第2期28卷 6-9页

作者：陈晓杰吴蒙张立敏陈翠刘喜冬周正奎张猛黄萌刘利高雪许尚忠李俊雅高会江张路培李姣中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 大连雪龙产业集团有限公司大连116001

为了提高雪龙黑牛的胴体性状,进行新品种选育,以组织蛋白酶D、L(Cathepsin D,Cathepsin L)基因为候选基因,利用PCR-RFLP方法对114头雪龙黑牛F1代商品牛进行多态性检测,应用SAS9.2软件采用最小二乘拟合线性模型进行分析,结果表明,ctsd、c... 详细信息

为了提高雪龙黑牛的胴体性状,进行新品种选育,以组织蛋白酶D、L(Cathepsin D,Cathepsin L)基因为候选基因,利用PCR-RFLP方法对114头雪龙黑牛F1代商品牛进行多态性检测,应用SAS9.2软件采用最小二乘拟合线性模型进行分析,结果表明,ctsd、c581t位点与雪龙黑牛的经济性状无明显的相关性,ctsl基因Xma I位点与雪龙黑牛的三角牛腩厚显著相关,且AB型个体三角牛腩厚与AA和BB型个体三角牛腩厚差异显著。

关键词：雪龙黑牛 ctsd基因 ctsl基因胴体性状

基于高密度SNP芯片技术对中国西门塔尔牛SCD1基因与肉质性状的相关性分析

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畜牧兽医学报 2012年第6期43卷 878-886页

作者：张立敏张猛周正奎刘利刘喜冬陈翠陈晓杰朱淼袁峥嵘李姣许尚忠高会江高雪张路培李俊雅中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 东北农业大学动物科技学院哈尔滨150030

试验借助高密度SNP芯片技术在整个基因组范围内对223头中国西门塔尔牛群体进行基因分型,在SCD1基因上发现7个SNPs位点,对各SNP位点与西门塔尔牛肉质性状进行相关性分析。结果表明,SCD1基因的7个SNPs位点均与大理石花纹等级显著相关(P<0... 详细信息

试验借助高密度SNP芯片技术在整个基因组范围内对223头中国西门塔尔牛群体进行基因分型,在SCD1基因上发现7个SNPs位点,对各SNP位点与西门塔尔牛肉质性状进行相关性分析。结果表明,SCD1基因的7个SNPs位点均与大理石花纹等级显著相关(P基因型个体间脂肪颜色差异显著(P优质大理石花纹极显著相关(P<0.01);单体型组合H4H6与高剪切力值显著相关(P<0.05);各单体型组合对肉色和脂肪颜色影响不显著。

关键词：高密度SNP芯片中国西门塔尔牛 SCD1基因肉质性状单体型

5-aza-dC联合TSA对不同供体细胞来源牛核移植胚胎体外发育的影响

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天津农学院学报 2012年第2期19卷 19-23页

作者：丁向彬王轶敏葛秀国刘新峰李吉霞郭宏天津农学院动物科学系天津300384

为研究5-aza-dC和TSA提高核移植胚胎体外发育能力的作用是否有供体细胞特异性,实验选择皮肤成纤维细胞、胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞作为核供体细胞进行核移植,联合使用20 nM(72 h)5-aza-dC和50 nM(12 h)TSA处理供体细胞和重构胚,比较... 详细信息

为研究5-aza-dC和TSA提高核移植胚胎体外发育能力的作用是否有供体细胞特异性,实验选择皮肤成纤维细胞、胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞作为核供体细胞进行核移植,联合使用20 nM(72 h)5-aza-dC和50 nM(12 h)TSA处理供体细胞和重构胚,比较5-aza-dC+TSA对不同供体细胞来源核移植胚胎体外发育的影响。实验结果表明,经5-aza-dC+TSA处理后,极显著提高了3种供体细胞来源核移植胚胎的体外囊胚发育率(P<0.01)。虽然胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞得到的发育率稍高于皮肤成纤维细胞组,但各对照组之间以及各处理组之间的体外发育率没有明显差异,5-aza-dC和TSA对核移植胚胎体外发育的影响没有供体细胞特异性。

关键词：牛 5-aza—dC TSA 核移植供体细胞

优质抗虫红花标记杂交棉鲁HB标杂-5的选育及栽培技术要点

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山东农业科学 2013年第4期45卷 109-110页

作者：王家宝高明伟赵军胜陈莹王秀丽王留明山东棉花研究中心山东济南250100

简述了优质红花标记杂交棉鲁HB标杂-5的选育方法、特征特性、产量表现及栽培技术要点。该品种特有的红花性状可以方便、快捷地在田间区分真假F1代杂交种子。

关键词：杂交棉鲁HB标杂-5 红花标记特征特性栽培技术

ctsd、ctsl基因的多态性与“雪龙”黑牛胴体性状相关性研究

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ctsd、ctsl基因的多态性与“雪龙”黑牛胴体性状相关性研究