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柯乐猪异常乳腺组织的TMT蛋白组学分析

福建农林大学学报（自然科学版） 2024年第1期53卷 69-78页

作者：王春源熊力杨红文郭小江张依裕谭元成杨酸贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省农业农村厅贵州贵阳550001

【目的】基于串联体量标记(TMT)定量蛋白组学技术探讨柯乐猪母猪乳腺发育的调控机制,为选育工作提供依据。【方法】选取乳腺发育正常和异常的柯乐猪母猪各3头,采集乳腺组织,利用TMT定量蛋白组学技术探究正常和异常乳腺组织的差异表达蛋... 详细信息

【目的】基于串联体量标记(TMT)定量蛋白组学技术探讨柯乐猪母猪乳腺发育的调控机制,为选育工作提供依据。【方法】选取乳腺发育正常和异常的柯乐猪母猪各3头,采集乳腺组织,利用TMT定量蛋白组学技术探究正常和异常乳腺组织的差异表达蛋白,筛选与乳腺发育相关的差异关键蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。【结果】从柯乐猪乳腺组织中共筛选出474个差异表达蛋白,包括245个上调蛋白、229个下调蛋白;基因本体(GO)功能注释和富集分析显示,差异表达蛋白主要富集在上皮细胞分化、皮肤形成和肾小管上皮细胞分化等生物学过程中,主要分布在胞外区和细胞外空隙中,参与调节肽酶抑制剂活性和肽链内切酶活性;京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析显示,差异表达蛋白主要富集在补体系统、过氧化物酶体增殖物激活受体和金黄色葡萄球菌感染等信号通路上;结合差异表达蛋白互作网络分析,筛选出10个核心差异表达蛋白[上调蛋白有P14287(骨桥蛋白)、F1RXF9(角蛋白25)、I3LDS3(角蛋白10)、Q75QW1(上皮细胞黏附分子)、A0A5S8KLN1(丛生蛋白)、F1RW75(桥粒素),下调蛋白有A0A286ZT13(白蛋白)、P06867(血纤维蛋白溶酶原)、F1SCC9(含丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的蛋白)、P50447(α-1-抗胰蛋白酶)]。【结论】采用TMT定量蛋白组学技术能有效筛选出母猪正常和异常乳腺组织中的差异表达蛋白。

关键词：柯乐猪串联体量标记(TMT)技术乳腺组织差异表达蛋白

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磷石膏协同多元固废制备矿山充填材料

金属矿山 2024年第6期 235-241页

作者：杨玉翰邬忠虎冯政雷文丽贵州大学土木工程学院贵州贵阳550025

为解决磷石膏利用率低、对环境危害大与低成本矿山充填材料研制的问题,本文以粉煤灰、钢渣、高炉矿渣为胶凝材料组分,协同磷石膏制备一种新型的磷石膏基矿山充填材料。通过抗压强度、流动度、凝结时间、浸出毒性和微观试验研究了充填材... 详细信息

为解决磷石膏利用率低、对环境危害大与低成本矿山充填材料研制的问题,本文以粉煤灰、钢渣、高炉矿渣为胶凝材料组分,协同磷石膏制备一种新型的磷石膏基矿山充填材料。通过抗压强度、流动度、凝结时间、浸出毒性和微观试验研究了充填材料的工程与环境特性。结果表明:所研制的矿山充填材料的抗压强度、流动度、凝结时间均能满足规范,达到工程应用需求;在养护28 d后,充填材料的重金属元素的浸出浓度都可以满足地下水Ⅲ级标准的要求,不会污染环境和危害人体健康。当钢渣和高炉矿渣的掺量逐渐增加时,抗压强度逐渐升高,流动度和凝结时间逐渐降低;充填材料中主要的水化产物是钙矾石和C—(A)—S—H凝胶,两者都为充填材料提供了主要的强度,且C—(A)—S—H凝胶可以包裹住重金属离子。

关键词：磷石膏粉煤灰钢渣高炉矿渣矿山充填材料工程性能毒性浸出

茶树14-3-3基因家族的鉴定和表达模式分析

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分子植物育种 2024年第20期22卷 6613-6623页

作者：安海丽张宝会姚新转吕立堂贵州大学生命科学学院山地植物资源保护与保护种质创新教育部重点实验室山地生态与农业生物工程协同创新中心贵阳550025 贵州大学茶学院贵阳550025

植物14-3-3蛋白,也称为通用调节因子(GRFs),由一个大型多基因家族编码,在调节植物生长发育和逆境反应中起着关键作用。本研究通过对茶树基因组数据进行分析,成功的从中鉴定到了茶树14-3-3基因,并对该基因家族成员的蛋白理化性质、亚细... 详细信息

植物14-3-3蛋白,也称为通用调节因子(GRFs),由一个大型多基因家族编码,在调节植物生长发育和逆境反应中起着关键作用。本研究通过对茶树基因组数据进行分析,成功的从中鉴定到了茶树14-3-3基因,并对该基因家族成员的蛋白理化性质、亚细胞定位、进化关系、保守结构域、染色体定位等进行生物信息学分析,同时分析了茶树14-3-3成员在PEG诱导的干旱胁迫和盐胁迫处理中的转录组数据。结果表明:茶树14-3-3基因有23个家族成员,相对分子质量在26460.00~32852.02之间,等电点在4.67~5.91之间,亚细胞定位显示在细胞膜和细胞质中;根据系统进化树将茶树14-3-3基因家族分为ε类和非ε类;保守结构域和motif分析发现相同亚家族的基因结构,保守结构域都属于14-3-3基因家族;基因表达分析显示,14-3-3基因在花和果实组织中具有较高的表达水平;不同的14-3-3基因在PEG诱导的干旱胁迫下存在差异表达,茶树14-3-3基因广泛参与茶树生长发育和响应非生物胁迫并在其中发挥重要作用,本研究为进一步揭示14-3-3在茶树生长发育以及抗逆响应中提供参考依据。

关键词：茶树 14-3-3基因家族基因组鉴定基因表达分析

A286高温合金薄壁圆管局部梯度性能设计与实现

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金属热处理 2024年第4期49卷 244-250页

作者：王程民冯治国江玉莲陶亮莫宁宁贵州大学机械工程学院贵州贵阳550025 贵州省特色装备及制造技术重点实验室贵州贵阳550025

基于A286高温合金抽芯铆钉薄壁圆管退火的工艺要求,建立电磁场和温度场双向耦合的局部感应加热模型,研究电磁场和温度场的分布规律,然后进行了感应退火试验验证。结果表明,导磁体能够有效控制磁力线的分布,使用导磁体能够大幅度提高局... 详细信息

基于A286高温合金抽芯铆钉薄壁圆管退火的工艺要求,建立电磁场和温度场双向耦合的局部感应加热模型,研究电磁场和温度场的分布规律,然后进行了感应退火试验验证。结果表明,导磁体能够有效控制磁力线的分布,使用导磁体能够大幅度提高局部的磁通密度,进而提高加热效率。计算得到的温度梯度明显,表面温度分布曲线表现为两边低中间高的单峰曲线,退火后的硬度分布曲线则表现为两边高中间低的单峰曲线,低硬度区长约3.5 mm。对于退火后薄壁管的组织分布,非退火区呈现冷加工态组织,退火区的再结晶现象明显。

关键词：抽芯铆钉薄壁管 A286高温合金感应退火显微组织

SOCS1基因过表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

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南方农业学报 2024年第1期55卷 207-216页

作者：毛同辉杨酸罗杰苏徵张依裕铜仁市畜牧技术推广站贵州铜仁554300 铜仁职业技术学院贵州铜仁554300 贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS... 详细信息

【目的】明确细胞因子信号转导抑制因子1基因(SOCS1)过表达对乳腺发育关键信号通路(JAK/STAT)相关基因表达的影响,为揭示SOCS1基因调节猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用机制提供参考依据。【方法】构建SOCS1基因过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC,分别转染猪乳腺上皮细胞,然后通过CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测转染后JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化。【结果】以过表达载体pcDNA3.1-SOCS1和阴性对照载体pcDNA3.1-NC分别转染猪乳腺上皮细胞,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的SOCS1基因相对表达量极显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组(P<0.01,下同);转染48和72 h后,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组猪乳腺上皮细胞的OD值极显著低于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组,说明过表达载体pcDNA3.1-SOCS1能有效抑制猪乳腺上皮细胞的增殖能力;过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组的细胞凋亡率[(36.15±0.92)%]显著高于阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组[(30.55±0.35)%](P<0.05,下同),且过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的G1期细胞比例极显著降低,而S期和G2期细胞比例显著升高。与阴性对照载体pcDNA3.1-NC转染组相比,除JAK2、STAT3和TYK2基因外,过表达载体pcDNA3.1-SOCS1转染组中的SOCS2、SOCS3、JAK1、STAT2、STAT5A、IL-6、PRLR、MCL1和PIAS3等9个JAK/STAT信号通路相关基因的相对表达量均极显著升高。【结论】SOCS1基因过表达可抑制猪乳腺上皮细胞增殖及促进细胞凋亡,并影响JAK/STAT信号通路相关基因的表达变化,从而在猪的乳腺发生发育调控机制中发挥重要作用。

关键词：猪乳腺上皮细胞 SOCS1基因细胞增殖细胞凋亡 JAK/STAT信号通路

超量表达 CsADH17 基因提高烟草抗旱性及香气成分分析

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种子 2024年第3期43卷 41-47,54页

作者：陈周卓尔姚新转李婉雪吕立堂贵州大学生命科学学院贵阳550025 贵州大学茶学院贵阳550025

乙醇脱氢酶是植物香气物质合成的脂肪酸代谢等途径中的关键酶之一,对茶叶芳香物质的形成有着重要作用,因此探究CsADH17基因有利于茶树的生长发育与品质提升。以本课题组前期筛选的CsADH17基因为研究对象,克隆CsADH17基因并构建植物表达... 详细信息

乙醇脱氢酶是植物香气物质合成的脂肪酸代谢等途径中的关键酶之一,对茶叶芳香物质的形成有着重要作用,因此探究CsADH17基因有利于茶树的生长发育与品质提升。以本课题组前期筛选的CsADH17基因为研究对象,克隆CsADH17基因并构建植物表达载体,遗传转化烟草,对转基因烟草非生物胁迫下CsADH17的表达量和相关生理指标进行测定与分析。结果表明,对转基因与野生型烟草进行模拟干旱胁迫后,转基因烟草植株在干旱胁迫处理下的CsADH17基因相对表达量比野生型植株高。野生型烟草植株和CsADH17转基因烟草植株在干旱胁迫处理21 d后,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性均高于野生型烟草;胁迫处理后,野生型烟草叶片中丙二醛(MDA)含量显著高于转基因烟草。香气成分分析,转基因烟草苯甲醛比野生型含量提高了44.4%,而烟碱含量比野生型提高不到5%。CsADH17基因在烟草干旱胁迫下具有抗旱作用,同时影响烟草的香气成分,为进一步揭示CsADH在茶树生长发育以及抗逆响应中提供参考。

关键词：乙醇脱氢酶抗旱性分析 GC-MS成分分析烟草

敲低JAK2基因表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

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农业生物技术学报 2024年第8期32卷 1857-1868页

作者：罗杰杨酸毛同辉杨棋张依裕铜仁职业技术学院贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室铜仁市畜牧技术推广站

Janus激酶2 (Janus kinase, JAK2)是一种激素受体偶联激酶，参与母牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞增殖、分化、凋亡等过程，而其调控猪(Sus scrofa)乳腺上皮细胞的增殖或凋亡机制尚不清楚。为探究RNA干扰JAK2基因表达对猪乳腺上皮细胞增殖... 详细信息

Janus激酶2 (Janus kinase, JAK2)是一种激素受体偶联激酶，参与母牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞增殖、分化、凋亡等过程，而其调控猪(Sus scrofa)乳腺上皮细胞的增殖或凋亡机制尚不清楚。为探究RNA干扰JAK2基因表达对猪乳腺上皮细胞增殖和凋亡的影响，本研究根据JAK2基因序列设计并合成4对shRNA (short hairpin RNA)干扰序列和1对阴性对照序列，构建shRNA表达载体并将其转染至猪乳腺上皮细胞中，筛选干扰效果最佳的载体，采用串联质谱标记(tandem mass tags, TMT)定量蛋白质组学技术进行蛋白组测序并筛选差异蛋白，分别采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒、流式细胞术、q RT-PCR检测细胞增殖、凋亡、周期及相关基因的mRNA表达水平。结果显示，共筛选到差异表达蛋白699个，其中上调蛋白309个，下调蛋白390个。GO富集分析表明，差异蛋白主要富集在多肽生物合成过程和酰胺生物合成过程，以及碳水化合物衍生物结合、核糖体的结构组成等分子功能方面；KEGG富集分析可知，差异蛋白主要富集在核糖体、补体系统和丙型肝炎信号通路。干扰JAK2后，细胞增殖能力相较于对照组在不同时间节点均显著降低(P<0.05)，在72 h时的OD450值极显著降低(P<0.01)，细胞凋亡率(24.0%±3.82%)显著低于对照组(33.2%±2.55%)(P<0.05)，且诱导细胞周期G1/S期阻滞；IFIT1 (interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1)、ISG15 (interferon-stimulated gene 15)、GRB2 (growth factor receptor-bound protein 2)和RACK1 (receptor for activated C kinase 1)基因表达水平在沉默JAK2后极显著低于对照组(P<0.01),RSAD2 (radical S-adenosyl methionine domain containing 2)基因在沉默JAK2后极显著高于对照组(P<0.01)。综上，沉默JAK2可诱导猪乳腺上皮细胞周期G1/S期阻滞，从而抑制细胞增殖，并抑制细胞凋亡，B6E241蛋白(对应基因GRB2)可作为今后研究乳腺上皮细胞增殖相关的关键蛋白。本研究为深入探讨母猪乳腺发育和泌乳调控机制提供了基础资料。

关键词： Janus激酶(JAK2) 猪乳腺上皮细胞细胞增殖细胞凋亡

茶树ARR-B基因家族的鉴定和表达模式分析

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种子 2024年第4期43卷 7-16,26页

作者：姚新转吕纪开王芬章文益吕立堂贵州大学茶学院贵阳550025 贵州大学生命科学学院/农业生物工程研究院/山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室/贵州省农业生物工程重点实验室贵阳550025

ARR-B基因作为细胞分裂素信号转导的正向调节因子,在植物发育及抗逆过程中发挥着重要作用。本研究基于茶树基因组数据库,利用生物信息学软件成功鉴定出23个茶树ARR-B基因,并对其基因结构、进化关系、保守结构域、染色体定位、启动子顺... 详细信息

ARR-B基因作为细胞分裂素信号转导的正向调节因子,在植物发育及抗逆过程中发挥着重要作用。本研究基于茶树基因组数据库,利用生物信息学软件成功鉴定出23个茶树ARR-B基因,并对其基因结构、进化关系、保守结构域、染色体定位、启动子顺式作用元件以及八大组织和四种胁迫中的转录组数据等进行分析,并基于以上数据对福鼎大白茶树进行盐胁迫处理后利用荧光定量PCR技术验证表达水平。结果表明,茶树ARR-B基因家族有23个成员且在不同染色体上分布不均;根据系统进化树将茶树ARR-B基因分为9类且与拟南芥ARR-B基因同源性很高;茶树ARR-B基因相同亚家族的基因结构和保守结构域基本一致;茶树ARR-B基因在茎和根组织中具有较高的表达水平及在干旱、低温、盐和茉莉酸甲酯胁迫处理下存在差异表达;实时荧光定量PCR结果可知,经盐胁迫处理后,8个茶树ARR-B基因表达水平与转录组数据存在差异。本研究初步分析了茶树ARR-B基因家族的功能和抗逆作用,为进一步研究茶树的生长发育提供参考和依据。

关键词：茶树 ARR-B基因家族生物信息学分析基因组鉴定

基于网络药理学和体外实验验证木犀草素抑制膀胱癌细胞的增殖

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世界中医药 2024年第10期19卷 1379-1385页

作者：代文斌陈林周鑫陈波王威威龙晓明董陶涛梁国标杨进遵义医科大学遵义563000 成都大学附属医院泌尿外科成都610081

目的:用网络药理学和体外实验验证的方法探讨木犀草素抑制膀胱癌细胞增殖的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台、SwissTarget Prediction数据库、Pharmmapper数据库和GeneCards数据库,筛选出木犀草素和膀胱癌的作用靶点... 详细信息

目的:用网络药理学和体外实验验证的方法探讨木犀草素抑制膀胱癌细胞增殖的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台、SwissTarget Prediction数据库、Pharmmapper数据库和GeneCards数据库,筛选出木犀草素和膀胱癌的作用靶点,利用Venny2.1取出交集靶点,用交集靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析并利用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,最后用Cytoscape构建成分-通路-靶点-疾病网络图。通过细胞计数试剂盒-8(CCK8)、集落形成实验检测膀胱癌细胞的活力以及集落形成能力、蛋白质免疫印迹检测促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路上蛋白的表达以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)实验进一步检测木犀草素对膀胱癌细胞增殖的影响。结果:通过网络药理学一共筛出136个木犀草素与膀胱癌的潜在靶点,GO分析中与生物过程相关主要涉及491个功能簇,与细胞组分相关主要涉及52个功能簇,与分子功能相关主要涉及112个功能簇。KEGG通路富集分析共获得151条通路,主要有癌症通路、PI3K-AKT信号通路、MAPK信号通路。体外实验表明木犀草素通过MAPK信号通路有效抑制了膀胱癌细胞HT1376的增殖;CCK8实验结果表明,木犀草素能明显抑制膀胱癌细胞HT1376的活力;集落形成实验表明木犀草素具有明显抑制膀胱癌细胞集落形成的能力;蛋白质免疫印迹实验结果表明,木犀草素能明显抑制MAPK通路上P-RAF、P-MEK、P-ERK1/2蛋白的表达,并且降低了PCNA蛋白的表达水平;EDU实验表明木犀草素能明显抑制膀胱癌HT1376细胞的增殖。结论:本实验通过网络药理学和体外实验验证的方法证明了木犀草素可能通过MAPK信号通路抑制膀胱癌HT1376细胞的增殖。

关键词：木犀草素促分裂原活化的蛋白激酶信号通路膀胱癌细胞增殖网络药理学 HT1376细胞