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miR-191通过调控C/EBPβ转录影响猪前体脂肪细胞分化

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生物化学与生物物理进展 2013年第2期40卷 165-176页

作者：刘帅宁小敏李美航仇杨李艳杰董培越杨公社西北农林科技大学动物科技学院动物脂肪沉积与肌肉发育实验室杨凌712100

对实验室前期Solexa结果进行深入挖掘,结合生物信息学分析从不同发育阶段猪皮下脂肪组织差异表达的miRNAs中筛选出高丰度差异极显著的候选miR-191.采用腺病毒过表达miR-191,实时定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测等技术方... 详细信息

对实验室前期Solexa结果进行深入挖掘,结合生物信息学分析从不同发育阶段猪皮下脂肪组织差异表达的miRNAs中筛选出高丰度差异极显著的候选miR-191.采用腺病毒过表达miR-191,实时定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测等技术方法,初步研究miR-191对猪前体脂肪细胞分化的影响.结果发现,miR-191随着猪前体脂肪细胞的分化表达量逐渐增加.与对照组相比,过表达miR-191的猪前体脂肪细胞中miR-191转录本显著增加,并引起CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、PPARγ和aP2的mRNA水平降低,抑制了猪前体脂肪细胞分化.同时,Western blot结果显示,与对照组相比过表达miR-191的猪前体脂肪细胞在48 h C/EBPβ蛋白水平下降了55%.更重要的是,通过TargetScan等算法正向筛选以及MicroInspector反向筛选联合获得miR-191候选靶基因,经双荧光素酶报告基因检测结果证实,miR-191可直接作用于C/EBPβ3′UTR,从而降低萤火虫荧光素酶活性.综上所述,miR-191可能通过抑制脂肪细胞分化早期标志基因C/EBPβ的表达,从而抑制了猪前体脂肪细胞的分化.

关键词： miR-191 C EBPβ 猪前体脂肪细胞表达谱靶基因预测腺病毒双荧光素酶报告基因检测系统

大麦条纹花叶病毒中国株CP基因克隆分析、原核表达及抗血清制备

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植物病理学报 2006年第5期36卷 397-403页

作者：孙现超安德荣薛杨西北农林科技大学植物保护学院杨凌712100

首次用PCR方法，自大麦条纹花叶病毒中国株（BSMV-CH）的RNA2（GenBank登录号为：AY789694，未报道）中扩增出外壳蛋白（coat protein，CP）基因，并亚克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。结果表明BSMV—CH的CP全长597bp，它与BSMV其它株... 详细信息

首次用PCR方法，自大麦条纹花叶病毒中国株（BSMV-CH）的RNA2（GenBank登录号为：AY789694，未报道）中扩增出外壳蛋白（coat protein，CP）基因，并亚克隆到pMD18-T载体上进行测序分析。结果表明BSMV—CH的CP全长597bp，它与BSMV其它株系CP的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为93．1％～93．8％和91．4％-92．4％；与同属的早熟禾半潜病毒（PSLV）和剪秋罗环斑病毒（LRSV）的核苷酸同源性分别为53．0％和41．8％，氨基酸同源性分别为48．1％和40．0％。根据大麦病毒属病毒已经报道的CP氨基酸序列绘制系统发育树，分析表明分离的各毒株在进化上存在明显地理位置的相关性。把CP基因亚克隆到GST融合表达载体pEGX-6p-1上，优化IFFG诱导终浓度后，在37℃ IFFG终浓度为1．0mmol/L时，融合蛋白GST-CP在大肠杆菌BL21中得到了特异表达。12％SDS—PAGE表明，表达产物大小为48．5kDa，主要以包含体形式存在。对蛋白进行定量后，用冰冷的KCl显色，分离表达的蛋白质特异条带制备抗原，免疫家兔得到抗血清，酶联法（enzyme-linked immunosorbant assay，ELISA）测定的抗血清效价为1／6400。用抗血清对感病大麦和健康大麦进行检测，结果表明抗血清有很高特异性。

关键词：大麦条纹花叶病毒外壳蛋白系统发育树融合蛋白抗血清

瞬时表达靶向TMV外壳蛋白基因的siRNA能干扰病毒侵染

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植物病理学报 2006年第1期36卷 35-40页

作者：赵明敏安德荣黄广华何祖华陈江野西北农林科技大学植物保护学院杨凌712100 中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031 中国科学院上海生命科学院植物生理生态研究所植物分子遗传国家重点实验室上海200032

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA导入细胞后,该mRNA发生特异性降解,从而导致该基因表达沉默的现象。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为RNAi途径的重要中介, 已被广泛应用于动、植... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA导入细胞后,该mRNA发生特异性降解,从而导致该基因表达沉默的现象。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为RNAi途径的重要中介, 已被广泛应用于动、植物抗病毒治疗研究。本文以烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)外壳蛋白基因为靶位,设计合成表达小干扰RNA的寡核苷酸,亚克隆到植物双元表达载体pBI121中,直接转化根癌农杆菌。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法,研究了同源于TMV外壳蛋白的siRNA对TMV侵染的干扰作用。结果表明,瞬时表达的siRNA能够特异性干扰TMV侵染。含有重组表达载体pBI121／siRNA的根癌农杆菌渗入普通烟植株,在TMV接种后14 d其上部叶片没有表现典型的花叶症状。对这些叶片进行Northern杂交试验也没有检测到TMV病毒的RNA积累或仅有很少量的积累。在枯斑寄主心叶烟上,siRNA的瞬时表达可使TMV侵染后的枯斑数明显减少,甚至不产生枯斑。此外,同源于TMV外壳蛋白的siRNA瞬时表达对非同源的黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)没有抑制作用,表明siRNA的干扰作用具有高度的同源依赖性。

关键词：根癌农杆菌烟草花叶病毒外壳蛋白 siRNA 干扰

不同养分投入的各品种小麦产量及养分效率差异研究

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农业机械学报 2012年第9期43卷 91-98页

作者：昝亚玲王朝辉周玲戴健西北农林科技大学资源环境学院陕西杨凌712100

选用6个冬小麦品种,通过田间试验研究了不同养分投入水平的小麦产量及养分效率的差异。结果表明,随养分投入水平的提高,小麦产量和生物量均明显增加,高产品种对养分投入的敏感程度明显高于低产品种。从产量构成分析,低养分投入时,小麦... 详细信息

选用6个冬小麦品种,通过田间试验研究了不同养分投入水平的小麦产量及养分效率的差异。结果表明,随养分投入水平的提高,小麦产量和生物量均明显增加,高产品种对养分投入的敏感程度明显高于低产品种。从产量构成分析,低养分投入时,小麦每公顷穗数及穗粒数对产量起决定作用;高养分投入时,产量取决于每公顷穗数。从两年不同养分投入水平的平均值来看,低养分投入时,高产品种氮肥回收率、农学效率和偏生产力比低产品种高6.3%～61.6%、52.1%～122%、9.8%～25%;磷肥回收率、农学效率和偏生产力较低产品种高31.2%～33.3%、58.9%～126.3%、7.0%～24.9%。高养分投入时,小麦偏生产力明显下降,且低产品种较高产品种更敏感。

关键词：冬小麦养分投入产量差异氮效率磷效率

外源亚硒酸盐和硒酸盐在土壤中的价态转化及其生物有效性

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环境科学 2011年第6期32卷 1726-1733页

作者：薛瑞玲梁东丽王松山付冬冬段曼莉徐梦西北农林科技大学资源环境学院杨凌712100

采用土培盆栽试验和化学分析方法相结合的方法,研究了外源亚硒酸盐和硒酸盐态硒在土壤中的价态转化及其生物有效性,旨在为富硒蔬菜的开发和硒污染土壤的生物修复提供依据.结果表明,当土壤中外源施入亚硒酸盐时,小白菜不同生长时期土壤... 详细信息

采用土培盆栽试验和化学分析方法相结合的方法,研究了外源亚硒酸盐和硒酸盐态硒在土壤中的价态转化及其生物有效性,旨在为富硒蔬菜的开发和硒污染土壤的生物修复提供依据.结果表明,当土壤中外源施入亚硒酸盐时,小白菜不同生长时期土壤总硒、Se(Ⅳ)和Se(0)含量均随外源硒浓度的增加显著升高(p<0.05);而当土壤外源施入硒酸盐时,小白菜不同生长时期土壤总硒、Se(Ⅳ)、Se(Ⅵ)和Se(0)含量均随外源硒浓度的增大显著升高(p<0.05).土壤中外源添加亚硒酸(Se(Ⅳ))或硒酸盐(Se(Ⅵ))后,土壤不同价态硒发生了相互转化,部分施入的Se(Ⅳ)和Se(Ⅵ)转化为Se(0).当施入外源亚硒酸盐态硒浓度≤20 ***-1时对小白菜的生长无显著影响,而外源硒酸盐态硒浓度≥1 ***-1时,小白菜根部生物量即显著下降,当硒浓度≥10 ***-1时,显著抑制了小白菜根的伸长及地上部的生长(p<0.05),而高浓度硒酸盐对小白菜生长的毒害作用大于亚硒酸盐.土壤外源添加亚硒酸盐时,小白菜根部为硒的主要累积部位;而外源添加硒酸盐时,小白菜地上部更易累积硒.硒酸盐态硒的生物有效性及其在小白菜体内的迁移能力大于亚硒酸盐态硒,因此硒酸盐处理的小白菜地上部和根部硒含量均显著高于亚硒酸盐处理(p<0.05).在土壤中硒的各种价态中以Se(Ⅵ)对小白菜硒含量的贡献最大.高浓度硒酸盐和亚硒酸盐对小白菜生长的影响不同,源于小白菜对不同形态硒吸收、转运和累积的差异,而不同形态硒在土壤中的价态转化又反过来进一步影响到小白菜对硒的吸收及转运.

关键词：亚硒酸盐硒酸盐小白菜(Brassicarapa L. Chinensis Group) 硒价态生物有效性

铜、硒复合污染对小白菜生长及金属吸收和转运的影响

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环境科学学报 2011年第9期31卷 2033-2041页

作者：胡斌王丹王松山周萌梁东丽西北农林科技大学资源环境学院杨凌712100

采用土培盆栽试验和室内分析相结合的方法,研究了不同含量铜、硒单一和复合污染对小白菜生长及金属铜、硒吸收和转运的影响.结果表明,适量的硒(***-1)可以促进小白菜生长,表现为小白菜叶片叶绿素相对含量值(SPAD)、根长、地下和地上生... 详细信息

采用土培盆栽试验和室内分析相结合的方法,研究了不同含量铜、硒单一和复合污染对小白菜生长及金属铜、硒吸收和转运的影响.结果表明,适量的硒(***-1)可以促进小白菜生长,表现为小白菜叶片叶绿素相对含量值(SPAD)、根长、地下和地上生物量的增加,但高含量硒(≥***-1)却抑制小白菜的生长.外源铜单一污染或铜硒复合污染均能显著抑制小白菜生长,表现为小白菜叶片的SPAD值、根长、茎长、地下和地上生物量均与外源铜含量呈显著负相关(p<0.01).复合污染处理中,相同铜含量水平下,小白菜地上部分铜含量随外源硒含量升高而增加,而地下部分铜含量则以Se含量***-1处理最高;硒含量一定时,小白菜地上、地下部硒含量随外源铜含量升高呈现先升高后降低的趋势,以Cu含量为***-1处理的硒含量最高.土壤中适量的硒(***-1)与铜之间存在拮抗作用,而当外源硒含量高于***-1时,硒与铜之间呈现协同毒害作用.硒能促进铜从小白菜根系向地上部的转运,而高含量铜胁迫则使得更多的硒滞留在小白菜地下部.

关键词：铜硒重金属复合污染小白菜吸收转运

土壤铜、铬(Ⅵ)复合污染重金属形态转化及其对生物有效性的影响

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环境科学 2011年第10期32卷 3113-3120页

作者：王丹魏威梁东丽王松山胡斌西北农林科技大学资源环境学院杨凌712100

通过盆栽试验和室内化学分析相结合的方法,研究了外源铜、铬(Ⅵ)单一和复合污染中土壤金属形态转化及其对生物有效性的影响.结果表明,外源铜、铬(Ⅵ)单一污染土壤中,铬主要以残渣态和有机结合态形式存在,而铜则主要以铁锰氧化物结合态... 详细信息

通过盆栽试验和室内化学分析相结合的方法,研究了外源铜、铬(Ⅵ)单一和复合污染中土壤金属形态转化及其对生物有效性的影响.结果表明,外源铜、铬(Ⅵ)单一污染土壤中,铬主要以残渣态和有机结合态形式存在,而铜则主要以铁锰氧化物结合态和残渣态形式存在.铜、铬(Ⅵ)复合污染时,低浓度铜(≤400 ***-1)促进铬向交换态转化,低浓度铬(≤***-1)促进了铜向残渣态转化,而高浓度铜(≥800 ***-1)和铬(≥20 ***-1)却抑制了这种转化.不同浓度的铜、铬复合污染对其在土壤中的形态分布影响不同.此外,生物有效性试验结果显示,铜能够促进土壤有机结合态铬转化成残渣态而抑制小白菜对铬的吸收;同样铬因为促进土壤交换态铜向残渣态转化而抑制小白菜对铜的吸收.因此,在对铜铬(Ⅵ)复合污染土壤进行评价及植物修复时,应考虑二者的综合效应.

关键词：铜铬复合污染重金属形态生物有效性

亚硒酸盐对四种蔬菜生长、吸收及转运硒的影响

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环境科学学报 2011年第3期31卷 658-665页

作者：段曼莉付冬冬王松山梁东丽薛瑞玲吴雄平西北农林科技大学资源环境学院杨凌712100

采用土培盆栽试验和室内分析相结合的方法,研究了添加不同含量外源亚硒酸盐对小白菜、芥菜、生菜和菠菜的生长、吸收及转运硒的影响.结果表明,低含量硒(29.91mg·kg-1)却显著抑制蔬菜的生长,并对供试蔬菜的茎、根产生明显的毒害作用.同... 详细信息

采用土培盆栽试验和室内分析相结合的方法,研究了添加不同含量外源亚硒酸盐对小白菜、芥菜、生菜和菠菜的生长、吸收及转运硒的影响.结果表明,低含量硒(29.91mg·kg-1)却显著抑制蔬菜的生长,并对供试蔬菜的茎、根产生明显的毒害作用.同等硒添加量条件下,4种供试蔬菜中以芥菜的地上生物量最大、菠菜最小,以生菜的地下生物量最大.4种蔬菜地上和地下部硒含量均随着外源硒添加量的增大而增大(p<0.01),以小白菜地上部的硒累积量最大,生菜最小;小白菜和芥菜地下部对硒的吸收量大于生菜和菠菜.菠菜将硒从根部转运到地上部的能力最强,生菜最弱.供试的4种蔬菜相较而言,小白菜因生物量较大且富集硒的能力最强,适用作富硒蔬菜或作为硒污染土壤的修复作物,以亚硒酸盐形式补施硒的水平以小于3.81mg·kg-1为宜.

关键词：亚硒酸盐蔬菜生长吸收转运

过表达miR-103促进猪前体脂肪细胞分化

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生物工程学报 2012年第8期28卷 927-936页

作者：李美航仇杨刘帅董培越宁小敏李艳杰杨公社孙世铎西北农林科技大学动物脂肪沉积与肌肉发育实验室陕西杨凌712100

为阐明miR-103在猪前体脂肪细胞分化过程中的调控作用,采用Real-time PCR检测猪前体脂肪细胞成脂分化过程中的miR-103表达谱,明确了其在分化过程中的表达趋势;使用miR-103的腺病毒超表达载体感染猪原代脂肪细胞,随后采用Real-time PCR和... 详细信息

为阐明miR-103在猪前体脂肪细胞分化过程中的调控作用,采用Real-time PCR检测猪前体脂肪细胞成脂分化过程中的miR-103表达谱,明确了其在分化过程中的表达趋势;使用miR-103的腺病毒超表达载体感染猪原代脂肪细胞,随后采用Real-time PCR和Western blotting分别检测成脂标记基因PPARγ、aP2的mRNA和蛋白表达量变化;油红O染色观察腺病毒miR-103侵染的前体脂肪细胞诱导分化第8天的成脂情况。结果显示,miR-103的表达量随着脂肪细胞分化而增加,在miR-103超表达的猪原代脂肪细胞的诱导分化过程中,成脂标记基因PPARγ、aP2的表达量与对照相比显著升高,分化第8天观察到明显的脂滴。说明miR-103能够促进猪前体脂肪细胞分化。

关键词： miR-103 猪前体脂肪细胞腺病毒