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PRG4蛋白SMB结构域的表达及聚集现象研究

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生物医学工程学杂志 2014年第6期31卷 1319-1324页

作者：王黎芳韩之波陈文虎杜蓬孙爱华杨萍赵宏光浙江医学高等专科学校基础医学部生化教研室杭州310053 中国协和医科大学血液学研究所天津300020 浙江肿瘤医院胸外科杭州310022

利用糖蛋白4(PRG4)分子多态性的特点,克隆表达含有两个人促细胞生成素B(SMB)结构域及少量糖基化重复序列的重组蛋白(SMBPRG4),并建立了成熟的纯化工艺流程,可高效表达重组蛋白。进一步通过凝胶排阻、动态光散射实验发现重组蛋白具有自... 详细信息

利用糖蛋白4(PRG4)分子多态性的特点,克隆表达含有两个人促细胞生成素B(SMB)结构域及少量糖基化重复序列的重组蛋白(SMBPRG4),并建立了成熟的纯化工艺流程,可高效表达重组蛋白。进一步通过凝胶排阻、动态光散射实验发现重组蛋白具有自我聚集的特点,在溶液中以稳定的二聚体形式存在。结构预测及非还原电泳揭示SMBPRG4是非共价结合的同源二聚体。

关键词：糖蛋白4 基因表达结构蛋白聚集

用等位基因组特异性引物扩增技术确认HLA-B新等位基因B＊15：129

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中华医学遗传学杂志 2011年第3期28卷 293-295页

作者：韩浙东王炜章伟何俊俊陈男英朱发明吕杭军严力行浙江省血液中心输血研究所卫生部血液安全研究重点实验室杭州310006

目的对人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，H1，A）新等位基因HLAB＊15：129的第2～4外显子序列进行分析。方法采用商用抽提试剂盒抽提标本DNA，应用等位基因组特异性引物PCR方法扩增先证者标本HLAB基因第2～4外显子，PCR产物经... 详细信息

目的对人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，H1，A）新等位基因HLAB＊15：129的第2～4外显子序列进行分析。方法采用商用抽提试剂盒抽提标本DNA，应用等位基因组特异性引物PCR方法扩增先证者标本HLAB基因第2～4外显子，PCR产物经酶切纯化后直接进行HLA-B基因第2～4外显子双向测序分析。结果先证者标本存在2个HLAB等位基因，1个等位基因为B＊07：02，另1个经Blast验证为新的等位基因，新的等位基因序列已递交GenBank（EF473219），经世界卫生组织HI，A命名委员会正式命名为HLA—B＊15：129。HLAB＊15：129第2～4外显子序列与最接近的B＊15：01：01：01相比，第3外显子存在3个碱基的不同，即第362位G→A、363位G→T、369位C→T改变，导致第97位氨基酸Arg→Asn。结论发现1例新的HLA—B等位基因，被世界卫生组织HLA基因命名委员会正式命名为HLA—B＊15：129。

关键词：人类白细胞抗原-B 等位基因 HI A B*1 5:129 测序

HLA-B新等位基因B＊9536和B＊4612的测序分析和确认

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中华医学遗传学杂志 2009年第6期26卷 678-680页

作者：和艳敏章伟何俊俊王炜韩浙东陈男英朱发明严力行浙江省血液中心输血研究所卫生部血液安全研究重点实验室杭州310006

目的研究人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）新等位基因HLA-B＊9536和B＊4612的分子机制。方法采用Invitrogen抽提试剂盒抽提标本DNA，利用单链特异性引物PCR方法扩增样本HL-B基因第2～4外显子，对PCR产物直接进行HLA-B基因... 详细信息

目的研究人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）新等位基因HLA-B＊9536和B＊4612的分子机制。方法采用Invitrogen抽提试剂盒抽提标本DNA，利用单链特异性引物PCR方法扩增样本HL-B基因第2～4外显子，对PCR产物直接进行HLA-B基因第2、3、4外显子双向测序分析。结果先证者标本存在2个HLA-B等位基因，经HLABlast验证均为新的等位基因，新的等位基因序列已递交GenBank（EU081878和EU081879），经世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA_B＊9536和HLA-B＊4612。HLA-B＊9536第2～4外显子序列与最接近的B＊1505相比，在第3外显子存在一个碱基的不同，即第544位G—A改变，导致第158位氨基酸Ala—Thr；HLA-B＊4612第2～4外显子序列与最接近的B＊4601相比，在第3外显子存在一个碱基的不同，即第363位G→C导致第97位氨基酸Arg—Set。结论在同一标本中发现两个新的HLA-B等位基因，并被世界卫生组织HLA命名委员会正式命名。

关键词：人类白细胞抗原等位基因 HLA- B*9536 HLA-B*4612 测序

人乳头状瘤病毒L1壳蛋白表达与宫颈病变程度相关性研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2016年第1期30卷 34-36页

作者：高家良陈文虎孙爱华宁波市鄞州人民医院 315040 浙江医学高等专科学校杭州310053

目的探讨人乳头瘤病毒（humanpa pillomavirus，HPV）感染宫颈上皮细胞L1壳蛋白表达对宫颈病变的进展及宫颈癌的发生的临床意义。方法病例组共259例，根据液基薄层细胞检测（TCT）结果不同分为未见上皮内病变细胞或恶性细胞（NILM）103... 详细信息

目的探讨人乳头瘤病毒（humanpa pillomavirus，HPV）感染宫颈上皮细胞L1壳蛋白表达对宫颈病变的进展及宫颈癌的发生的临床意义。方法病例组共259例，根据液基薄层细胞检测（TCT）结果不同分为未见上皮内病变细胞或恶性细胞（NILM）103例、非典型鳞状细胞（ASCUS）91例、低度鳞状上皮内病变（LSIL）36例、高度鳞状上皮内病变（HSIL）23例和鳞状细胞癌（SCC）6例。同时选择50例健康体检者作为对照组。分别用PCR-反向点杂交法检测HPV23种亚型和免疫细胞化学法检测L1壳蛋白表达。结果对照组PCR和L1壳蛋白表达结果均呈阴性。病例组NILM、ASC、LSIL、HSIL和SCC患者HPV感染率分别为23．3％、69．2％、83．3％、87．0％和100％，HPV—PCR阳性上述患者高危型HPV（HR—HPV）的构成比分别为79．2％、92．1％、96．7％、100％和100％。NILM、ASC、LSIL、HSIL和SCC患者HPVL1壳蛋白表达阳性率分别为25．2％、31．9％、63．8％、17．4％和0％。结论随宫颈病变的进展HPV感染率和***构成比升高，提示本地区HPV感染率和HR—HPV构成比与宫颈上皮内瘤变程度密切相关。L1壳蛋白检测阳性率随病变早期表达呈上升趋势，晚期呈明显下降，HPVL1壳蛋白的表达与宫颈病变程度有关，可以作为宫颈癌癌前病变的随访指标。

关键词：乳头状瘤病毒,人 L1壳蛋白免疫细胞化学宫颈肿瘤

血清乙型肝炎病毒包膜大蛋白检测与病毒复制的相关性研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2015年第1期29卷 23-25页

作者：贺超奇覃江凤梁友芳王天翔孙爱华杭州市萧山区第一人民医院 311200 浙江医学高等专科学校

目的通过检测慢性乙肝患者血清包膜大蛋白（HBV large envelope protein,HBV-LP）、乙肝病毒DNA（HBV DNA）和乙肝病毒e抗原（HBeAg）,探讨HBV-LP对于反映体内乙肝病毒复制的意义.方法对623例慢性乙肝患者血清标本采用酶联免疫吸附试... 详细信息

目的通过检测慢性乙肝患者血清包膜大蛋白（HBV large envelope protein,HBV-LP）、乙肝病毒DNA（HBV DNA）和乙肝病毒e抗原（HBeAg）,探讨HBV-LP对于反映体内乙肝病毒复制的意义.方法对623例慢性乙肝患者血清标本采用酶联免疫吸附试验检测HBV-LP和HBeAg,实时荧光定量PCR检测HBV DNA.结果慢性乙肝患者HBV-LP和HBV DNA阳性率明显高于HBeAg阳性率（Х^2=22.3和9.4,P＜0.01）,HBV-LP和HBV DNA阳性率比较差异无统计学意义（Х^2=2.8,P＞o.05）,HBeAg阳性或阴性患者血清HBV-LP和HBV DNA阳性率比较均差异无统计学意义（Х^2=3.2和0.6,P＞0.05）.血清HBV-LP含量与HBV DNA拷贝数呈正相关（r=0.874,P＜0.01）,在不同HBV DNA拷贝数组别间,HBV-LPA值差异有统计学意义（F =6.987,P＜0.01）.100例健康对照者,其血清HBV DNA及HBV-LP测定结果均为阴性.结论 HBV-LP检测血清的灵敏度高于HBeAg,慢性乙肝患者血清HBV-LP与HBV DNA复制密切相关,可作为反映HBV复制的指标.

关键词：肝炎病毒,乙型病毒包膜蛋白质炎乙肝病毒e抗原

参芎注射液对缺血再灌注损伤大鼠炎症损伤的影响

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中国中药杂志 2015年第12期40卷 2408-2412页

作者：周惠芬艾进超万海同何昱张宇燕赵涛付巍杨洁红浙江中医药大学浙江杭州310053 山东步长制药有限公司山东菏泽274000

为研究参芎注射液对脑缺血再灌注老龄大鼠炎症损伤的影响。将84只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫通组、参芎注射液高、中、低剂量组。连续腹腔注射给药3 d,采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,再灌注24 h,神经功能评分,取脑TTC... 详细信息

为研究参芎注射液对脑缺血再灌注老龄大鼠炎症损伤的影响。将84只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫通组、参芎注射液高、中、低剂量组。连续腹腔注射给药3 d,采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,再灌注24 h,神经功能评分,取脑TTC染色,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,荧光实时定量PCR(RTPCR)对海马区IL-1β,TNF-α,ICAM-1和MMP-9 m RNA的表达量进行检测。结果,参芎注射液可使脑梗死体积减少,明显改善神经功能,参芎注射液能减少IL-1β,TNF-α,ICAM-1和MMP-9 m RNA的表达量,并减少IL-1β和TNF-α的含量。表明参芎注射液对大鼠缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制炎症因子表达有关。

关键词：参芎注射液脑缺血再灌注损伤 TNF-α IL-1β ICAM-1 MMP-9

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加味二至颗粒的制剂工艺研究

中华中医药学刊 2015年第6期33卷 1287-1292页

作者：钟晓明陈梦静黄真丁宇霞任学聪浙江中医药大学浙江杭州310053

目的:探讨加味二至颗粒提取工艺及制剂成型工艺。方法:对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取温度进行单因素考察,确定最佳条件;采用L9(34)正交实验,以特女贞苷及二苯乙烯苷含量为评价指标,优化提取工艺;通过比较辅料差异对颗粒剂的影响... 详细信息

目的:探讨加味二至颗粒提取工艺及制剂成型工艺。方法:对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取温度进行单因素考察,确定最佳条件;采用L9(34)正交实验,以特女贞苷及二苯乙烯苷含量为评价指标,优化提取工艺;通过比较辅料差异对颗粒剂的影响,确定最佳辅料组合;测定休止角,考察颗粒流动性,并测定颗粒临界相对湿度(CRH)。结果:加味二至颗粒提取工艺优选条件为:15倍量60%乙醇,100℃水浴回流提取3 h。成型工艺为:2.5倍量辅料(乳糖:CMC-Na=9∶1),临界相对湿度66%。所制得的颗粒符合《中华人民共和国药典》项下颗粒剂质量要求。结论:加味二至颗粒提取工艺合理稳定,且简便易行,适于生产实际,所选工艺制得的颗粒外观较好,制粒过程损失较少,颗粒均匀。

关键词：加味二至颗粒提取工艺制剂工艺

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附子中乌头类生物碱在大鼠体内的药动学研究

中国药学杂志 2009年第18期44卷 1412-1415页

作者：王彬辉冯健赵燕敏魏颖慧徐铭李范珠浙江中医药大学药学院杭州310053

目的建立微透析取样技术结合RP-HPLC分析方法同步研究附子中主要有效成分乌头碱、次乌头碱和新乌头碱在大鼠体内的药动学过程。方法大鼠十二指肠给予附子提取物1055mg·kg-1,颈静脉微透析采样,RP-HPLC测定透析液中乌头碱、次乌头碱和新... 详细信息

目的建立微透析取样技术结合RP-HPLC分析方法同步研究附子中主要有效成分乌头碱、次乌头碱和新乌头碱在大鼠体内的药动学过程。方法大鼠十二指肠给予附子提取物1055mg·kg-1,颈静脉微透析采样,RP-HPLC测定透析液中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的含量,以回收率校正实际药物浓度,并用3P97程序计算药动学参数。结果透析液中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱分别在0.0112～0.56mg·L-(1r=0.9999),0.0106～0.53mg·L-(1r=0.9997)和0.0114～0.57mg·L-(1r=0.9998)内线性关系良好,方法回收率在93.12%以上。乌头碱、次乌头碱和新乌头碱的血药浓度-时间曲线均符合开放式二室模型。结论本实验建立的方法简便,专属灵敏,可用于附子提取物中乌头类生物碱的药动学研究。

关键词：附子乌头类生物碱药动学血液微透析

银杏达莫注射液对缺氧缺糖损伤大鼠心肌细胞的保护作用

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中国药学杂志 2018年第6期53卷 421-426页

作者：熊佳周惠芬何昱浙江中医药大学杭州310053

目的探讨银杏达莫注射液对大鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤模型。将培养的细胞随机分成5组:正常组、缺氧缺糖组、银杏达莫注射液低、中、高剂量组(0.28、0.84、1.40 mg·mL^(-1))。观察银杏达莫... 详细信息

目的探讨银杏达莫注射液对大鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤模型。将培养的细胞随机分成5组:正常组、缺氧缺糖组、银杏达莫注射液低、中、高剂量组(0.28、0.84、1.40 mg·mL^(-1))。观察银杏达莫注射液对心肌细胞一氧化氮(NO),丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH)含量和超氧化歧化酶(SOD)活性的影响,采用流式细胞仪技术检测各组细胞的凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术监测各组对心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)基因转录水平的影响。结果相对于缺氧缺糖组,银杏达莫注射液明显抑制NO、MDA、LDH的产生,更能显著增强胞内SOD活性。银杏达莫注射液中、高剂量组可明显改善心肌细胞形态,抑制细胞凋亡,有效下调心肌细胞中Cx43基因的过表达。结论银杏达莫注射液对大鼠心肌细胞的缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,其作用机制与抗氧化、抑制细胞凋亡及维持心肌缝隙连接通道等相关。

关键词：银杏达莫注射液心肌细胞缺氧缺糖损伤模型抗氧化抗凋亡心肌细胞缝隙连接通道