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基于减毒单增李斯特菌递呈鸡柔嫩艾美耳球虫MIC3抗原的重组疫苗免疫保护效果的评估

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中国预防兽医学报 2023年第6期45卷 628-634页

作者：张韧哲孙倩李婉婧黄欣怡张儒新曾欢郑亚东宋厚辉王璞程昌勇浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

本实验室前期构建的基于毒力基因改造的减毒单增李斯特菌(LM-1)被证实是一种较为安全的疫苗载体。为构建表达鸡柔嫩艾美耳球虫(***)毒力蛋白MIC3的重组减毒单增李斯特菌(LM)疫苗候选株并评估其对雏鸡的免疫保护效果,本研究在LM-1基础上... 详细信息

本实验室前期构建的基于毒力基因改造的减毒单增李斯特菌(LM-1)被证实是一种较为安全的疫苗载体。为构建表达鸡柔嫩艾美耳球虫(***)毒力蛋白MIC3的重组减毒单增李斯特菌(LM)疫苗候选株并评估其对雏鸡的免疫保护效果,本研究在LM-1基础上采用同源重组的方法将MIC3蛋白关键功能区(aa159~aa252)编码基因(475 bp~756 bp)定点整合至LM-1基因组中,并与LM溶血素O(LLO,其编码基因为Rly)融合表达获得重组LM-1-MIC3菌株并经PCR鉴定;western blot检测LM-1-MIC3中MIC3和LLO的表达;测定细菌体外生长曲线检测LM-1-MIC3的体外生长能力;将野生菌株EGO-e、LM-1、LM-1-MIC3分别感染雏鸡72 h和144 h后,分别剖杀,取各组雏鸡肝脏和脾脏,经菌落计数对雏鸡肝脾载菌量进行测定并评估LM-1-MIC3在雏鸡体内的增殖能力;将野生株EGD-e、LM-1和LM-1-MIC3感染雏鸡并结合临床症状及致死率评估LM-1-MIC3对雏鸡的安全性;将LM-1-MIC3免疫雏鸡并建立***感染模型,研究其对雏鸡抗球虫感染的免疫保护效果。PCR鉴定结果显示正确构建重组菌株LM-1-MIC3;western blot结果显示LM-1-MIC3分泌的融合蛋白LLO-MIC3能够在培养上清液中大量表达;细菌体外培养结果显示LM-1-MIC3体外生长能力与EGD-e和LM-1无显著差异,表明融合LLO的MIC3不会影响LM-1的生长;雏鸡肝脾载菌量测定结果显示,与EGD-e组相比,各时间段LM-1-MIC3组雏鸡肝脾载菌量均极显著降低(P<0.01),感染LM-1-MIC3后雏鸡均存活且无明显临床症状,表明LM-1-MIC3对雏鸡致病力高度减弱,可以作为减毒疫苗载体;免疫保护试验结果显示在攻虫10 d后,LM-1-MIC3免疫组雏鸡的存活率高于LM-1免疫组及PBS对照组,且该组鸡无明显临床症状,剖杀后盲肠病变评分极显著低于LM-1和PBS组(P<0.001),表明LM-1-MIC3对雏鸡有良好的免疫保护效果。本研究构建了重组减毒株LM-1-MIC3,并证实该重组菌对雏鸡具有较好的免疫保护效果,为减毒LM载体疫苗在防控重要动物传染病中的研究与应用奠定了科学基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫减毒单增李斯特菌疫苗免疫预防

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白及产业现状及可持续发展策略

中草药 2019年第20期50卷 5103-5108页

作者：张曼韩亭亭胡春芳白岩樊泽鹏洪琳浙江农林大学浙江杭州311300 浙江省乡村振兴研究院浙江杭州311300 浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室浙江杭州311300

近年来,白及产业发展迅速,在医药、保健、美容等领域广泛应用,但是仍存在制约产业可持续发展的问题。通过对白及市场和产业发展现状进行实地调查,查阅相关文献并结合课题组研究成果,发现其主要存在以下制约因素:野生资源短缺,品种参差不... 详细信息

近年来,白及产业发展迅速,在医药、保健、美容等领域广泛应用,但是仍存在制约产业可持续发展的问题。通过对白及市场和产业发展现状进行实地调查,查阅相关文献并结合课题组研究成果,发现其主要存在以下制约因素:野生资源短缺,品种参差不齐;作用机制不明确,综合利用程度低;质量标准不明确,品质难以控制;产业层次低,产业集群发展缓慢等。因此,应通过加强白及种质资源保护和优良品种选育,深化白及作用机制和综合开发利用研究,完善白及质量评价体系,实施品牌战略,拓展销售市场等方法促进白及产业健康及可持续发展。

关键词：白及产业现状可持续发展制约因素种植资源保护优良品种选育

炭基固体酸催化水解木聚糖制备低聚木糖的工艺优化

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食品科学 2017年第12期38卷 171-176页

作者：韩鹏飞虞佐嗣郭建忠李兵刘力浙江农林大学理学院浙江省林业生物质化学利用重点实验室浙江临安311300 浙江农林大学工程学院浙江临安311300

以榉木木聚糖为原料,采用炭基固体酸催化剂(AC-SO_3H)催化水解制备得到低聚木糖。分别考察反应时间、反应温度、催化剂用量对低聚木糖收率及各组分收率的影响,并通过正交试验设计确定最佳工艺条件为20 m L蒸馏水,0.5 g木聚糖、0.2 g AC-... 详细信息

以榉木木聚糖为原料,采用炭基固体酸催化剂(AC-SO_3H)催化水解制备得到低聚木糖。分别考察反应时间、反应温度、催化剂用量对低聚木糖收率及各组分收率的影响,并通过正交试验设计确定最佳工艺条件为20 m L蒸馏水,0.5 g木聚糖、0.2 g AC-SO_3H、反应时间3 h、反应温度140℃。并在此条件下,分别以AC-SO_3H、M-ACSO_3H、S-AC-SO_3H为催化剂,考察不同催化剂对低聚木糖收率的影响,结果表明以AC-SO3H为催化剂时低聚木糖收率最大为66.60%。

关键词：木聚糖低聚木糖炭基固体酸催化剂

环介导等温扩增技术在植物病原物检测中的应用

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植物保护学报 2020年第2期47卷 234-244页

作者：应淑敏郭俭王教瑜李玲张传清浙江农林大学农业与食品科学学院临安311300 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所杭州310021

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种新型的由环介导的等温核酸扩增分子技术,不仅特异性强、操作简便、成本低,还能快速、高效地检测病原物,为植物病害的防控提供更精准的防治适期,从而可以减少农... 详细信息

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种新型的由环介导的等温核酸扩增分子技术,不仅特异性强、操作简便、成本低,还能快速、高效地检测病原物,为植物病害的防控提供更精准的防治适期,从而可以减少农药的滥用。本文主要针对LAMP技术的原理、发展、优缺点、在真菌、细菌、病毒等多种植物病原物检测及在抗药性检测中的应用进行总结,并结合国内外研究进展对其应用前景进行了分析。

关键词： LAMP技术检测植物病原物

植物乳杆菌培养上清对不同血清型沙门氏菌的抑制效果及作用机理

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微生物学报 2023年第1期63卷 220-232页

作者：李东昱胡爱心黄雯霞舒鑫刘金松张瑞强许英蕾杨彩梅吴艳萍浙江农林大学动物科技学院、动物医学院浙江杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司浙江湖州313307

【目的】探究植物乳杆菌培养上清(Lactobacillus plantarum culture supernatant,LPC)对3种血清型沙门氏菌猪霍乱(Salmonella cholerae,SC)、肠炎(Salmonella enteritidis,SE)和鸡白痢(Salmonella pullorum,SP)的生长和致病性的抑制作用效果及机理。【方法】将2%LPC与3种沙门氏菌分别共培养后,采用比浊法及牛津杯抑菌圈试验检测沙门氏菌生长情况及LPC中的主要抑菌物质,使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)探究沙门氏菌致病性相关基因表达水平,最后通过结晶紫染色法检测沙门氏菌的生物被膜。【结果】2%LPC能够显著抑制3种沙门氏菌的生长,其作用效果与庆大霉素(gentamicin,GM)相近且对SE的生长抑制效果优于GM,其主要抑菌物质为有机酸;2%LPC对3株沙门氏菌SPI-1编码的主要毒力基因(InvA、InvF、SopE、SopB、SipB、HilA和SipA)、SPI-2毒力基因(SopD2)、菌毛相关基因(FliF、LpfA、SefA和FimF)和鞭毛相关基因(FlhD、FliC和FliD)表达均有显著抑制效果且抑制效果与GM相近;2%LPC对3株沙门氏菌的生物被膜形成均有显著抑制效果,抑菌率12 h为40%–50%、24 h为60%–80%,且作用效果与GM相似;对比发现,2%LPC对SE的生长及致病性的抑制效果优于SC与SP。【结论】2%LPC对3种血清型沙门氏菌的生长性能及致病性均有显著抑制效果,且对肠炎沙门氏菌抑制效果最佳。

关键词：植物乳杆菌培养上清沙门氏菌抑制生长致病性

马来酰肼的残留测定及其对白术品质影响的研究

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中药材 2013年第11期36卷 1743-1747页

作者：王春荣郑丹萍蒋鹏吴剑锋刘影坤田薇浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地浙江临安311300 浙江丽水市中药材产业发展中心浙江丽水323050

目的:测定马来酰肼(MH)残留量,并探讨其对白术质量的影响。方法:白术现蕾期,施用不同浓度MH水剂,采收期测定白术MH残留及糖类、内酯类成分的含量,并采用独立样本t检验和主成分分析法评价MH对白术内在质量的影响。结果:白术根茎MH残留量... 详细信息

目的:测定马来酰肼(MH)残留量,并探讨其对白术质量的影响。方法:白术现蕾期,施用不同浓度MH水剂,采收期测定白术MH残留及糖类、内酯类成分的含量,并采用独立样本t检验和主成分分析法评价MH对白术内在质量的影响。结果:白术根茎MH残留量为0.3~2.2 mg/kg;独立样本t检验显示内酯类成分的含量随MH施用浓度升高呈低-高-低趋势;主成分分析显示,施用MH对白术内在质量具有显著影响,75和100倍液时白术质量综合评价指数最高。结论:保证低残留的同时,施用适当浓度的MH可以提高白术产量及内在质量。

关键词：白术马来酰肼残留糖类内酯类

可食性CW-GML涂膜结合热处理保鲜鸡蛋研究

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保鲜与加工 2020年第4期20卷 57-61页

作者：王颖宣佳娜徐浙珺张宜民霍艳荣李永新杨虎清浙江农林大学农业与食品科学学院浙江杭州311300 浙江公正检验中心有限公司浙江杭州311305

以新鲜鸡蛋为试材,对其分别进行热处理(50℃下20 min)、热处理结合巴西棕榈蜡-单月桂酸甘油脂(CW-GML)涂膜(50℃下20 min后常温涂膜)、热处理结合热CW-GML涂膜(50℃下20 min后热涂膜),以不进行加热及涂膜处理为对照组,在30℃恒温培养箱... 详细信息

以新鲜鸡蛋为试材,对其分别进行热处理(50℃下20 min)、热处理结合巴西棕榈蜡-单月桂酸甘油脂(CW-GML)涂膜(50℃下20 min后常温涂膜)、热处理结合热CW-GML涂膜(50℃下20 min后热涂膜),以不进行加热及涂膜处理为对照组,在30℃恒温培养箱中进行为期35 d的保鲜试验,探究CW-GML涂膜剂配合热处理对鸡蛋保鲜的效果。结果表明:在第35天时,热处理结合CW-GML热涂膜的保鲜效果最好,失重率为4.53%,没有出现散黄,挥发性盐基氮含量低,菌落总数为4.1×10^3 CFU/g。

关键词：鲜鸡蛋热处理 CW-GML涂膜

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喜树碱对番茄灰霉病菌的毒理效应

浙江农林大学学报 2015年第4期32卷 585-589页

作者：毛胜凤周湘范闻春张立钦叶建仁南京林业大学林学院南方现代林业协同创新中心江苏南京210037 浙江农林大学林业与生物技术学院浙江临安311300

为探明喜树碱对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea的毒理效应,应用生长速率法、电子显微镜观察研究不同质量浓度喜树碱对番茄灰霉病菌菌丝生长、细胞壁结构的影响;番茄Lycopersicon esculentum叶片经喜树碱处理后接种番茄灰霉病菌,观察药剂... 详细信息

为探明喜树碱对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea的毒理效应,应用生长速率法、电子显微镜观察研究不同质量浓度喜树碱对番茄灰霉病菌菌丝生长、细胞壁结构的影响;番茄Lycopersicon esculentum叶片经喜树碱处理后接种番茄灰霉病菌,观察药剂对病菌侵染活性的影响。结果表明:喜树碱为3.13 mg·L-1时就能强烈抑制番茄灰霉病菌菌丝生长,抑菌率达45.49%,差异显著(P<0.05);可显著影响番茄灰霉病菌对番茄活体叶片的侵染活性;喜树碱处理可导致菌体细胞壁表面出现破损、穿孔,细胞内含物外渗等现象。喜树碱能破坏菌丝体细胞结构,从而抑制番茄灰霉病菌的生长,而在活体叶片可显著影响病菌的侵染活性。

关键词：植物保护学喜树碱番茄灰霉病菌毒理效应

茶黑刺粉虱与樟刺粉虱(半翅目:粉虱科)形态特征的比较观察

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环境昆虫学报 2020年第5期42卷 1275-1282页

作者：王吉锐周孝贵诸葛敏杜予州徐志宏周国鑫邓建宇浙江农林大学农业与食品科学学院浙江临安311300 中国农业科学院茶叶研究所农村农业部茶叶质量安全控制重点实验室浙江杭州310008 扬州大学园艺与植物保护学院暨应用昆虫研究所江苏扬州225009

通过比较研究茶黑刺粉虱Aleurocanthus camelliae Kanmiya&Kasai和樟刺粉虱Aleurocanthus cinnamomi Takahashi形态特征,有助于更好地区分这两种刺粉虱种类。采集这两种粉虱标本,通过体视显微镜和扫描电镜对茶黑刺粉虱和樟刺粉虱不同龄... 详细信息

通过比较研究茶黑刺粉虱Aleurocanthus camelliae Kanmiya&Kasai和樟刺粉虱Aleurocanthus cinnamomi Takahashi形态特征,有助于更好地区分这两种刺粉虱种类。采集这两种粉虱标本,通过体视显微镜和扫描电镜对茶黑刺粉虱和樟刺粉虱不同龄期形态结构进行了系统观察和比较研究;同时将伪蛹制作玻片标本观察。茶黑刺粉虱和樟刺粉虱卵、1龄若虫和2龄若虫形态结构比较相似,但是伪蛹形态不同,刺的数量及分布有较大的区别。茶黑刺粉虱中央区隆起,尤其是管状孔区域更明显,位于一个凸起的瘤突上;亚缘区上有10~11对刺排列,樟刺粉虱亚缘区具有刺14对,其中头胸部5对,腹部9对。茶黑刺粉虱管状孔隆起,亚心形或近圆形,盖瓣心形,几乎充塞了整个管状孔区域;樟刺粉虱管状孔半圆形,盖瓣半圆形,充塞管状孔一半区域。两种刺粉虱成虫整体上比较相似,复眼、胸部和腹部及前翅基部为橙黄色;前后翅及身体上的白色粉状物都是由后足将腹部蜡盘分泌物覆盖上的,茶黑刺粉虱的粉状物比樟刺粉虱要多。前后翅上有不同形状的白色斑纹,左右翅斑相连,但是樟刺粉虱前翅后缘全白,而茶黑色粉虱前翅后缘仅有部分白斑。本研究结果有助于更好地区分樟刺粉虱和茶黑刺粉虱,为农林生产过程中准确鉴定和防治提供一定的参考资料。

关键词：茶黑刺粉虱樟刺粉虱形态特征分类粉虱科