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非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体制备、鉴定及阻断ELISA方法的建立

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中国农业科学 2022年第16期55卷 3256-3266页

作者：张冯禧肖琦朱家平尹力鸿赵霞玲严明帅徐晋花温立斌牛家强何孔旺江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室西藏农牧学院动物科学学院/西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室

【背景】非洲猪瘟（ASF）于2018年8月在中国首次出现，对养猪业造成了巨大危害，损失惨重。目前尚无安全有效的疫苗用来预防ASF，于是建立快速特异的检测方法对于防控ASF提供了有效的手段。【目的】制备非洲猪瘟病毒（ASFV）特异性单克... 详细信息

【背景】非洲猪瘟（ASF）于2018年8月在中国首次出现，对养猪业造成了巨大危害，损失惨重。目前尚无安全有效的疫苗用来预防ASF，于是建立快速特异的检测方法对于防控ASF提供了有效的手段。【目的】制备非洲猪瘟病毒（ASFV）特异性单克隆抗体，建立ASF快速特异性的检测方法。为ASF的检测和防控提供借鉴技术手段。【方法】构建表达载体pET-28a-P30，通过原核表达系统获得ASFV P30重组蛋白，以纯化的P30蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经过细胞融合和细胞亚克隆制备出ASFV P30蛋白特异性杂交瘤细胞株；对P30蛋白进行截短表达，利用Western Blot和间接酶联免疫吸附试验（iELISA）鉴定单克隆抗体所对应的抗原表位；并利用制备的单克隆抗体建立非洲猪瘟阻断ELISA抗体检测方法。【结果】通过双酶切和PCR验证，结果显示构建出重组载体pET-28a-P30，经测序其序列未发生突变；IPTG诱导后，P30重组蛋白主要表达在包涵体中，分子量约为33 kD。纯化的P30蛋白与弗氏佐剂1:1混合免疫小鼠，3次免疫后，小鼠血清效价达到1:102 400，说明表达的蛋白具有良好的免疫原性。经细胞融合和亚克隆，获得8株P30蛋白特异性杂交瘤细胞，Western Blot和间接免疫荧光试验（IFA）检测获得的8株单抗均具有良好的反应性。叠加试验显示8株单克隆抗体均针对相同的抗原位点；截短表达P30蛋白不同片段，选取制备的2-12B单克隆抗体与不同的截短P30蛋白反应，显示单克隆抗体的抗原表位区为187—194aa。利用2-12B单克隆抗体并经过条件优化，成功建立了ASF阻断ELISA抗体检测方法，检测了190份临床样品，并与商品化非洲猪瘟ELISA抗体检测试剂盒进行对比，两方法阳性符合率为90.91%，总符合率为96.32%。【结论】本研究成功获得ASFV P30蛋白，经过iELISA、Western Blot和IFA筛选出反应性良好的特异性单克隆抗体8株，抗原识别表位区为187—194aa。并利用制备的单克隆抗体建立了特异性高，敏感性好的ASFV阻断ELISA抗体检测方法，为ASF的检测及其防控提供了手段和支撑。

关键词：非洲猪瘟病毒 P30蛋白单克隆抗体抗原表位阻断ELISA

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家禽质量安全现状、危害分析与控制对策

中国家禽 2020年第5期42卷 1-6页

作者：高玉时陆俊贤唐修君周倩陈大伟唐梦君贾晓旭张静江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125 农业农村部禽类产品质量安全风险评估实验室江苏扬州225125

我国是家禽生产和消费大国,禽肉、禽蛋已成为人们日常生活中不可或缺的重要动物源性食品,其质量安全关系到国计民生、社会稳定和产业发展。由于家禽生产中存在品种质量良莠不齐、环境污染、投入品(饲料、兽药)不科学使用以及监控技术体... 详细信息

我国是家禽生产和消费大国,禽肉、禽蛋已成为人们日常生活中不可或缺的重要动物源性食品,其质量安全关系到国计民生、社会稳定和产业发展。由于家禽生产中存在品种质量良莠不齐、环境污染、投入品(饲料、兽药)不科学使用以及监控技术体系不健全等问题,导致产品质量安全风险较大。文章从家禽产品质量安全现状、存在的风险及控制技术研究进展等方面进行了阐述和分析,并提出我国家禽生产质量安全控制的对策建议。

关键词：禽产品质量安全危害分析控制技术建议

饲粮中不同水平芝麻油对苏禽青壳蛋鸡产蛋性能、蛋品质、血清脂质指标和蛋黄胆固醇含量的影响

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动物营养学报 2013年第10期25卷 2474-2480页

作者：卢建王克华曲亮窦套存童海兵李尚民中国农业科学院家禽科学研究所扬州225125 扬州翔龙禽业发展有限公司江都225261

本试验旨在研究饲粮中不同水平芝麻油对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、血清脂质指标和蛋黄胆固醇含量的影响。试验选用28周龄体况良好、产蛋率接近的苏禽青壳蛋鸡160只,随机分成4组,每组4个重复,每个重复10只鸡。对照组饲粮不含芝麻油,试验组... 详细信息

本试验旨在研究饲粮中不同水平芝麻油对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、血清脂质指标和蛋黄胆固醇含量的影响。试验选用28周龄体况良好、产蛋率接近的苏禽青壳蛋鸡160只,随机分成4组,每组4个重复,每个重复10只鸡。对照组饲粮不含芝麻油,试验组饲粮分别含有1%、2%和3%的芝麻油,各组饲粮中能量、蛋白质水平相同。试验期为42 d。结果表明:各试验组产蛋率、只总蛋重、只总采食量和料蛋比与对照组相比较差异均不显著(P>0.05)。2%芝麻油组的平均蛋重和蛋形指数显著高于对照组(P<0.05);3%芝麻油组的哈氏单位显著高于对照组和2%芝麻油组(P<0.05);2%和3%芝麻油组的蛋黄颜色显著高于对照组(P<0.05)。2%芝麻油组的血清胆固醇和甘油三酯含量显著低于对照组和3%芝麻油组(P<0.05);3%芝麻油组的蛋黄胆固醇含量显著高于其他各组(P<0.05)。由此可见,饲粮中芝麻油添加水平为2%时,能显著提高蛋鸡平均蛋重、蛋形指数、蛋黄颜色和蛋黄重,降低血清胆固醇和甘油三酯含量,对产蛋率、料蛋比和其他蛋品质指标无不良影响。建议饲粮中芝麻油的添加水平为2%。

关键词：芝麻油苏禽青壳蛋鸡产蛋性能蛋品质血清脂质蛋黄胆固醇

万寿菊提取物对苏禽青壳蛋鸡产蛋性能、蛋品质和蛋黄胆固醇含量的影响

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动物营养学报 2013年第9期25卷 2067-2073页

作者：卢建王克华曲亮窦套存童海兵李尚民中国农业科学院家禽科学研究所扬州225125 扬州翔龙禽业发展有限公司江都225261

本试验旨在研究在饲粮中添加不同水平万寿菊提取物对蛋鸡产蛋性能、蛋品质和蛋黄胆固醇含量的影响。试验选用28周龄体况良好、产蛋率接近的苏禽青壳蛋鸡160只,随机分成4个组,每个组4个重复,每个重复10只鸡。对照组饲粮不含万寿菊提取物... 详细信息

本试验旨在研究在饲粮中添加不同水平万寿菊提取物对蛋鸡产蛋性能、蛋品质和蛋黄胆固醇含量的影响。试验选用28周龄体况良好、产蛋率接近的苏禽青壳蛋鸡160只,随机分成4个组,每个组4个重复,每个重复10只鸡。对照组饲粮不含万寿菊提取物,试验组饲粮分别含有0.05%、0.10%和0.20%的万寿菊提取物(有效成分叶黄素的含量分别为12.5、25.0和50.0 mg/kg),试验期42 d。结果表明:各试验组产蛋性能与对照组相比较差异均不显著(P>0.05)。试验期第14天,0.10%和0.20%万寿菊提取物组的哈氏单位显著高于对照组(P0.05)。由此可见,饲粮中万寿菊提取物添加水平为0.20%时,能显著提高鸡蛋哈氏单位和蛋黄颜色,对产蛋性能和蛋黄胆固醇含量无不良影响。

关键词：万寿菊提取物苏禽青壳蛋鸡产蛋性能蛋品质蛋黄胆固醇

江苏部分地区鸡源与猪源弯曲菌耐药性分析与毒力基因检测

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畜牧兽医学报 2020年第9期51卷 2284-2292页

作者：唐梦君周倩张小燕张静唐修君陆俊贤周生蒲俊华高玉时江苏省家禽科学研究所扬州225125 江苏省家禽遗传育种重点实验室扬州225125

旨在了解江苏省部分地区鸡源与猪源弯曲菌的耐药及毒力基因携带情况。从江苏省25个规模养殖场采集250份粪便样品进行弯曲菌的分离鉴定,采用琼脂平板稀释法测定9种抗菌药物的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MICs),PCR... 详细信息

旨在了解江苏省部分地区鸡源与猪源弯曲菌的耐药及毒力基因携带情况。从江苏省25个规模养殖场采集250份粪便样品进行弯曲菌的分离鉴定,采用琼脂平板稀释法测定9种抗菌药物的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MICs),PCR方法扩增弯曲菌8种与致病力相关的毒力基因。结果显示:共分离得到93株弯曲菌,包括空肠弯曲菌45株,结肠弯曲菌48株;空肠弯曲菌对萘啶酸(80.0%)、四环素(71.1%)和环丙沙星(66.7%)的耐药率较高,而结肠弯曲菌对红霉素(87.5%)、萘啶酸(79.2%)和阿奇霉素(72.9%)产生较强的耐药性,分离株多重耐药现象严重,多重耐药率达67.7%;8个毒力基因在弯曲菌分离株中的携带率不同,cdtB和cadF携带率为100%,htrB为97.8%,clpP为76.3%,csrA为18.3%,wlaN为5.4%,cstⅡ为2.2%,cgtB为0%。结果提示,江苏省畜禽养殖场弯曲菌分离株多重耐药情况严重,毒力相关基因在弯曲菌中分布广泛。

关键词：弯曲菌耐药性毒力基因分离鉴定

玉米干酒糟及其可溶物对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、血清脂质以及经济效益的影响

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动物营养学报 2013年第8期25卷 1872-1877页

作者：卢建王克华曲亮窦套存童海兵李尚民中国农业科学院家禽科学研究所扬州225125 扬州翔龙禽业发展有限公司江都225261

本试验旨在研究饲粮玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)水平对苏禽青壳蛋鸡产蛋性能、蛋品质、血清脂质以及经济效益的影响。选用28周龄产蛋率接近的健康苏禽青壳蛋鸡240只,随机分为6个处理,每个处理4个重复,每个重复10只,试验饲粮分别含有0(... 详细信息

本试验旨在研究饲粮玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)水平对苏禽青壳蛋鸡产蛋性能、蛋品质、血清脂质以及经济效益的影响。选用28周龄产蛋率接近的健康苏禽青壳蛋鸡240只,随机分为6个处理,每个处理4个重复,每个重复10只,试验饲粮分别含有0(对照组)、1%、3%、5%、7%和9%的玉米DDGS(粗蛋白质,26.91%;表观代谢能,9.20 M J/kg;粗脂肪,13.66%;中性洗涤纤维,32.27%;酸性洗涤纤维,9.58%;钙,0.12%;磷,0.66%),各处理饲粮中能量、蛋白质水平相同,试验期为42 d。结果表明:1)饲粮中添加玉米DDGS可显著增加蛋黄颜色(P0.05);7%和9%玉米DDGS组血清胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)。2)试验期内,与对照组相比较,1%、3%、5%、7%和9%玉米DDGS组的饲料成本分别降低了0.151、0.211、0.383、0.478和0.495元/只,7%和9%玉米DDGS组的利润分别增加了0.170和0.933元/只。由此可见,饲粮不同玉米DDGS水平对蛋鸡产蛋性能、蛋品质和蛋黄胆固醇含量无不良影响,添加7%和9%玉米DDGS能够显著提高蛋黄颜色和哈氏单位,降低血清胆固醇含量,并能有效增加养殖利润。

关键词：玉米DDGS 苏禽青壳蛋鸡产蛋性能蛋品质血清脂质经济效益

蛋鸡投喂氟苯尼考后大肠杆菌耐药性变化及耐药基因检测

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中国家禽 2020年第9期42卷 40-46页

作者：周倩张小燕马尹鹏陈大伟唐修君陆俊贤张静唐梦君高玉时江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

为研究蛋鸡投喂氟苯尼考后大肠杆菌耐药性变化及耐药基因检出的情况,试验将60只1日龄京红1号蛋鸡随机分成试验组和对照组,另设苍蝇组(为鸡舍内飞蝇)。给药前常规饲喂和疫苗防疫,试验组于16周龄时连续5 d氟苯尼考混饲(200 mg/kg)给药,对... 详细信息

为研究蛋鸡投喂氟苯尼考后大肠杆菌耐药性变化及耐药基因检出的情况,试验将60只1日龄京红1号蛋鸡随机分成试验组和对照组,另设苍蝇组(为鸡舍内飞蝇)。给药前常规饲喂和疫苗防疫,试验组于16周龄时连续5 d氟苯尼考混饲(200 mg/kg)给药,对照组不给药。采集试验组、对照组鸡泄殖腔棉拭子样品及苍蝇组样品各10份,进行细菌分离鉴定、最低抑菌浓度测定及耐药基因检测。结果显示,试验期40 d内,共分离鉴定获得大肠杆菌328株(78.1%),对照组、试验组和苍蝇组分离率分别为90%(126/140)、85%(119/140)和59.3%(83/140),差异显著(P<0.05)。对照组和试验组MIC90值未呈显著差异,但试验组用药前后(1~5 d和6~40 d)呈显著差异(P<0.05)。四种氟苯尼考耐药基因floR、fexA、fexB和pexA检出率分别为83.5%、2.1%、0.6%和0.9%。综上所述,试验组给药后虽然能够降低大肠杆菌分离率,呈现短暂性的MIC值升高,但是并不能直接导致大肠杆菌可持续性高水平耐药,floR基因流行率较高。因此,应当完善细菌监控措施,了解耐药性动态变化,防控动物源细菌耐药性的发生和蔓延。

关键词：大肠杆菌氟苯尼考鸡粪苍蝇耐药基因

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苏禽黑羽青壳蛋鸡产蛋性能及蛋品质分析

中国家禽 2013年第9期35卷 11-14页

作者：贺兴龙王克华杜房房郭军窦套存广东海洋大学广东湛江524088 江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125 扬州翔龙禽业发展有限公司江苏扬州225261

本研究选取苏禽黑羽青壳蛋鸡母鸡250只,统计21～66周龄产蛋率,运用McMillan模型、杨宁模型、Wood模型拟合产蛋曲线;并在21、32、36、40、44、48、52、56、60及66周龄测定鸡蛋品质。结果表明,黑羽青壳蛋鸡21～66周龄平均产蛋率为54.6%,... 详细信息

本研究选取苏禽黑羽青壳蛋鸡母鸡250只,统计21～66周龄产蛋率,运用McMillan模型、杨宁模型、Wood模型拟合产蛋曲线;并在21、32、36、40、44、48、52、56、60及66周龄测定鸡蛋品质。结果表明,黑羽青壳蛋鸡21～66周龄平均产蛋率为54.6%,产蛋高峰接近80%;3种模型中杨宁模型对产蛋曲线拟合度最高(R2=0.916),较适合用于产蛋曲线拟合;鸡蛋品质达到A级水平;随着日龄增加,蛋重逐渐增大,而蛋白高度、蛋黄色泽、哈氏单位等指标也呈现一定的变化规律。

关键词：黑羽青壳蛋鸡产蛋率蛋品质

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规模化鸡场生产成本构成与控制

中国家禽 2013年第6期35卷 57-58页

作者：王珍窦套存王克华江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

规模化鸡场是当前家禽业生产的主力军,有效控制规模化鸡场的生产成本,是实现行业健康、高效发展的重要途径。文章对规模化鸡场的直接成本和间接成本构成进行了总结,并且提出成本控制的有效措施。

关键词：鸡场成本构成控制