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大麦黄矮病毒GAV株系通读蛋白基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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中国农业科学 2000年第4期33卷 38-45页

作者：常胜军王锡锋李莉马占鸿周广和中国农业科学院植物保护研究所!植物病虫害生物学国家重点实验室北京100094

以大麦黄矮病毒 ( BYDV) GAV株系的 RNA为模板 ,通过 RT- PCR扩增获得通读蛋白 ( readthrough protein　RTP)基因的目的片段。将其重组到 p GEM- 7zf( + )并转化 JM1 0 9得到了含有完整 RTP基因的重组子。采用双脱氧终止法进行序列分析... 详细信息

以大麦黄矮病毒 ( BYDV) GAV株系的 RNA为模板 ,通过 RT- PCR扩增获得通读蛋白 ( readthrough protein　RTP)基因的目的片段。将其重组到 p GEM- 7zf( + )并转化 JM1 0 9得到了含有完整 RTP基因的重组子。采用双脱氧终止法进行序列分析。结果表明 ,RTP基因为1 377nt,与文献〔1〕报道的血清学较密切的 BYDV MAV- PS1相比 ,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 87.4%和 87.1 %。将此 RTP基因克隆到原核表达质粒 p ET- 5a上 ,在大肠杆菌 BL2 1( DE3)中用 IPTG诱导表达 ,利用分离包含体的方法结合 SDS- PAGE电泳 ,得到了纯化的分子量为 66ku的非融合蛋白

关键词：大麦黄矮病毒通读蛋白基因序列原核表达

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线虫乙酰胆碱酯酶研究进展

植物保护 2008年第3期34卷 18-21页

作者：丁中彭德良高必达中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 湖南农业大学生物安全科学技术学院长沙410128

线虫乙酰胆碱酯酶(AChE)以多种不同的分子型存在并由不同的基因所编码。本综述简述了线虫AChE的药理学特性、分子型以及相关ace基因的结构、分布和功能。

关键词：线虫乙酰胆碱酯酶分子型 ace基因

桂林猫儿山地区Bt菌株的筛选及其抑菌成分的热稳定性

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桂林理工大学学报 2015年第2期35卷 348-352页

作者：罗稳卢梦梦郝再彬桂林理工大学化学与生物工程学院广西桂林541004

通过对桂林猫儿山原生态地区采集的166份土样样品进行筛选,分离到含有新的杀虫晶体蛋白基因、所产抑菌物质热稳定性好的苏云金芽胞杆菌菌株。采用温度筛选法对土样进行初筛和复筛,结合SDS-PAGE分析和牛津杯法抑菌试验来挑选目的菌株。... 详细信息

通过对桂林猫儿山原生态地区采集的166份土样样品进行筛选,分离到含有新的杀虫晶体蛋白基因、所产抑菌物质热稳定性好的苏云金芽胞杆菌菌株。采用温度筛选法对土样进行初筛和复筛,结合SDS-PAGE分析和牛津杯法抑菌试验来挑选目的菌株。从采集的166份天然土壤样品中分离出49株苏云金芽胞杆菌,出菌率29.5%。光学显微镜观察发现有大菱形、小菱形和不规则晶体类型。用SDS-PAGE分析了其中14株野生菌株的杀虫晶体蛋白表达谱,发现14株均表达了130和65 k D的蛋白,其中有7株表达约90 k D蛋白、2株表达35 k D和6株表达30 k D的蛋白。对其中8株表达不同分子量蛋白的菌株发酵44h,取其发酵液的上清液进行抑菌活性成分热稳定性检测,发现其热稳定性相差较大,95℃水浴加热2 h处理后,除247-1外,其他几株产生的抑菌物质全部失活。菌株247-1不仅产生耐热的Zwittermicin A,可能还产生其他热敏感性的抑菌成分。

关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白抑菌活性热稳定性

禾谷炭疽菌CFEM效应子的生物信息学鉴定与转录分析

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植物保护 2016年第1期42卷 81-86页

作者：井忠英王国梁刘文德中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

植物病原真菌效应子是指可以改变寄主植物细胞结构或者细胞功能的分泌蛋白或其他小分子物质。效应子对病原真菌的侵入、扩展以及致病发挥着至关重要的作用,是植物病原真菌与寄主的互作不断演化的必然结果。真菌特有的CFEM(common in sev... 详细信息

植物病原真菌效应子是指可以改变寄主植物细胞结构或者细胞功能的分泌蛋白或其他小分子物质。效应子对病原真菌的侵入、扩展以及致病发挥着至关重要的作用,是植物病原真菌与寄主的互作不断演化的必然结果。真菌特有的CFEM(common in several fungal extracellular membrane protein)蛋白对于病原真菌的致病性起重要作用,一些能够被分泌到胞外的CFEM蛋白被证明是病原真菌效应子。由禾谷炭疽菌(Colletotrichum graminicola)引起的玉米炭疽病是玉米上的重要病害,常年造成严重损失。本研究运用生物信息学工具对禾谷炭疽菌中的CFEM蛋白进行信号肽分析和亚细胞定位分析,进而通过转录分析明确禾谷炭疽菌CFEM蛋白的表达时期。分析结果表明,该病原真菌编码32个CFEM蛋白,其中22个具有信号肽并可分泌至胞外,为分泌蛋白。转录分析表明,10个CFEM分泌蛋白于病菌侵染时附着胞形成期表达,2个CFEM分泌蛋白于侵染后的活体寄生阶段表达,1个于死体寄生阶段表达,其余9个CFEM分泌蛋白在病菌侵染时期的3个阶段均稳定表达。结合生物信息学和转录分析结果,我们预测这22个CFEM分泌蛋白为禾谷炭疽菌致病相关的效应子(简称CFEM效应子)。明确禾谷炭疽菌中CFEM蛋白数量,预测病菌致病相关的CFEM效应子组成,可为开展病原真菌CFEM蛋白介导的病菌—寄主互作研究奠定基础,并为玉米炭疽病的防治和抗性育种研究提供参考。

关键词：禾谷炭疽菌 CFEM效应子生物信息学分析

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基于近地成像光谱的小麦全蚀病等级监测

农业工程学报 2014年第20期30卷 172-178页

作者：乔红波师越司海平吴旭郭伟时雷马新明周益林河南粮食作物协同创新中心/河南农业大学信息与管理科学学院郑州450002 植物病虫害生物学国家重点实验室北京100094

小麦全蚀病是检疫性的土传病害,对小麦生产危害极大,对其发生的监测是治理的根本。遥感技术可实时、宏观监测病害发生发展,尤其是成像光谱技术的图谱合一,可精准对病害识别和分类。该文首先通过主成分分析提取不同小麦白穗率的冠层光谱... 详细信息

小麦全蚀病是检疫性的土传病害,对小麦生产危害极大,对其发生的监测是治理的根本。遥感技术可实时、宏观监测病害发生发展,尤其是成像光谱技术的图谱合一,可精准对病害识别和分类。该文首先通过主成分分析提取不同小麦白穗率的冠层光谱特征;再通过灰色聚类分析方法,研究白穗率等级的可分性;最后利用基于径向基(RBF,radial basis function)核函数的支持向量机对全蚀病害的近地成像高光谱图像进行分类,从而验证近地成像光谱在全蚀病监测上的可行性。研究结果显示:该方法对5种程度的小麦全蚀病白穗率的分类精度均达94%以上,Kappa值大于0.8。研究表明利用该方法,通过近地成像光谱图像可以准确监测小麦全蚀病的病情,对小麦全蚀病的治理有指导意义。

关键词：病害图像处理支持向量机小麦全蚀病近地成像光谱遥感监测灰色聚类分析

Zwitternicin A晶体生成习性预测研究

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人工晶体学报 2014年第2期43卷 369-374页

作者：刘峥李巍赖丽燕王苗苗郝再斌桂林理工大学化学与生物工程学院桂林541004 中国科学院植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193

通过重结晶方法,选用不同的溶剂获得了Zwittermicin A晶型A和晶型B,利用红外光谱法(IR)、X-射线粉末衍射分析法(XRD)和熔点法等对Zwittermicin A各晶型物进行了鉴定与表征。同时利用Materials Studio 4.2软件对Zwittermicin A两种晶型... 详细信息

通过重结晶方法,选用不同的溶剂获得了Zwittermicin A晶型A和晶型B,利用红外光谱法(IR)、X-射线粉末衍射分析法(XRD)和熔点法等对Zwittermicin A各晶型物进行了鉴定与表征。同时利用Materials Studio 4.2软件对Zwittermicin A两种晶型物分子进行晶体结构模拟研究,确定二种晶型的晶胞参数和空间群;通过Morphology模块中的BDFH模型,研究了Zwittermicin A各晶型的理论预测晶习,并通过Growth morphology模块研究Zwittermicin A各晶型的主要生长面,初步探讨各晶型晶习形成机理。

关键词： Zwittermicin A 多晶型晶体结构晶习模拟预测

甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶基因Dd-ace-2全长cDNA的克隆和序列分析

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生物工程学报 2008年第2期24卷 239-244页

作者：丁中彭德良黄文坤贺文婷高必达中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100094 湖南农业大学生物安全科学技术学院长沙410128

利用RT-PCR、RACE技术克隆了甘薯茎线虫(Ditylenchus destructor)乙酰胆碱酯酶基因(Dd-ace-2)cDNA (GenBank登录号EF583058),用DNAMAN5.0、MEGA3.0进行了序列分析。克隆的Dd-ace-2基因cDNA全长2425 bp,包含一个2205 bp的开放阅读框,编码734个氨基酸。Dd-ace-2基因推导的氨基酸序列与南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)和动物寄生线虫胎生网尾线虫(Dictyocaulus viviparous)ace-2的氨基酸序列同源性分别达48.0%、42.7%和42.1%。在推导的734个氨基酸残基的前体蛋白中,前面的701个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列,其预测的分子量为79240.38 D。在一级结构中,形成催化活性中心的3个氨基酸残基(Ser291,Glu442和His574)、胆碱结合位点Trp(177),以及在亚基内形成二硫键的6个半胱氨酸完全保守;在电鳐乙酰胆碱酯酶分子的催化功能域中存在14个保守的芳香族氨基酸残基,其中10个在甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶中完全保守。与其它线虫和物种乙酰胆碱酯酶的聚类分析显示,甘薯茎线虫的乙酰胆碱酯酶与其它线虫乙酰胆碱酯酶ACE-2同属一个支系。

关键词：甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶 cDNA克隆 Dd-ace-2

郁金香杂色综合症病原的免疫电镜鉴定与检测研究

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电子显微学报 1999年第2期18卷 165-168页

作者：胡东维郎少兰原雅玲吴云峰西北农业大学植保系西安联合大学师范学院西安植物园第三研究室

免疫胶体金标记技术的鉴定结果表明，造成郁金香杂色综合症的主要病原是ＴＢＶ，其次也有少量的植株被ＴＢＢＶ、ＴＴＢＶ及ＣＭＶ所感染。ＴＢＶ及ＴＴＢＶ病毒主要在花瓣和叶片中增殖与积累，并通过种球传给后代。ＴＢＶ和ＴＢＢＶ可... 详细信息

免疫胶体金标记技术的鉴定结果表明，造成郁金香杂色综合症的主要病原是ＴＢＶ，其次也有少量的植株被ＴＢＢＶ、ＴＴＢＶ及ＣＭＶ所感染。ＴＢＶ及ＴＴＢＶ病毒主要在花瓣和叶片中增殖与积累，并通过种球传给后代。ＴＢＶ和ＴＢＢＶ可共同识别某些植株的病原，说明二者应属同一种病毒的不同株系。

关键词：郁金香杂色综合症鉴定免疫金标记电镜

桑树植原体含量的周年变化及其对寄主激素水平的影响

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山东大学学报（自然科学版） 1999年第1期34卷 98-102页

作者：刘秉胜戴群山东大学生命科学学院

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测植原体在桑树体内的分布及其相对含量的周年变化．结果显示，茎部植原体含量在生长季节逐渐升高，７月达到最大，冬季检测不到；叶部与茎部相似但植原体含量在８月达到最大；根部全年均含有植原体，含... 详细信息

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测植原体在桑树体内的分布及其相对含量的周年变化．结果显示，茎部植原体含量在生长季节逐渐升高，７月达到最大，冬季检测不到；叶部与茎部相似但植原体含量在８月达到最大；根部全年均含有植原体，含量较低．此外，用酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）对桑树内源激素检测的结果显示，病株中生长素、细胞分裂素（Ｚ＋ＺＲ，ＤＨＺ＋ＤＨＺＲ）及赤霉素（ＧＡ３，ＧＡ４）的含量都明显高于健株．

关键词：桑树植原体 PCR 周年变化寄主激素水平