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EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 831-839页

作者：何嘉文李友廖科棋李胜男广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东湛江524002 广东医科大学附属医院神经病学研究所广东湛江524002

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 详细信息

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。

关键词：真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

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补阳还五汤化学成分、药理作用研究进展及质量标志物(Q-Marker)预测

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中草药 2024年第13期55卷 4575-4587页

作者：李海英贺鹏李文姣杨磊唐林胡超邓凯文潘雪贺福元湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 中药成药性与制剂制备湖南省重点实验室湖南长沙410208 湖南中医药大学中医药超分子机理与数理特征化实验室湖南长沙410208 中药药性与药效国家中医药管理局重点实验室湖南长沙410208

补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BHD)具有补气活血通络之功效和抗血栓、抗神经损伤、抑制细胞凋亡等药理作用,临床上常用于治疗缺血性脑卒中。通过对BHD的化学成分、药理作用进行系统总结与梳理,依照质量标志物(quality marker,Q-M... 详细信息

补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BHD)具有补气活血通络之功效和抗血栓、抗神经损伤、抑制细胞凋亡等药理作用,临床上常用于治疗缺血性脑卒中。通过对BHD的化学成分、药理作用进行系统总结与梳理,依照质量标志物(quality marker,Q-Marker)理念,从传递与溯源、特有、有效、复方配伍、可测和超分子“印迹性”6个方面对BHD的QMarker进行预测分析,提示黄芪甲苷、黄芪皂苷I、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、阿魏酸、川芎嗪、藁本内酯、芍药苷、苦杏仁苷、羟基红花黄色素A可作为该复方的Q-Marker,后续可选择这些Q-Marker为指标,根据药材、饮片、制剂的量值传递规律建立并控制BHD全过程质量可溯源体系。

关键词：补阳还五汤质量标志物质量控制黄芪甲苷毛蕊异黄酮芒柄花素芒柄花苷阿魏酸川芎嗪藁本内酯芍药苷苦杏仁苷

一种新的广义鲁棒主成分分析模型及其图像去噪应用

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系统科学与数学 2024年

作者：袁柳洋汪大为贾世会迟晓妮武汉科技大学理学院桂林电子科技大学数学与计算科学学院武汉科技大学湖北省冶金工业过程系统科学重点实验室

本文在结合加权Sp范数最小化的鲁棒主成分分析(WSNM-RPCA)模型与广义鲁棒主成分分析(GRPCA)模型的基础上,同时利用l2,1范数重新构造了一种新的广义鲁棒主成分分析(GWSLRPCA)模型.新的模型提升了对矩阵重要秩成分恢复的准确性,并运用随... 详细信息

本文在结合加权Sp范数最小化的鲁棒主成分分析(WSNM-RPCA)模型与广义鲁棒主成分分析(GRPCA)模型的基础上,同时利用l2,1范数重新构造了一种新的广义鲁棒主成分分析(GWSLRPCA)模型.新的模型提升了对矩阵重要秩成分恢复的准确性,并运用随机排序的交替方向乘子法对新模型进行求解.数值实验结果显示,新的模型GWSLRPCA对被混合噪声污染的图片不仅能分离出图片的有效低秩信息以及其他的噪声部分,而且GWSLRPCA的图像恢复效果更佳.在客观评价标准上GWSLRPCA的各项数据也优于Mean-Filter、WSNM-RPCA与GRPCA模型.

关键词：加权S 范数 l 范数混合噪声鲁棒性随机排序交替方向乘子法

中等职业学校学生压力感知与心理痛苦的关系:冗思和抑郁情绪的链式中介效应

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中国临床心理学杂志 2024年第3期32卷 685-688页

作者：林峰唐干姚兰谢福陈静邹涛贵州医科大学附属医院贵阳550004 遂宁市中心医院心身医学科遂宁629000 松桃苗族自治县中等职业学校铜仁554100 贵州医科大精神病学教研室贵阳550004

目的:探讨中职学生冗思和抑郁情绪在压力感知与心理痛苦之间的链式中介作用。方法:采用压力知觉量表、冗思反应量表、流调中心抑郁量表、三维心理痛苦量表对2661名中职学生进行调查。结果:(1)压力感知、冗思、抑郁情绪及心理痛苦两两呈... 详细信息

目的:探讨中职学生冗思和抑郁情绪在压力感知与心理痛苦之间的链式中介作用。方法:采用压力知觉量表、冗思反应量表、流调中心抑郁量表、三维心理痛苦量表对2661名中职学生进行调查。结果:(1)压力感知、冗思、抑郁情绪及心理痛苦两两呈显著正相关(r=0.393~0.713,P<0.001);(2)压力感知对心理痛苦的直接作用显著,并分别通过冗思和抑郁情绪的中介及两者的链式中介产生间接效应。结论:压力感知可直接影响心理痛苦,也可通过冗思与抑郁情绪间接影响心理痛苦。

关键词：中等职业学校学生压力感知冗思抑郁情绪心理痛苦

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NT3基因转染对噪声性耳聋的影响研究

系统医学 2024年第12期9卷 33-35,43页

作者：任毅侯涛黄巧廖行伟李念燊尹时华广西医科大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科广西南宁530007

目的验证阳离子脂质体介导神经营养因子3(Neurotrophin-3,NT3)基因转染对噪声致豚鼠耳聋的保护作用。方法选取广西医科大学动物实验中心提供的60只健康花色黑目豚鼠为研究对象,按随机数字表法分为5组,每组12只(实验过程中部分动物死亡,... 详细信息

目的验证阳离子脂质体介导神经营养因子3(Neurotrophin-3,NT3)基因转染对噪声致豚鼠耳聋的保护作用。方法选取广西医科大学动物实验中心提供的60只健康花色黑目豚鼠为研究对象,按随机数字表法分为5组,每组12只(实验过程中部分动物死亡,实际实验数据按每组10只统计)。Ⅰ组未受噪声影响,Ⅱ组注入人工外淋巴液未受噪声刺激,Ⅲ组注入人工外淋巴液后受噪声刺激,Ⅳ组在注入空质粒后受噪声刺激,V组在注入含NT3基因的质粒后受噪声刺激。噪声为4 kHz的稳态白噪声,强度100 dB,8 h/d,连续10 d,休息5 d,再通过听性脑干反应(Auditory Brain-Stem Response,ABR)测试和免疫组织化学染色来评估听阈变化和耳蜗螺旋神经节细胞中NT3蛋白的表达情况。结果V组ABR阈值高于Ⅰ、Ⅱ组,但低于Ⅲ、Ⅳ组,差异有统计学意义(P均<0.05)。耳蜗螺旋神经节细胞处NT3蛋白表达量以V组较其余各组更高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论NT3基因转染后阈值增幅减小,听功能受损有一定程度减轻,对噪声致豚鼠耳聋具有一定程度的保护作用。

关键词：神经营养因子3 基因转染阳离子脂质体耳蜗噪声

内分泌治疗绝经后乳腺癌继发骨质疏松症的研究进展

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中国骨质疏松杂志 2024年第2期30卷 234-239页

作者：蒋召磊刘春慧马建超沈卓睿李彦宾白涵睿内蒙古医科大学中医学院内蒙古呼和浩特010110

内分泌治疗绝经后乳腺癌继发骨质疏松症是亟待解决的全球公共卫生问题之一。绝经后乳腺癌与骨质疏松症密切相关。对于绝经后乳腺癌患者,西医多用内分泌治疗药物中的芳香化酶抑制剂,虽然能有效控制雌激素水平,提高生存率,但是会增加骨质... 详细信息

内分泌治疗绝经后乳腺癌继发骨质疏松症是亟待解决的全球公共卫生问题之一。绝经后乳腺癌与骨质疏松症密切相关。对于绝经后乳腺癌患者,西医多用内分泌治疗药物中的芳香化酶抑制剂,虽然能有效控制雌激素水平,提高生存率,但是会增加骨质疏松症、骨折发生的风险。因此,很有必要进行相关骨检测。对于骨质疏松症,西医药物治疗多用双膦酸盐类,短期疗效较为满意,但存在时间限制,不能长期应用。西医非药物治疗以调整生活方式为主。中医治疗本病的内治法,多从肝、脾、肾论治,能提高骨密度,减轻骨痛等症状,降低骨折的风险,疗效较为显著,副作用较少。中医外治法采用针灸、穴位埋线、穴位贴敷等疗法。本文从中西医两方面对内分泌治疗绝经后乳腺癌继发骨质疏松症的研究进展进行综述,以期在中西医防治本病方面取得更好的进展,为临床和科研提供更多的依据。

关键词：内分泌治疗绝经后乳腺癌骨质疏松症研究进展

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中医药治疗“新冠后症状”经验荟萃

实用中医内科杂志 2024年

作者：申一鸣邵冰蒋华裴颖皓陈秋华南京中医药大学附属医院

新型冠状病毒（简称“新冠感染”）在全球范围内迅速蔓延，全球约六亿多人次感染新冠，众多新冠恢复期患者仍存在长期不适，例如：乏力、抑郁、胸闷等。新冠后症状（Post COVID-19 Condition，PCC）概念的提出说明如何进行PPC治疗是当... 详细信息

新型冠状病毒（简称“新冠感染”）在全球范围内迅速蔓延，全球约六亿多人次感染新冠，众多新冠恢复期患者仍存在长期不适，例如：乏力、抑郁、胸闷等。新冠后症状（Post COVID-19 Condition，PCC）概念的提出说明如何进行PPC治疗是当今重点工作。中医药抗疫经验丰富，更有诸多关于瘥后防护等诊疗方案。该文结合临床及相关文献总结了中医关于疫病瘥后的认识，在中西医协同的康复实践背景下，提出中医关于“新冠后症状”治法治要，基于蒋院长团队丰富新冠临床诊疗经验，为“新冠后综合征”的中医治疗提供新思路。

关键词：新冠后症状中医诊疗疫病瘥后新冠病毒感染

芪仙通络方对脑梗死大鼠健侧皮质脊髓束重塑及运动功能恢复的影响及机制

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中药新药与临床药理 2024年第9期35卷 1319-1328页

作者：周胜强伍大华李博陈彦君黄佳王琦曾雯谭玲娟邓奕辉刘芳湖南省中医药研究院附属医院湖南长沙410006 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学湖南长沙410208 中山大学附属第三医院肇庆医院广东肇庆526000

目的观察芪仙通络方对脑梗死大鼠健侧皮质脊髓束(CST)重塑与运动功能恢复的影响,并从神经重塑相关调控因子角度探讨其潜在分子机制。方法采用线栓法复制大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠模型。将50只模型复制成功的大鼠随机分为模型组、胞磷胆... 详细信息

目的观察芪仙通络方对脑梗死大鼠健侧皮质脊髓束(CST)重塑与运动功能恢复的影响,并从神经重塑相关调控因子角度探讨其潜在分子机制。方法采用线栓法复制大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠模型。将50只模型复制成功的大鼠随机分为模型组、胞磷胆碱组(0.054 g·kg^(-1))及芪仙通络方低、中、高剂量组(7.83、15.66、31.32 g·kg^(-1)),每组10只,另设假手术组(10只)。术后第3天开始灌胃干预,每日1次,连续26 d。于术后第3、14、28天采用Longa评分法评价大鼠粗略运动功能,走横木试验(BWT)评分法评价大鼠精细运动功能;术后第14天健侧运动皮层注射神经示踪剂生物素葡聚糖胺(BDA),顺行示踪皮质脊髓束。术后第28天,采用免疫组化法检测健侧运动皮层及颈髓后索生长相关蛋白43(GAP-43)、BDA阳性纤维表达;免疫荧光法检测颈髓灰质内BDA阳性纤维与突触前标志蛋白囊泡谷氨酸转运体1(VGLUT1)共定位面积;Western Blot法检测健侧运动皮层中脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)以及神经重塑抑制因子勿动蛋白A(Nogo-A)、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)和髓鞘相关糖蛋白(MAG)的表达;Pearson相关分析法分析Longa评分、BWT评分与BDA/VGLUT1共定位面积的相关性。结果与假手术组比较,模型组大鼠运动功能缺损明显,各时间点Longa评分明显升高(P<0.01),BWT评分明显降低(P<0.05,P<0.01),健侧运动皮层及颈髓的GAP-43蛋白表达水平明显升高(P<0.05),颈髓后索越边纤维数量明显增加(P<0.05),颈髓灰质内的BDA/VGLUT1共定位面积明显增加(P<0.05),健侧运动皮层中BDNF、GDNF、NGF蛋白表达明显上调(P<0.05),而Nogo-A、OMgp、MAG蛋白表达明显下调(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠MCAO术后第14、28天的Longa评分均显著降低(P<0.01),BWT评分均显著升高(P<0.01),健侧运动皮层及颈髓的GAP-43蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),颈髓后索越边纤维数量显著增加(P<0.01),颈髓灰质内的BDA/VGLUT1共定位面积均显著增加(P<0.01),健侧运动皮层中BDNF、GDNF、NGF蛋白表达均显著上调(P<0.05,P<0.01),而Nogo-A、OMgp、MAG蛋白表达均明显下调(P<0.05),其中高剂量组作用最明显。Longa评分与BDA/VGLUT1共定位面积显著负相关(r=-0.89,P<0.01),而BWT评分与BDA/VGLUT1共定位面积显著正相关(r=0.84,P<0.01)。结论芪仙通络方可促进MCAO大鼠脑梗死后健侧CST重塑,进而改善运动功能,其分子机制可能与调节健侧运动皮层神经重塑相关调控因子的表达有关。

关键词：芪仙通络方脑梗死皮质脊髓束神经重塑运动功能大鼠

颈椎定点旋转手法在体生物力学量化及影响因素分析

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中国组织工程研究 2025年第3期29卷 486-492页

作者：梁基耀周红海韦贵康苏少亭陈龙豪何心愉刘粮酺广西中医药大学研究生院广西壮族自治区南宁市530001 广西中医药大学骨伤学院广西壮族自治区南宁市530001 广西中医骨伤科生物力学与损伤修复重点实验室广西壮族自治区南宁市530001 国医大师韦贵康学术思想与临床诊疗传承发展研究中心广西壮族自治区南宁市530001 浙江中医药大学附属第三临床医学院浙江省杭州市310000

背景:颈椎定点旋转手法属于技术要求较高的力学操作,但目前其生物力学还缺少相关量化数据;且颈椎定点旋转手法的影响因素研究包括了众多参数并且存在差异性,需要进一步对其影响因素进行分析,以完善其相关数据。目的:量化颈椎定点旋转手... 详细信息

背景:颈椎定点旋转手法属于技术要求较高的力学操作,但目前其生物力学还缺少相关量化数据;且颈椎定点旋转手法的影响因素研究包括了众多参数并且存在差异性,需要进一步对其影响因素进行分析,以完善其相关数据。目的:量化颈椎定点旋转手法在体生物力学参数,探讨各生物力学参数之间的相关性,及研究对象个体特征差异对手法力学参数的影响。方法:选取35例颈椎病患者为测试对象,均为广西中医药大学第一附属医院仁爱分院骨伤科门诊就诊者。术者佩戴穿戴式力学测量手套采集手法力学参数,包括拇指预加载力、拇指最大推力、掌心预加载力、掌心旋扳力和掌心旋扳最大作用力。并采集患者个人特征参数,包括年龄、身高、体质量和颈围。对手法操作过程中的关键力学参数进行特征分析及不同个体特征进行量化,对力学指标参数进行Spearman相关性分析;分析不同个体特征参数对生物力学可能存在的影响。结果与结论:(1)双侧力学参数相比,左侧操作与右侧操作无显著差异性(P>0.05)。(2)拇指预加载力均值为(7.21±1.19)N、拇指最大推力均值为(28.40±4.48)N、掌心预加载力均值为(5.67±2.49)N、掌心旋扳力均值为(10.90±5.11)N、掌心旋扳最大作用力均值为(16.00±7.27)N。(3)掌心预加载力和掌心旋扳力存在显著正相关(Rs=0.812,P<0.01);掌心预加载力和掌心旋扳最大作用力存在显著正相关(Rs=0.773,P<0.01);掌心旋扳力和掌心旋扳最大作用力存在显著正相关(Rs=0.939,P<0.01)。(4)患者体质量与拇指预加载力、掌心预加载力、掌心旋扳力及掌心旋扳最大作用力之间存在显著正相关(P<0.05)。(5)结果证实,颈椎定点旋转手法治疗颈椎病操作中生物力学有一定的标准量值。该手法左右侧操作无显著差异性,具有较好的一致性和可重复性。掌心预加载力、掌心旋扳力及掌心旋扳最大作用力3种力之间存在一致性和协调性,对于治疗效果的贡献是相近的。患者的体质量是影响颈椎定点旋转手法重要的因素。

关键词：颈椎定点旋转手法生物力学影响因素分析量化研究颈椎病正骨手法保守治疗个体特征