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慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17RNA干扰对气道上皮细胞MMP-9表达及NF-κB活性的影响

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中国药理学通报 2014年第4期30卷 559-565页

作者：严建平李亚清钟晖陈淳顾超浙江省人民医院呼吸内科浙江杭州310014

目的探讨脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的TNF-α/NF-κB信号转导机制及慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)RNA干扰(RNAi)对MMP-9表达的影响。方法构建ADAM17 siRNA慢病毒载体、包装重组慢病毒。以NF... 详细信息

目的探讨脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的TNF-α/NF-κB信号转导机制及慢病毒介导的解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)RNA干扰(RNAi)对MMP-9表达的影响。方法构建ADAM17 siRNA慢病毒载体、包装重组慢病毒。以NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)或TNF-α拮抗剂(etanercept)预处理HBE4-E6/E7细胞,以LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以重组慢病毒感染HBE4-E6/E7细胞72 h后,以LPS或TNF-α刺激HBE4-E6/E7细胞24 h。以半定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;以酶联免疫吸附试验检测TNF-α蛋白含量;以Western blot检测MMP-9蛋白表达;以凝胶阻滞分析实验检测NF-κB活性。结果 LPS或TNF-α刺激均明显增加HBE4-E6/E7细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P0.05)。PDTC明显抑制TNF-α诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达及NF-κB活性(P<0.05)。结论 TNF-α/NF-κB信号通路参与调控LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9的表达,ADAM17通过调节TNF-α释放在其信号通路上游起到重要作用。

关键词： RNA干扰慢病毒气道上皮细胞解整合素-金属蛋白酶17 基质金属蛋白酶肿瘤坏死因子-α a disintegrin and metalloproteinase 17 tumor necrosis factor-α

杭州地区1998—2005年志贺菌分子分型及变异研究

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中华流行病学杂志 2007年第2期28卷 206-207页

作者：濮小英潘劲草孟冬梅汪皓秋黄志成顾亚明杭州市疾病预防控制中心 310006 浙江大学医学院

脉冲场凝胶电泳（PFGE）是一种重复性好、分辨率高的细菌分子分型方法，已被广泛应用于病原性细菌的分子流行病学研究阻。作者利用PFGE分子分型方法对1998—2005年杭州地区分离到的116株志贺菌进行分子分型，以探索志贺菌的PFGE型别变... 详细信息

脉冲场凝胶电泳（PFGE）是一种重复性好、分辨率高的细菌分子分型方法，已被广泛应用于病原性细菌的分子流行病学研究阻。作者利用PFGE分子分型方法对1998—2005年杭州地区分离到的116株志贺菌进行分子分型，以探索志贺菌的PFGE型别变异情况。

关键词：志贺菌脉冲场凝胶电泳

大鼠肺缺血再灌注损伤后血小板内皮细胞黏附分子-1／CD31的动态变化

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中华创伤杂志 2008年第6期24卷 474-475页

作者：王海涛严志焜周永列邱莲女潘晓华胡志斌许林海钱文伟浙江省人民医院心胸外科杭州310014 浙江省人民医院检验中心杭州310014 浙江省人民医院心脏移植实验室杭州310014

笔者通过观察大鼠肺缺血再灌注（ischemia-reperfusion，IR）后血液中中性粒细胞和淋巴细胞血小板内皮细胞黏附分子（PECAM）-1／CD31的动态变化，同时在光镜和透射电镜下观察组织细胞的形态结构变化，从而分析PECAM-1／CD31表达与IR损... 详细信息

笔者通过观察大鼠肺缺血再灌注（ischemia-reperfusion，IR）后血液中中性粒细胞和淋巴细胞血小板内皮细胞黏附分子（PECAM）-1／CD31的动态变化，同时在光镜和透射电镜下观察组织细胞的形态结构变化，从而分析PECAM-1／CD31表达与IR损伤的关系。现报告如下。

关键词：血小板内皮细胞黏附分子-1 肺缺血再灌注损伤 CD31表达动态变化大鼠 PECAM-1 形态结构变化中性粒细胞

细菌性脑膜炎动物模型的脑脊液早期细菌动力学变化

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中华传染病杂志 2010年第5期28卷 267-272页

作者：徐凯进王华英 [居辶]红珍陈云波魏泽庆李永涛盛吉芳李兰娟浙江大学医学院附属第一医院感染科传染病诊治国家重点实验室杭州310003

目的建立细菌性脑膜炎动物模型，了解细菌感染后48h内脑脊液（CSF）细菌载量变化规律，为疾病的诊疗及预后判断提供参考依据。方法以新西兰大白兔作为研究对象，通过小脑延髓池穿刺建立细菌性脑膜炎动物模型，观察不同菌量的大肠埃希菌... 详细信息

目的建立细菌性脑膜炎动物模型，了解细菌感染后48h内脑脊液（CSF）细菌载量变化规律，为疾病的诊疗及预后判断提供参考依据。方法以新西兰大白兔作为研究对象，通过小脑延髓池穿刺建立细菌性脑膜炎动物模型，观察不同菌量的大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌（金葡菌）建立模型时动物的死亡情况，明确CSF感染菌量与动物死亡率间的对应关系。选择合适的接种菌量，进行脑膜炎CSF细菌载量观察实验。将实验动物分为4组（每组12只）：大肠埃希菌脑膜炎模型组、大肠埃希菌脑膜炎＋头孢曲松治疗组、金葡菌脑膜炎模型组、金葡菌脑膜炎＋万古霉素治疗组，在建立模型后0、12、24、36和48h分别进行CSF细菌定量培养、CSF及外周血WBC计数，进而分析细菌性脑膜炎CSF细菌载量的变化规律，及其与动物早期死亡率、抗菌药物治疗、CSF的WBC计数间的关系。CSF细菌载量、WBC计数曲线的显著性检验采用协方差分析，相关性检验采用偏相关分析。结果CSF感染菌量与动物死亡率间呈现s型曲线关系，CSF细菌载量在蛛网膜下腔接种细菌12～24h达到高峰，而后逐步下降，有效的抗菌药物治疗可显著加快下降过程，大肠埃希菌脑膜炎模型组与大肠埃希菌脑膜炎＋头孢曲松治疗组相比（F=27．10，P〈0．01），金葡菌脑膜炎模型组与金葡菌脑膜炎＋万古霉素治疗组相比（F=5．97，P=0．016），差异均有统计学意义。大肠埃希菌脑膜炎模型组和金葡菌脑膜炎模型组中的CSF的WBC计数与CSF细菌载量之间存在正相关性（r=0．89、0．84；p=0．046、0．049）。结论在细菌性脑膜炎的治疗中，应早期、足量地使用有效抗生素，以控制CSF细菌载量，降低死亡率。CSF的WBC计数可作为反映CSF细菌载量的指标，指导临床治疗。

关键词：脑膜炎,细菌性大肠埃希菌葡萄球菌,金黄色脑脊髓液疾病模型,动物抗菌药微生物学技术

多西环素对体外培养的牛角膜肌成纤维细胞核仁组成区嗜银蛋白及平滑肌肌动蛋白表达的抑制作用

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中华眼科杂志 2013年第5期49卷 433-437页

作者：刘曼丽邹文进黄明汉赵静博付馨余王松广西医科大学第一附属医院眼科南宁530021 南宁爱尔眼科医院

目的探讨多西环素对角膜肌成纤维细胞核仁组成区嗜银蛋白（AgNOR）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的抑制作用。方法实验研究。分别用基础培养液配制的1．0及2．0g／LⅠ型胶原酶对牛角膜基质层进行二步消化分离，制成细胞悬液后转入... 详细信息

目的探讨多西环素对角膜肌成纤维细胞核仁组成区嗜银蛋白（AgNOR）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的抑制作用。方法实验研究。分别用基础培养液配制的1．0及2．0g／LⅠ型胶原酶对牛角膜基质层进行二步消化分离，制成细胞悬液后转入培养瓶中用RPMI-1640培养液（含10％胎牛血清）培养。取生长良好的细胞进行波形蛋白免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞化学染色。选用生长良好的牛角膜肌成纤维细胞分成3个组：阴性对照组（无药物干预），地塞米松组（地塞米松120mg／L）及各浓度梯度（10、20、40、60及80mg／L）多西环素组，每组30例。指标测定：采用AgNOR及α-SMA免疫荧光细胞化学染色等技术测定各实验组在对角膜肌成纤维细胞干预24和48h后，对细胞DNA复制及α-SMA合成的影响。各组间比较采用单因素方差分析，同一药物浓度下两组间比较采用两样本均数比较t检验。结果在体外成功分离培养牛角膜肌成纤维细胞，显微镜下观察及α-SMA免疫荧光细胞化学染色后证实所培养的细胞为角膜肌成纤维细胞。细胞被干预24h后，阴性对照组AgNOR颗粒数为（6．40±0．62）个，AgNOR颗粒面积为（34．80±2．36）μm。；60mg／L多西环素组AgNOR颗粒数（2．23±0．43）个，AgNOR颗粒面积为（19．91±2．15）μm2。细胞被干预48h后，阴性对照组AgNOR颗粒数为（7．27±0．64）个，AgNOR颗粒面积为（36．27±1．99）Ixm。；60mg／L多西环素组AgNOR颗粒数为（2．80±0．76）个，AgNOR颗粒面积为（13．75±2．09）μm2。差异有统计学意义（干预24h：F=252．55，202．16；P〈0．05；干预48h：F：169．38，853．23；P〈0．05；在同一浓度干预下：江6．98，11．62；P〈0．05）。当多西环素浓度达60mg／L时作用效果与120mg／L地塞米松相当，差异无统计学意义（t=1．182，0．213；P〉0．05）。α-SMA免疫荧光细胞化学染色后行荧光定量分析，地塞米松对α-SMA的合成无明显作用（t=1．096，P：0．287）；而多西环素组可抑制角膜肌成纤维细胞中α-SMA的合成，各浓度多西环素组细胞荧光染色的灰度值分别为189．90±7．48、140．20±7．79、113．20±8．98、98．00±3．50、85．50±4．99，差异有统计学意义（F=761．79，P=0．00）。结论在10～80mg／L浓度范围内，多西环素可抑制体外培养的牛角膜肌成纤维细胞的AgNOR增生，呈剂量-时间-效应依赖性；在药物浓度达到60mg／L时，与120mg／L地塞米松拥有相当的作用效果。多西环素同时具有抑制细胞合成α-SMA的作用，与地塞米松比较，对抑制角膜瘢痕的形成更具研究价值。

关键词：角膜肌纤维母细胞多西环素核仁组成区染色与标记肌动蛋白类细胞 ,培养的

FDG PET对骨肉瘤新辅助化疗疗效评估的初步研究

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中华骨科杂志 2007年第9期27卷 699-704页

作者：叶招明朱江军张宏李晶李伟栩林袱陶惠民杨迪生浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009 浙江大学医学院附属第二医院PET中心杭州310009

目的通过与病理学肿瘤坏死率相比较，评估18氟脱氧葡萄糖正电子发射断层显像（F-18-fluoro-2-deoxy—D—glucose positron emission tomography，FDG PET）对骨肉瘤新辅助化疗效果的判断价值。方法2004年4月至2006年12月，共有15例（女... 详细信息

目的通过与病理学肿瘤坏死率相比较，评估18氟脱氧葡萄糖正电子发射断层显像（F-18-fluoro-2-deoxy—D—glucose positron emission tomography，FDG PET）对骨肉瘤新辅助化疗效果的判断价值。方法2004年4月至2006年12月，共有15例（女6例，男9例；年龄7～33岁，平均年龄17-3岁）行新辅助化疗的原发性骨肉瘤患者进行全身或局部FDGPET检查。所有患者均行化疗前和化疗后两次FDGPET检查。FDG—PET检查后，分别计算每例患者FDG的最大标准摄取值（SUV）和肿瘤／背景比值（TBR）。化疗结束后行保肢或者截肢手术，术后切除肿瘤按照Salzer-Kuntschik系统评估病理学肿瘤坏死率反应的化疗效果（I～Ⅲ级为效果良好，Ⅳ～Ⅵ级为效果差）。结果肿瘤坏死率评估显示：8例肿瘤坏死率大于90％，化疗效果良好；7例肿瘤坏死率小于90％，化疗效果不佳。统计学分析提示，化疗后与化疗前的最大标准摄取值之比（SUV2／SUVl）、肿瘤／背景比值之比（TBR2／TBRl）以及化疗后肿瘤背景比值（TRB2）均与肿瘤坏死率相关（P〈0．01，P〈0．001，P〈0．001）。所有化疗效果良好的患者TBR2／TBRl值小于0．46，化疗效果不良者均大于0．49。结论FDGPET为评价骨肉瘤患者化疗效果提供了一种可行的无创检查方法。肿瘤／背景比值与最大标准摄取值相比对评价骨肉瘤的化疗效果更有价值。

关键词：化学疗法辅助骨肉瘤正电子发射断层显像术

间歇性高容量血液滤过对严重脓毒症患者Toll样受体表达及器官功能的影响

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中华创伤杂志 2013年第8期29卷 785-789页

作者：邱泽亮张宁徐俊龙宁易平楼天正张剑温州医学院附属第六医院重症医学科丽水323000

目的探讨间歇性高容量血液滤过（pulse high volume hemofiltration，PHVHF）对严重脓毒症患者外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）表面Toll样受体2（Toll—like receptor 2，TLR2）和TLR4 mRNA表达的临床意义。方法40例严重脓毒症患者按随机数字表法分为常规治疗组和PHVHF组，每组20例。另选15例健康志愿者作为对照组。在治疗前、治疗24，48，72 h RT—PCR法检测单核细胞TLR2和TLR4 mRNA表达，ELISA检测血浆中TNF—α和IL-6浓度。比较各组生命体征、血清胆红素（BIL）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、乳酸水平（Lac）、氧合指数（PaO2／FiO2）、急性生理和慢性健康评估Ⅱ（acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ，APACHE Ⅱ）评分、序贯器官功能衰竭（sequential organ failure assessment，SOFA）评分变化及预后，并监测治疗过程中的并发症。结果脓毒症组TLR2和TLR4mRNA表达及TNF-α、IL-6的浓度水平均明显高于对照组（P〈0．01）。PHVHF组72h后，TNF—α和IL-6水平较治疗前明显下降（P〈0．01），PBMC表面TLR2和TLR4表达分别与常规治疗组同时相点比较显著降低（P〈0．01）；而常规治疗组治疗前后比较差异无统计学意义。PHVHF组治疗72h后，平均动脉压（MAP）和PaO2／FiO2较治疗前明显上升，Cr、BUN、Lac、APACHEHEⅡ分和SOFA评分均较治疗前显著降低（P〈0．05），且与常规治疗组同时相点比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论PHVHF可降低严重脓毒症患者的全身炎症反应，改善重要器官功能水平，缩短ICU住院时间，下调PBMC表面TLR2、TLR4表达可能是其治疗严重脓毒症的新机制。

关键词：血液滤过脓毒症 Toll样受体

超声监测大鼠失血性休克及再灌注过程肾血流动力学的研究

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中国超声医学杂志 2003年第4期19卷 13-16页

作者：杨红李智贤李艳宁赵晓琴邝晓聪广西医科大学病理生理教研室 530021南宁市广西医科大学第一附属医院超声科广西医科大学第一附属医院急诊科

目的 :探讨超声监测大鼠失血性休克及再灌注过程肾血流动力学改变的可行性及可靠性。方法 :大鼠失血性休克前、后及再灌注 2 4小时内分别行 2 DUS、彩色血流速度图 (CVI)检查 ,脉冲多普勒 (PW)测量肾动脉收缩期峰值血流速度 (Vmax)、舒... 详细信息

目的 :探讨超声监测大鼠失血性休克及再灌注过程肾血流动力学改变的可行性及可靠性。方法 :大鼠失血性休克前、后及再灌注 2 4小时内分别行 2 DUS、彩色血流速度图 (CVI)检查 ,脉冲多普勒 (PW)测量肾动脉收缩期峰值血流速度 (Vmax)、舒张末期血流速度 (Vmin)、阻力指数 (RI)、搏动指数 (PI) ;肾静脉流速。结果 :休克后肾皮质回声增强 ,肾内血流分布减少 ,皮质血流消失 ;肾动静脉流速降低 ,肾动脉 RI、PI升高。再灌注后肾内血流增多 ,皮质出现血流信号 ,肾血流速度升高 ,RI、 PI下降。结论 :超声监测能准确反映大鼠休克过程肾血流动力学改变 ,可作为无创性监测工具

关键词：超声休克肾血流动力学

尼莫地平对伴轻度认知功能损害2型糖尿病患者早期防治初探

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中华内分泌代谢杂志 2011年第10期27卷 836-838页

作者：郭如雅顾爱明干正琦方立曙嘉兴市第一医院内分泌科 314000

以蒙特利尔认知评估量表（MoCA）、脑诱发电位失匹配负波（MMN）为工具选取98例2型糖尿病合并轻度认知功能损害患者。选择其中48例患者在常规治疗同时给予尼莫地平20mg/d（用药组），观察与其他50例患者（对照组）18个月后MoCA、MMN的... 详细信息

以蒙特利尔认知评估量表（MoCA）、脑诱发电位失匹配负波（MMN）为工具选取98例2型糖尿病合并轻度认知功能损害患者。选择其中48例患者在常规治疗同时给予尼莫地平20mg/d（用药组），观察与其他50例患者（对照组）18个月后MoCA、MMN的变化。两组间MoCA评分未见明显差异（P〉O．05）。用药组MMN的潜伏期、波幅较治疗前改善，差异有统计学意义（P〈0．05）；对照组MMN的波幅较治疗前进一步降低，差异有统计学意义（P〈0．05），但MMN潜伏期治疗前后没有显著性差异（P〉0．05）。

关键词：糖尿病 2型轻度认知功能损害预防治疗尼莫地平