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妊娠期小鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素水平变化研究

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动物医学进展 2024年第5期45卷 46-50页

作者：张曼彭丽娜王朝霞上海交通大学实验动物中心上海200240

为了探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)在小鼠妊娠期间血浆中的浓度变化及其与小鼠妊娠持续时间的关系,选取自然交配的见栓雌鼠,自见栓当天开始,通过面颊采血分离、收集血浆,采用酶联免疫吸附试验测定CRH含量。通过对孕鼠妊娠期间、分... 详细信息

为了探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)在小鼠妊娠期间血浆中的浓度变化及其与小鼠妊娠持续时间的关系,选取自然交配的见栓雌鼠,自见栓当天开始,通过面颊采血分离、收集血浆,采用酶联免疫吸附试验测定CRH含量。通过对孕鼠妊娠期间、分娩当天及分娩后24 h血浆CRH水平的分析,发现正常妊娠孕鼠血浆中CRH水平在妊娠早期即升高,妊娠13.5 d起血浆CRH水平[(21.6±3.90)pg/mL]呈进行性升高,妊娠晚期升高显著,至分娩时达最高水平,分娩后24 h CRH基本恢复至正常值;早产孕鼠13.5 d时血浆含量高于正常妊娠的小鼠,而难产孕鼠的CRH则明显低于正常妊娠小鼠;孕鼠13.5 d血浆中CRH的含量与妊娠持续时间呈负相关。说明小鼠血浆中CRH水平可作为判定妊娠持续时间的一个标志,用于预测孕鼠的分娩时间,为小鼠的剖宫产生物净化提供理论基础。

关键词：促肾上腺皮质激素释放激素分娩妊娠生物净化

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圆圈病毒人源1型实时荧光RAA快速检测方法的建立

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中国家禽 2024年

作者：余丹赵俊柯尹文巧张艳芳李小凤吴嫒琼谢志勤喻华英谢芝勋广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室

研究旨在建立一种快速检测圆圈病毒人源1型（GyH1）的方法。试验通过比对GenBank中GyH1基因组序列，基于序列保守区设计特异性引物和探针，经过筛选和优化，建立GyH1实时荧光重组酶介导核酸等温扩增（RAA）检测方法。结果显示：建立的... 详细信息

研究旨在建立一种快速检测圆圈病毒人源1型（GyH1）的方法。试验通过比对GenBank中GyH1基因组序列，基于序列保守区设计特异性引物和探针，经过筛选和优化，建立GyH1实时荧光重组酶介导核酸等温扩增（RAA）检测方法。结果显示：建立的实时荧光RAA方法可在20 min内鉴定GyH1；该方法特异性强，与圆圈病毒禽源1型（GyVg1）、鸡传染性贫血病毒（CIAV）、血清4型禽腺病毒（FAdV-4）、H9亚型禽流感病毒（H9 AIV）、新城疫病毒（NDV）、禽传染性支气管炎病毒（IBV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）、鸡细小病毒(ChPV)、J亚群禽白血病病毒（ALV-J）、鸡毒支原体（MG）、禽滑液囊支原体（MS）无交叉反应；敏感性高，筛出的引物探针可有效扩增，优化反应条件后检测限可达10～2拷贝/μL；重复性好，批内和批间变异系数均小于4%。采用该方法与荧光定量PCR方法同时对231份样品进行检测，两者检测结果相符。研究表明，成功建立了实时荧光RAA方法，可用于GyH1的鉴别检测，为基层快速检测GyH1提供了新的技术手段。

关键词：圆圈病毒人源1型重组酶介导核酸等温扩增快速检测即时检测

竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌的生物学特性研究及安全性初步评价

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中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 201-206页

作者：陈童锦悦覃绍敏韦珏刘金凤陈凤莲许力士梁晶兰干球吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。... 详细信息

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。结果表明:(1) GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均生长快,1.5 h即可进入对数生长期、5 h即可达到最大生长量;(2)抗逆性强:3株受试菌在pH2.5的条件下存活率均达到65%以上、在胆盐浓度0.3%和0.5%的环境下仍能继续存活增殖;(3)自凝聚及疏水能力好:孵育到24 h,3株菌的自凝聚率均达到85%以上,GL-5和GL-8的疏水率均高于40%;(4) 3株受试菌对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用。GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均具有优良的生物学特性,且安全性好,可作为畜禽微生态制剂良好的益生菌候选菌株。

关键词：枯草芽孢杆菌生物学特性安全性评价

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神农洁蜣螂两性成虫肠道微生物多样性分析

环境昆虫学报 2024年第1期46卷 201-208页

作者：毛月袁辉陈红心周启立熊涛长江大学生命科学学院湖北荆州434000 武汉大北农农牧发展有限公司武汉430000

昆虫肠道微生物多样性对宿主的生长发育以及营养物质的消化和吸收等起着非常重要的作用。本研究利用16S rRNA基因序列构建神农洁蜣螂Catharsius molossus雌性成虫和雄性成虫肠道微生物的克隆文库,旨在探究其菌群的结构并加以对比和分析... 详细信息

昆虫肠道微生物多样性对宿主的生长发育以及营养物质的消化和吸收等起着非常重要的作用。本研究利用16S rRNA基因序列构建神农洁蜣螂Catharsius molossus雌性成虫和雄性成虫肠道微生物的克隆文库,旨在探究其菌群的结构并加以对比和分析,采用Illumina NovaSeq高通量测序的方法揭示两种菌群组成方面的相似性和差异性。结果表明:神农洁蜣螂雌性成虫和雄性成虫肠道微生物在结构和组成方面存在着一定的差异。雌性成虫肠道菌群的物种丰富度和物种多样性都高于雄性成虫。雌性成虫、雄性成虫体内肠道菌群共有1 253个ASVs,归属于20个门、35个纲、54个目、134个科、253个属,其中雌性成虫肠道菌群的ASVs有1 024个,而雄性成虫肠道菌群的ASVs有410个,二者优势菌群虽然都为阴道球菌属Vagococcus,但二者所占的比例不同。本研究分析了神农洁蜣螂雌雄成虫肠道微生物多样性及群落在结构和组成方面的差异,为探究神农洁蜣螂雌雄成虫的肠道微生物的潜在功能,以及其肠道菌群的开发应用提供了理论支持。

关键词：神农洁蜣螂成虫雌性雄性肠道菌群 Illumina NovaSeq高通量测序 16S rRNA

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通过抑制caspase-8活性提高PRRSV体外培养滴度的初步研究

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 27-34页

作者：钟华刘金凤陈冰覃绍敏陈凤莲马玲林俊毛燕秦树英白安斌广西民族大学海洋与生物技术学院南宁530006 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁530001

探讨通过凋亡抑制剂阻断PRRSV诱导的细胞凋亡来促进PRRSV体外复制,从而提高PRRSV体外培养滴度的可行性。本研究以PRRSV高致病毒株(HP-PRRSV)感染Marc-145细胞,并用三种凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHDFMK)分别处理PRRSV感染细... 详细信息

探讨通过凋亡抑制剂阻断PRRSV诱导的细胞凋亡来促进PRRSV体外复制,从而提高PRRSV体外培养滴度的可行性。本研究以PRRSV高致病毒株(HP-PRRSV)感染Marc-145细胞,并用三种凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHDFMK)分别处理PRRSV感染细胞,通过比较在不同的浓度、不同的作用时间处理下PRRSV培养滴度(TCID50)来筛选最佳抑制剂及其最佳使用浓度和作用时间。同时采用caspase-8活性蛋白酶检测试剂盒、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、流式细胞术等检测在最佳抑制剂作用下caspase-8活性、细胞凋亡及其通路相关因子表达情况。结果显示:z-IETD-FMK(caspases-8特异性抑制剂)为最佳抑制剂,10μmol/L为最佳使用浓度,PRRSV感染细胞48 h后加入10μmol/L Z-IETD-FMK能最大限度提高PRRSV体外培养滴度。此外,PRRSV感染Marc-145细胞后,细胞caspase-8活性显著增加,且随着感染时间的延长,细胞凋亡率及促凋亡因子Bax均呈上升趋势,而抑凋亡因子Bcl-2表达水平却呈下降趋势;用抑制剂z-IETD-FMK处理后,细胞caspases-8活性下调,细胞凋亡率也下降,Bax表达量显著低于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01),与此相反Bcl-2的表达水平为升高趋势,显著高于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01)。说明,caspase-8特异性抑制剂能有效抑制PRRSV诱导的细胞凋亡。结果提示HPPRRSV感染可通过caspase-8途径诱导Marc-145细胞凋亡,从而抑制病毒的复制。使用caspase-8特异性抑制剂可有效抑制细胞凋亡,进而提高病毒体外培养滴度。

关键词： HP-PRRSV caspase 细胞凋亡活性检测

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绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒的分离鉴定及全基因组分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：李霞何艺蔡旭航罗润波郭容利索朗斯珠毛立李彬西藏农牧学院江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室阜康市城关镇农业(畜牧业)发展服务中心西北农林科技大学

为了解绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus， MRV）的生物学特性及全基因组特征，本研究从绵羊腹泻病料中分离了一株MRV，命名为MRV-XJ23株，经RT-PCR、电镜观察和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定后，扩增病毒全基因组... 详细信息

为了解绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus， MRV）的生物学特性及全基因组特征，本研究从绵羊腹泻病料中分离了一株MRV，命名为MRV-XJ23株，经RT-PCR、电镜观察和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定后，扩增病毒全基因组进行同源性及遗传进化分析。研究结果表明，MRV-XJ23分离株可在MDBK细胞稳定传代，产生特异的细胞病变，病毒滴度为106TCID50·mL-1。MRV感染细胞经IFA检测可观察到特异荧光，电镜可观察到直径约70 nm的无囊膜病毒粒子。经RT-PCR扩增和测序获得MRV全基因组，该毒株共10个节段，全长23 534 bp。序列对比及遗传进化分析结果显示，MRV-XJ23株为MRV-1血清型，其在韩国蝙蝠源BatMRV2/SNU1/Korea/2021毒株基础上，与日本的人源Homo sapiens/Osaka2005株L3、M2、S4基因、印度牛源C/bovine/Indiana/MRV00304/2014株S1基因重配，形成一株新的MRV。本研究首次从腹泻绵羊肛拭子中分离获得一株MRV-1型重配毒株，证明绵羊可感染MRV，拓宽了病毒感染宿主谱，且感染毒株为蝙蝠源、人源和牛源MRV重配毒株，证明这些毒株跨物种感染后发生了复杂的重配。本研究揭示了MRV在各物种中循环传播对公共卫生的风险，提升了深入研究MRV在绵羊乃至家畜中的流行病学、重配规律和致病性的重要性。

关键词：哺乳动物正呼肠孤病毒绵羊分离鉴定重配进化分析

基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒快速检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3237-3246页

作者：于晶雪韦珊珊覃绍敏吴健敏杨丽华陈凤莲许力士秦树英华俊韦珏方芳刘金凤广西大学动物科学技术学院南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室农业农村部(广西)东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001

[目的]本研究将CRISPR/Cas12a系统与反转录重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)结合,拟建立一种基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)快速检测方法。[方法]分析不同基因型PRRSV全基因组序列,在3′-UTR端保守区设计重组酶介导等温核酸扩增技术(RAA)引物、crRNA及DNA报告底物分子,筛选RT-RAA最佳引物对。表达纯化AsCas12a蛋白,并以质粒为标准品,经RT-RAA扩增后,将产物加入CRISPR/Cas12a系统,建立PRRSV的CRISPR/Cas12a-RT-RAA检测方法,分别以PRRSV、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)核酸为模板验证建立方法的特异性,以不同浓度的pMD18T-PRRSV为模板验证建立方法的敏感性。以5.62×10^(6)、5.62×10^(3)、5.62拷贝数/μL的质粒为模板进行重复性试验,最后进行临床效果评价,将所建立的方法与实时荧光定量逆转录PCR方法进行比较。[结果]本研究成功表达并纯化获得具有良好剪切活性的AsCas12a蛋白,蛋白分子质量大小为196 ku;所建立的CRISPR/Cas12a-RT-RAA方法的检测下限可达5.62拷贝/μL;该方法具有良好的特异性,可特异性检测出PRRSV,不能检出其他猪病病毒PCV2、PEDV、CSFV和PRV,并具有良好的重复性。应用该方法对121份猪组织样品进行检测,与实时荧光定量逆转录PCR的阳性符合率为93.75%,阴性符合率为99.05%,总符合率为99.17%。[结论]本研究成功建立基于CRISPR/Cas12a-RT-RAA的PRRSV快速检测方法,该方法特异性强、灵敏性高、重复性好且不依赖复杂设备,可在现场和基层实验室使用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 反转录重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA) CRISPR/Cas12系统

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圆圈病毒禽源1型实时荧光RAA快速检测方法的建立

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中国兽医科学 2024年

作者：余丹赵俊柯喻华英张艳芳尹文巧谢志勤李小凤吴嫒琼谢芝勋广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室

为建立一种快速检测圆圈病毒禽源1型（GyVg1）的方法，查询比对GenBank中现有GyVg1基因组序列，基于序列保守区设计特异性引物和探针，经过筛选和优化，建立GyVg1重组酶介导核酸等温扩增（RAA）检测方法。结果显示，建立的实时荧光RAA... 详细信息

为建立一种快速检测圆圈病毒禽源1型（GyVg1）的方法，查询比对GenBank中现有GyVg1基因组序列，基于序列保守区设计特异性引物和探针，经过筛选和优化，建立GyVg1重组酶介导核酸等温扩增（RAA）检测方法。结果显示，建立的实时荧光RAA方法可在20 min内鉴定GyVg1；该方法仅能检测出GyVg1，与圆圈病毒人源1型（GyH1）、鸡传染性贫血病毒（CIAV）、4型禽腺病毒（FAdV4）、H9亚型禽流感病毒（H9-AIV）、新城疫病毒（NDV）、禽传染性支气管炎病毒（IBV）、鸡传染性法氏囊炎病毒（IBDV）、鸡细小病毒（ChPV）、禽白血病毒（ALV）、鸡毒支原体（MG）、禽滑液囊支原体（MS）无交叉反应；检测下限可达1×102copies/μL；批内和批间的变异系数均在6%以下。用建立的实时荧光RAA方法与荧光定量PCR方法同时对231份样品进行检测，两者检测结果相符。综上所述，本研究首次成功建立了GyVg1实时荧光RAA方法，该方法特异性强、敏感性高、重复性好，为准确快速检测GyVg1提供了新的技术手段。

关键词：圆圈病毒禽源1型重组酶介导核酸等温扩增核酸检测

新型阿卡斑病毒NSs蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2015-2026页

作者：蔡畅陈赫威宋瑞鹏覃绍敏刘金凤秦树英孙倩陈童锦悦欧长波刘兴友马玲吴健敏广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁530001 河南科技学院动物科技学院新乡453003 农业农村部(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530004 新乡学院生命科学与基础医学学院新乡453003

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统... 详细信息

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统分析。克隆NSs全长基因,利用大肠杆菌表达系统表达NSs重组蛋白,优化蛋白诱导条件并分析重组蛋白的可溶性;收获破碎菌体,经8 mol/L尿素变性、Ni 2+-NTA亲和层析纯化、透析及浓缩后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;将纯化的重组NSs蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;应用间接ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)测定多克隆抗体效价及特异反应性。【结果】生物信息学分析表明,NSs蛋白由91个氨基酸残基构成,等电点为12.10,属于碱性蛋白,不稳定指数约为79.04,平均亲水性为指数为―0.059,为不稳定的亲水蛋白;无跨膜区和信号肽,属于非分泌蛋白。试验成功构建了NSs蛋白原核表达载体pET-32a-NSs,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定显示,成功表达重组NSs蛋白,分子质量为29.3 ku,主要以包涵体形式存在,与生物信息学分析结果一致;制备的多克隆抗体效价可达1∶16384000,Western blotting和IFA结果表明所制备抗体能够与NSs蛋白发生特异性反应,具有较好的特异性。【结论】试验成功获得纯化的新型AKAV NSs蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性;制备获得效价高、特异性好的多克隆抗体,为后续新型AKAV疫苗开发、检测及NSs蛋白功能研究提供了基础。

关键词：新型阿卡斑病毒(AKAV) NSs蛋白生物信息学原核表达多克隆抗体

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