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鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：倪君丽刘欣超孙栋方肆云王定爱申翰钦严专强戚南山孙铭飞顾有方广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室温氏食品集团股份有限公司安徽科技学院动物科技学院

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒，同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及... 详细信息

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒，同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位，分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA，通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因，构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体，构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven；将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞，利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达；以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化，间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示：成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven，RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达，质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后，检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达，其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明，pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功，在鸡体内有良好的免疫原性，为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。

关键词：柔嫩艾美耳球虫多表位重组质粒真核表达 DNA疫苗

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三种消毒剂对鹅星状病毒杀灭效果的评价

广东畜牧兽医科技 2024年第3期49卷 88-92页

作者：邝瑞欢黄允真李林林向勇翟颀孙敏华李珂信爱国李海贤董嘉文广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 云南省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所云南昆明650224 广州五丰动物保健品有限公司广东广州510640

为了解不同成分的消毒剂对鹅星状病毒的杀灭效果,该试验选择复方戊二醛、二氯异氰脲酸钠粉、聚维酮碘溶液进行杀灭效果评估,以指导临床实践中的消毒灭源工作。经对三种消毒剂在10℃、25℃、37℃下不同稀释比例、不同作用时间对鹅星状病... 详细信息

为了解不同成分的消毒剂对鹅星状病毒的杀灭效果,该试验选择复方戊二醛、二氯异氰脲酸钠粉、聚维酮碘溶液进行杀灭效果评估,以指导临床实践中的消毒灭源工作。经对三种消毒剂在10℃、25℃、37℃下不同稀释比例、不同作用时间对鹅星状病毒的杀灭效果进行实验室评价,结果显示:在室温环境下(25℃),作用时间为1 min、5 min和10 min,复方戊二醛1∶80倍稀释可完全杀灭鹅星状病毒(104.0 EID50),而复方戊二醛1∶300倍稀释及其他两种消毒剂在推荐使用浓度下均未能有效杀灭鹅星状病毒。对于尿囊液里高含量(104.0 EID50)的鹅星状病毒,1∶80倍稀释的复方戊二醛溶液在10℃时需要作用10 min才能有效杀灭星状病毒,但尿囊液里低含量(103.0 EID50)的鹅星状病毒在此浓度下作用1 min就能被完全杀灭。当温度达到25℃时,1∶80倍稀释的复方戊二醛溶液1 min即可杀灭鹅星状病毒;1:160倍稀释的复方戊二醛溶液则需要10 min才能完全杀灭鹅星状病毒。继续升高温度至37℃,1∶80和1∶160倍稀释的复方戊二醛溶液与鹅星状病毒作用1 min即可起到有效杀灭效果。综上所述,采用1∶80倍稀释的复方戊二醛杀灭鹅星状病毒(104.0 EID50),在10℃、25℃和37℃作用的最短时间分别是10 min、1 min和1 min。该研究明确了三种不同消毒剂首次用于消毒,在不同温度和作用时间下对鹅星状病毒的杀灭效果,为鹅星状病毒的生物安全防控提供参考。

关键词：鹅星状病毒消毒复方戊二醛异氰脲酸钠聚维酮碘

黄皮中黄酮类化合物的结构及生物活性研究进展

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中国果菜 2024年第2期44卷 47-53页

作者：邹波钟思彦林锦波余元善傅曼琴卓晓群李俊卜智斌徐玉娟广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所农业农村部功能食品重点实验室广东省农产品加工重点实验室广东广州510610 郁南县富赢田田圈生态农业有限公司广东云浮527199

黄皮是我国华南地区特色优稀水果,风味独特,深受广大消费者喜爱。黄酮类物质是黄皮果实中主要的活性成分之一,具有多种生物活性。目前关于黄皮中黄酮类化合物的研究较为零散,结论缺乏系统性。本文全面综述了黄皮中黄酮类化合物的组成、... 详细信息

黄皮是我国华南地区特色优稀水果,风味独特,深受广大消费者喜爱。黄酮类物质是黄皮果实中主要的活性成分之一,具有多种生物活性。目前关于黄皮中黄酮类化合物的研究较为零散,结论缺乏系统性。本文全面综述了黄皮中黄酮类化合物的组成、提取方法,系统阐述了其抗氧化、抗肿瘤、保护心血管、增强认知、抗炎、降糖和抑制黑色素生成等功效及作用机制,以期为黄皮中黄酮类化合物的科学研究、黄皮产品的开发和品牌创建提供理论依据。

关键词：黄皮黄酮类化合物结构提取生物活性

宿主蛋白VDAC1抑制口蹄疫病毒复制的机制研究

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中国兽医科学 2024年

作者：马柯薛巧刘鹏飞朱紫祥李宏斌刘会胜郑海学兰州理工大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）感染偶蹄类动物（如猪、牛和羊）而引起的急性、高度传染性疾病。其非结构蛋白3Dpol在FMDV复制和致病过程中发挥着重要作用。为探究宿主蛋白与3Dpol蛋白的作用机制，本研究... 详细信息

口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）感染偶蹄类动物（如猪、牛和羊）而引起的急性、高度传染性疾病。其非结构蛋白3Dpol在FMDV复制和致病过程中发挥着重要作用。为探究宿主蛋白与3Dpol蛋白的作用机制，本研究首先利用酵母双杂交和免疫共沉淀试验鉴定出VDAC1与FMDV 3Dpol相互作用，再运用过表达VDAC1和抑制剂试验发现VDAC1通过自噬途径抑制3Dpol蛋白的表达，最后发现下调VDAC1后对FMDV的复制有促进作用，表明VDAC1靶向3Dpol蛋白抑制FMDV复制。本研究揭示了宿主蛋白抑制FMDV复制的新机制，本研究为口蹄疫防控提供了新的方向和靶点。

关键词：口蹄疫病毒 3D 宿主蛋白VDAC1 自噬

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花青素降解机制与稳态化研究进展

食品安全质量检测学报 2024年第11期15卷 244-253页

作者：王健霞余元善吴继军温靖邹波胡腾根徐玉娟广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所/农业农村部功能食品重点实验室/广东省农产品加工重点实验室广州510610 仲恺农业工程学院轻工食品学院广州510631 广东省岭南现代农业重点实验室河源分院河源517001

花青素(anthocyanin,ACN)作为天然食用色素,主要存在于水果蔬菜中无毒无害,随着人们健康意识的增强,天然食用色素逐渐取代人工合成色素并广泛应用于食品、医药等领域。大量研究表明,由于ACN化学结构的特殊性,容易在添加剂(抗坏血酸)、... 详细信息

花青素(anthocyanin,ACN)作为天然食用色素,主要存在于水果蔬菜中无毒无害,随着人们健康意识的增强,天然食用色素逐渐取代人工合成色素并广泛应用于食品、医药等领域。大量研究表明,由于ACN化学结构的特殊性,容易在添加剂(抗坏血酸)、不同的pH、热处理、金属离子、酶、氧气、温度、光照等条件下发生降解,本文总结了影响ACN不稳定因素和提高其稳定性方法的优缺点,以及近年来在前人研究的基础上更新的一些ACN稳态化方法,以期为ACN更好地应用于食品和医药领域提供参考。

关键词：花青素化学结构降解因素稳态化技术

花生半矮秆品种粤油1823的选育及配套栽培技术

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中国农技推广 2024年第3期40卷 69-72页

作者：刘浩王茂辉黄红保宋帅帅郑溪江丽冰张力陶星星李少雄广东省农业科学院作物研究所/广东省农作物遗传改良重点实验室广东广州510640 广东省肇庆市农业科学研究所广东肇庆526070 广东省阳江市农作物技术推广站广东阳江529500 广东省河源市农业良种推广站广东河源517000 广东省清远市农业科技推广服务中心/清远市农业科学研究所广东清远511518 广东省潮州市农业科学技术研究中心广东潮州515726 广东省梅州市农林科学院果树研究所广东梅州514071

粤油1823是由广东省农业科学院作物研究所花生团队培育的一种半矮秆型花生新品种。它是利用广东省花生主导品种航花2号作为母本,与高抗病型花生品种中花8号作为父本,通过人工有性杂交与系统选育等方法培育而成。粤油1823具有综合抗性优... 详细信息

粤油1823是由广东省农业科学院作物研究所花生团队培育的一种半矮秆型花生新品种。它是利用广东省花生主导品种航花2号作为母本,与高抗病型花生品种中花8号作为父本,通过人工有性杂交与系统选育等方法培育而成。粤油1823具有综合抗性优良、稳产性强、半矮生型及适宜机械化栽培的特点。粤油1823适合在华南花生产区进行栽培,可广泛用于油用与鲜食加工,其具备良好的经济价值和市场应用前景。该品种已于2023年获得全国非主要农作物品种登记证书[编号:GPD花生(2023)440001]。本文总结了粤油1823的亲本来源、选育过程、特征特性、产量性状以及配套的栽培技术。

关键词：花生半矮秆多抗粤油1823 机械化栽培

METTL3表达水平对口蹄疫病毒复制的影响

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1010-1018页

作者：张继燕李伟伟范许许曹雪静朱兆宇裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰张伟王川郑海学甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730000 河南农业大学动物医学院河南郑州450046 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统构建了METTL3基因敲除细胞系(BHK-21),随后用口蹄疫病毒(FMDV)分别感染野生型和METTL3敲除BHK-21细胞,通过q PCR、Western-blot和TCID50方法检测FMDV在上述2株细胞中的复制情况。结果表明,敲除METTL3显著抑制FMDV的复制。为了进一步验证METTL3的表型功能,利用慢病毒包装系统构建METTL3稳定表达细胞系。用FMDV分别感染野生型和METTL3过表达BHK-21细胞,通过q PCR和TCID50试验测定FMDV在这2株细胞中的复制情况。结果显示,过量表达METTL3促进FMDV的复制。此外,激光共聚焦显微镜试验显示,FMDV感染BHK-21细胞后,METTL3从细胞核迁移至细胞质,其细胞定位的改变表明METTL3可能参与调控FMDV基因组的转录过程。本研究中成功构建了METTL3基因敲除和过表达的BHK-21细胞系,首次发现该分子正向调控FMDV的复制。上述实验结果为进一步开展METTL3在宿主细胞中调控FMDV复制的机制研究奠定了可靠的数据基础。

关键词： METTL3 m6A修饰口蹄疫病毒

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鹰嘴桃过敏原的鉴定及其生物学特性分析

广东农业科学 2024年

作者：桂沄坤王锋陈舒情刘袆帆丘苑新王琴肖更生仲恺农业工程学院轻工食品学院/农业农村部岭南特色食品绿色加工与智能制造重点实验室/广东省岭南特色食品科学与技术重点实验室

【目的】鹰嘴桃是岭南地区的特色水果，因其良好的风味和品质被评为“岭南十大佳果”。通过分析鹰嘴桃过敏原蛋白的抗原表位，为过敏原重组抗原的制备提供研究基础，也为阐述食品加工过程中鹰嘴桃过敏原的特性变化和致敏特性提供研究依... 详细信息

【目的】鹰嘴桃是岭南地区的特色水果，因其良好的风味和品质被评为“岭南十大佳果”。通过分析鹰嘴桃过敏原蛋白的抗原表位，为过敏原重组抗原的制备提供研究基础，也为阐述食品加工过程中鹰嘴桃过敏原的特性变化和致敏特性提供研究依据。【方法】通过粗蛋白提取和蛋白质谱的方法鉴定鹰嘴桃中存在的过敏原，并利用多种生物学方法预测分析过敏原的生物学特性。用磷酸缓冲液提取鹰嘴桃冻干粉中的粗蛋白，采用SDS-PAGE蛋白电泳方法鉴定并联合蛋白质谱方法分析粗蛋白中存在的过敏原，通过蛋白数据库UniProt进行筛选比对，并采用生物信息学方法分析致敏蛋白的理化性质、空间结构和抗原表位。【结果】从鹰嘴桃中鉴定出 7 种致敏蛋白（A0A251RBV3、P86888、M5X697、M5WV03、M5WTQ8、Q2I6V8、Q9LED1），主要归属于病程相关蛋白（Pru p 1）、类甜蛋白（Pru p 2）、非特异性脂质转移蛋白家族（Pru p 3）和赤霉素调节蛋白（Pru p 7）4类过敏原蛋白。7种鹰嘴桃过敏原蛋白具有较高稳定性，分子量为6.9～26.0 kD，脂肪族氨基酸指数为 29.37～81.54。M5WTQ8 和 Q2I6V8 过敏原蛋白为酸性蛋白，其余过敏原蛋白为碱性蛋白。除 Q9LED1 蛋白外，其余过敏原蛋白均为亲水蛋白。筛选抗原表位、亲水性和柔韧性大于 0 且表面可及性大于 1 的区域，并结合二、三级蛋白结构分析蛋白键能较低的区域，获得鹰嘴桃过敏原的抗原表位分别为Pru p 1（EIP、GSQ、KEN、NL、KG、EIK、HPD）、Pru p 2（TGDQKPQ、SP、NQ、PPNDKPETCPPT、DDKSS、RP）、Pru p 3（RT、VN）和 Pru p 7(AGY、GTYGN、LKNSKGN)。【结论】通过对鹰嘴桃过敏原蛋白的结构、亲水性、表面可及性、柔韧性和抗原指数进行分析，获得过敏原蛋白的多个抗原表位，可为鹰嘴桃过敏原在食品加工中的致敏特性研究提供研究基础。

关键词：鹰嘴桃过敏原蛋白蛋白质谱生物学特性蛋白结构抗原表位

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高油酸花生新品种粤油271的选育

中国种业 2024年第4期 126-128,131页

作者：刘浩鲁清王茂辉钟春燕郑溪江丽冰黄红保李海芬刘海燕洪彦彬陈小平李少雄广东省农业科学院作物研究所/广东省农作物遗传改良重点实验室广州510640 广东省肇庆市农业科学研究所肇庆526070 广东省清远市农业科技推广服务中心/广东省清远市农业科学研究所清远511518 广东省阳江市农作物技术推广站阳江529500

粤油271是广东省农业科学院作物研究所以湛红2号为母本、高油酸花生冀花06070-19为父本,通过人工有性杂交和系统选育等方法培育出的高油酸、稳产、多抗、适宜机械化栽培的花生新品种。该品种适宜在华南花生产区栽培,可作为油用与鲜食加... 详细信息

粤油271是广东省农业科学院作物研究所以湛红2号为母本、高油酸花生冀花06070-19为父本,通过人工有性杂交和系统选育等方法培育出的高油酸、稳产、多抗、适宜机械化栽培的花生新品种。该品种适宜在华南花生产区栽培,可作为油用与鲜食加工型花生品种大力推广,具有良好的经济价值与市场应用前景。粤油271于2021年获得植物新品种权(CNA20173652.2),2023年通过全国非主要农作物品种登记,登记编号:GPD花生(2023)440002。对该品种的亲本来源、选育过程、特征特性、产量表现及其配套栽培技术要点进行了总结。

关键词：花生高油酸多抗粤油271 选育机械化栽培