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时珍国医国药 2024年第4期35卷 805-809页

作者：张琪王宝娟郑曙光贵州中医药大学贵州贵阳550025 长春中医药大学贵州贵阳550001 贵州中医药大学第一附属医院吉林长春130117

目的研究骨炎消方对膝骨关节炎模型家兔软骨组织的改善作用及其可能机制。方法采用碘乙酸钠法建立KOA模型。采用生化检测法筛选骨炎消给药浓度与时间,用不同浓度骨炎消提取液处理KOA家兔软骨组织,MASSON染色观察软骨形态学改变评估软骨... 详细信息

目的研究骨炎消方对膝骨关节炎模型家兔软骨组织的改善作用及其可能机制。方法采用碘乙酸钠法建立KOA模型。采用生化检测法筛选骨炎消给药浓度与时间,用不同浓度骨炎消提取液处理KOA家兔软骨组织,MASSON染色观察软骨形态学改变评估软骨基质中胶原蛋白沉积程度;ELISA测定培养上清液MMP-3、MMP-9、MMP-13含量;RT-PCR检测软骨组织COL-ⅡmRNA表达;Western blot检测软骨组织IL-1β、TNF-α蛋白表达量。结果经生化检测法筛选,360、720、1440 mg/ml分别为骨炎消低、中、高的实验剂量;48h、96h为给药时间。与正常组比较,模型组培养上清液中MMP-3、MMP-9、MMP-13含量显著上升(P0.05)。结论骨炎消方对骨性关节炎家兔软骨组织具有治疗作用,其机制可能是通过抑制MMP-3、MMP-9、MMP-13的释放、促进COL-Ⅱ的合成、减少IL-1β、TNF-α的表达,从而起到修复受损关节软骨的作用,达到延缓软骨退变的疗效。

关键词：骨炎消方膝骨关节炎体外培养软骨组织基质金属蛋白酶胶原蛋白炎症因子

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基于SDF-1/CXCR4信号通路探讨苗医熏蒸疗法对骨性关节炎的治疗作用研究

基于SDF-1/CXCR4信号通路探讨苗医熏蒸疗法对骨性关节炎的治疗作...

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作者：王宝娟贵州中医药大学

学位级别：硕士

目的通过膝关节腔注射碘乙酸钠建立骨性关节炎模型,研究苗药熏蒸疗法对兔膝骨性关节炎模型关节液、滑膜及软骨中相关基因及蛋白的表达,探讨苗药熏蒸疗法基于SDF-1/CXCR4信号通路在骨性关节炎中的治疗作用。方法1.将36只新西兰大白兔随... 详细信息

目的通过膝关节腔注射碘乙酸钠建立骨性关节炎模型,研究苗药熏蒸疗法对兔膝骨性关节炎模型关节液、滑膜及软骨中相关基因及蛋白的表达,探讨苗药熏蒸疗法基于SDF-1/CXCR4信号通路在骨性关节炎中的治疗作用。方法1.将36只新西兰大白兔随机分为正常组（A组）,模型B-F组,共6组,每组6只。A组左膝关节腔注射0.2mL无菌生理盐水;模型B-E组左膝关节腔按照2.5、5、7.5、10mg/kg剂量各注射0.2mL碘乙酸钠溶液,模型F组注射剂量与E组相同,同时以30min/d分2次驱赶运动为干预因素。采用HE染色及骨性关节炎组织病理学评分（Mankin评分）观察各组软骨的病理改变。2.（1）实验分组:取健康成年新西兰大白兔50只,雌雄各半,体重（2.0±0.2）kg,随机分为5组,每组10只,分别为正常组、模型组、阳性对照组、早期干预组、苗药熏蒸组;（2）造模:除正常组外,其余4组采用膝关节腔注射碘乙酸钠的方法,建立膝骨性关节炎的模型;（3）实验干预:造模成功后,阳性对照组给予扶他林软膏外用治疗6周,苗药熏蒸组给予苗药熏蒸制备液治疗6周;（4）实验取材:治疗结束后,耳缘静脉注射空气行空气栓塞方法处死动物,采集样本。（5）观察指标:a.肉眼观察滑膜、软骨的大体变化;b.采用苏木素伊红染色的方法,光镜下观察滑膜、软骨的病理变化;c.采用免疫组化方法检测滑膜组织中IL-1β、TNF-α的阳性表达;d.采用Elisa检测方法,检测血清中MMP-3、MMP-9、MMP-13、VEGF的表达,检测关节液中SDF-1的表达;e.实时荧光定量 PCR 检测软骨组织中 MMP-3mRNA、MMP-9mRNA、MMP-1 3mRNA、VEGFmRNA的表达;f.蛋白免疫印迹法检测软骨组织中Col-2、聚集蛋白聚糖。结果1.与A组比较,B、C组差异无统计学意义（P＞0.05）,D、E、F组差异有统计学意义（P＜0.05）。与E组比较,F组差异无统计学意义（P＞0.05）。2.（1）肉眼观察结果:a.滑膜:与正常组相比,其他4组可见不同程度的滑膜增生,模型组最重,阳性对照组、早期干预组及苗药熏蒸组较模型组轻;b.软骨:与正常组相比,其他4组出现不同程度软骨损伤,模型组最重,阳性对照组、早期干预组及苗药熏蒸组较模型组有所改善。（2）滑膜及软骨的HE染色结果:与正常组相比,其他4组评分均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,阳性对照组、早期干预组及苗药熏蒸组评分均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;阳性对照组、早期干预组、苗药熏蒸组之间比较,评分相差不大,差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）免疫组化结果:与正常组相比,滑膜组织的IL-1β、TNF-α的IOD值均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,与模型组相比,阳性对照组、早期干预组、苗药熏蒸组的IOD值均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,阳性对照组、早期干预组、苗药熏蒸组组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）Elisa检测结果:与正常组相比,其他4组血清中MMP-3、MMP-9、MMP-13、VEGF的含量均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,与模型组相比,阳性对照组、早期干预组及苗药熏蒸组血清中MMP-3、MMP-9、MMP-13、VEGF含量均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,阳性对照组、早期干预组、苗药熏蒸组组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;与正常组相比,其他4组关节液中SDF-1含量均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,与模型组相比,3个治疗组关节液中SDF-1含量均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,3组治疗组之间组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。（5）RT-PCR检测结果:与正常组相比,其他4组软骨组织中MMP-3mRNA、MMP-9mRNA、MMP-13mRNA、VEGmRNAF均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,与模型组相比,3组治疗组软骨组织中MMP-3mRNA、MMP-9mRNA、MMP-13mRNA、VEGmRNAF均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,3组治疗组之间组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。（6）WB检测结果:与正常组相比,其他4组软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖蛋白表达均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,与模型组相比,3组治疗组软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,3组治疗组软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖蛋白表达组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论1.模型D组药物浓度7.5mg/kg为建立OA模型的最小有效药物剂量,且模型建立方法操作简单、创伤小,能够保证膝关节稳定性及实验动物的成活率。2.（1）SDF

关键词：骨性关节炎动物模型苗药熏蒸疗法 SDF-1/CXCR4信号通路基质金属蛋白酶血管内皮生长因子

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苗药熏蒸验方对体外培养骨性关节炎家兔软骨组织的治疗作用及机制研究

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中国免疫学杂志 2021年第5期37卷 553-556,563页

作者：张琪王琳李田洋郑曙光(指导) 贵州中医药大学贵阳550025

目的:研究苗药熏蒸验方对体外培养骨性关节炎(OA)家兔软骨组织的治疗作用及机制。方法:除正常组外,其余各组采用碘乙酸钠构建关节炎家兔模型,造模成功2周后,取软骨组织随机分为正常组、模型组、盐酸氨基葡萄糖阳性对照组(10 mmol/L)、... 详细信息

目的:研究苗药熏蒸验方对体外培养骨性关节炎(OA)家兔软骨组织的治疗作用及机制。方法:除正常组外,其余各组采用碘乙酸钠构建关节炎家兔模型,造模成功2周后,取软骨组织随机分为正常组、模型组、盐酸氨基葡萄糖阳性对照组(10 mmol/L)、苗熏低剂量组(360 mg/ml)、苗熏中剂量组(720 mg/ml)、苗熏高剂量组(1 440 mg/ml)。于37℃、5%CO2培养箱内,在含10%血清的含药培养基中培养2 d和4 d。ELISA检测培养液中软骨组织所分泌的IL-1β、TNF-α水平,实时荧光定量PCR法检测离体组织中MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA表达,Western blot检测离体组织中COL-Ⅱ蛋白含量。结果:在相同培养时间中,与正常组相比,模型组IL-1β、TNF-α浓度显著升高(P0.05)。结论:苗药熏蒸验方对OA家兔软骨组织具有治疗作用,可能与抑制细胞外基质降解、降低基质金属蛋白酶释放、下调炎症因子表达有关。

关键词：苗药熏蒸验方骨性关节炎体外培养软骨组织炎症因子基质金属蛋白酶

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苗药熏蒸治疗膝骨关节炎模型兔可延缓细胞外基质的破坏

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中国组织工程研究 2022年第8期26卷 1180-1186页

作者：王宝娟郑曙光张琪李田洋贵州中医药大学第一附属医院贵州省贵阳市550000 贵州中医药大学贵州省贵阳市550000

背景:前期研究显示苗药熏蒸疗法对治疗骨性关节炎有确切疗效,但其作用机制不清楚。由于滑膜组织及软骨下骨中血管过度新生是骨性关节炎发生发展的重要原因,血管内皮生长因子是体内重要的促血管新生的因子,其过度表达与基质细胞衍生因子1... 详细信息

背景:前期研究显示苗药熏蒸疗法对治疗骨性关节炎有确切疗效,但其作用机制不清楚。由于滑膜组织及软骨下骨中血管过度新生是骨性关节炎发生发展的重要原因,血管内皮生长因子是体内重要的促血管新生的因子,其过度表达与基质细胞衍生因子1/CXCR4信号通路存在密切联系。目的:以苗医熏蒸疗法作为干预因素,探讨基质细胞衍生因子1/CXCR4信号通路在骨性关节炎发生发展中的作用及苗药熏蒸疗法的治疗作用机制。方法:健康新西兰大白兔50只,随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏外用)、早期干预组、苗药熏蒸组5组,后4组采用膝关节腔注射碘乙酸钠方法建立兔膝骨性关节炎模型,2周后造模成功开始干预治疗,连续治疗6周后取材,苏木精-伊红染色观察滑膜、软骨病理变化;免疫组化方法检测滑膜组织白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平;Elisa法检测关节液中基质细胞衍生因子1及血清中血管内皮生长因子水平;实时荧光定量PCR检测关节软骨组织中血管内皮生长因子mRNA表达;Western blot检测软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白、聚集蛋白聚糖蛋白表达。结果与结论:①与模型组比较:苗药熏蒸组滑膜及软骨组织的炎症表达被显著抑制,病理改变减轻;苗药熏蒸组滑膜白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α的积分吸光度值、血清中血管内皮生长因子及关节液中基质细胞衍生因子1水平均降低(P0.05)。实验结果表明:苗药熏蒸疗法可能是通过减少基质细胞衍生因子1与其受体CXCR4结合,抑制白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、血管内皮生长因子表达,延缓细胞外基质破坏,起到治疗骨性关节炎作用。

关键词：骨性关节炎苗药熏蒸血管内皮生长因子 SDF-1/CXCR4信号通路基质细胞衍生因子1 兔动物模型

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