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聚肌苷酸胞苷酸在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活干扰素β荧光素酶报告基因系统实验条件的优化

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中国生物制品学杂志 2017年第6期30卷 640-644页

作者：庞立丽白爱英张顺先章青李丹地袁越王宏孙晓曼孔翔羽段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 济南市疾病预防控制中心山东济南250021 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所上海200025 内蒙古医科大学基础医学院免疫学实验室内蒙古呼和浩特010110

目的优化不同长度聚肌苷酸胞苷酸[polyinosinic acid:polycytidylic acid,poly(I∶C)]在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活Ⅰ型干扰素(IFNβ)荧光素酶报告基因系统的实验条件。方法将质粒IFN-β-luc分别转染HEK293T及BEAS-2B细胞后,HEK293T细胞转染不同浓度(0.25、0.5、1.0、1.5和2.0μg/孔)的高分子量(HMW)poly(I∶C)和低分子量(LMW)poly(I∶C),检测其对HEK293T细胞中IFNβ启动子激活的影响;BEAS-2B细胞直接加入不同浓度(0.1、1.0、10.0、20.0和50.0μg/孔)及转染不同浓度(同HEK293T细胞)的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C),检测其对BEAS-2B细胞中IFNβ启动子激活的影响。结果 poly(I∶C)转染HEK293T细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.5μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)转染24 h。poly(I∶C)直接加入BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:50μg/孔的HMW poly(I∶C)和LMW poly(I∶C)作用6 h;poly(I∶C)转染BEAS-2B细胞激活IFNβ启动子的最佳实验条件为:0.25μg/孔的HMW poly(I∶C)转染12 h,0.5μg/孔的LMW poly(I∶C)转染12 h。结论成功优化了poly(I∶C)在HEK293T和BEAS-2B细胞中激活IFNβ启动子的实验条件,为poly(I∶C)激活免疫反应机制的研究提供了实验依据。

关键词：聚肌苷酸胞苷酸干扰素荧光素酶报告系统 HEK293T细胞 BEAS-2B细胞

我国鼠诺如病毒的分离培养及其基因组序列分析

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中国生物制品学杂志 2017年第5期30卷 462-466页

作者：王慧敏庞立丽敖元云王莹袁越田婵新燕段招军内蒙古医科大学基础医学院免疫学实验室内蒙古呼和浩特010110 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 北京大学第三医院北京100191

目的分离我国鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)(命名SH1603),并进行基因组序列测定和分析。方法利用RAW264.7细胞分离MNV SH1603,参考国外已发表的MNV4(DQ223043)基因组序列设计引物,经重叠的反转录PCR扩增全基因组,利用生物信息学软... 详细信息

目的分离我国鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)(命名SH1603),并进行基因组序列测定和分析。方法利用RAW264.7细胞分离MNV SH1603,参考国外已发表的MNV4(DQ223043)基因组序列设计引物,经重叠的反转录PCR扩增全基因组,利用生物信息学软件对全基因组序列进行分析。结果 MNV SH1603引起RAW264.7细胞病变,其基因组全长7 238个核苷酸,包括4个开放阅读框(open reading frames,ORF),预测的ORF1、ORF2、ORF3、ORF4编码蛋白大小分别为186 000、58 000、22 000和23 000,其中ORF1和ORF2之间有14个核苷酸重叠,ORF2和ORF3之间有1个核苷酸重叠,ORF4包含在ORF2中。NCBI Blast比对发现,SH1603基因组与MNV4同源性最高(94%)。衣壳蛋白区的进化分析发现,SH1603与MNV4(DQ223043)和Berlin0606(EF531291)亲缘关系最近。衣壳蛋白区氨基酸比对发现,SH1603与MNV4比较,有4个位点突变,分别为aa211S→A、aa358I→V、aa404E→L、aa534V→A。结论已分离到1株MNV,与国外报道的MNV4具有高度的进化亲源关系,为我国进一步研究MNV流行和致病机制奠定了基础。

关键词：鼠诺如病毒病毒分离培养全基因组分析

马源P[12]型轮状病毒GST-VP8*-E403蛋白的表达及受体结合特征

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中华实验和临床病毒学杂志 2020年第3期34卷 309-312页

作者：王萌璇张佳艳曾秋艳孙晓曼章青王宏李丹地段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 广西科技大学鹿山学院食品与化学工程系柳州545000

目的通过研究中国马源P[12]型轮状病毒GST-VP8*-HorseP[12]E403蛋白与寡糖、唾液受体的结合特征,进而为轮状病毒的跨种传播及受体间的作用机制提供重要科学依据。方法通过大肠杆菌表达系统表达、纯化中国马源P[12]型轮状病毒GST-VP8*-Ho... 详细信息

目的通过研究中国马源P[12]型轮状病毒GST-VP8*-HorseP[12]E403蛋白与寡糖、唾液受体的结合特征,进而为轮状病毒的跨种传播及受体间的作用机制提供重要科学依据。方法通过大肠杆菌表达系统表达、纯化中国马源P[12]型轮状病毒GST-VP8*-Horse P[12]E403蛋白,并利用唾液及寡糖结合实验分析该基因型的受体结合特征。结果马源GST-VP8*-Horse P[12]E403蛋白与黏蛋白核心mucin core 2糖结合良好,与A、B、Lewis型等寡糖及唾液中的HBGAs均不结合。结论VP8*-Horse P[12]E403蛋白的潜在受体可能是黏蛋白核心2,未与人唾液发生结合。

关键词：轮状病毒 VP8*蛋白寡糖受体

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人诺如病毒非结构蛋白的结构和功能

中华实验和临床病毒学杂志 2017年第5期31卷 479-482,F0003页

作者：袁越袁鑫新燕庞立丽内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010000 重庆大学生物工程学院 400044 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

人诺如病毒（Norovirus,NoV）是单股正链的RNA病毒,它是引起全球急性胃肠炎流行和暴发的主要病原体之一,目前已经受到越来越多的关注.由于缺乏合适和成熟的动物模型和体外细胞培养模型,人们对人诺如病毒的流行病学及其基因变异特征的研... 详细信息

人诺如病毒（Norovirus,NoV）是单股正链的RNA病毒,它是引起全球急性胃肠炎流行和暴发的主要病原体之一,目前已经受到越来越多的关注.由于缺乏合适和成熟的动物模型和体外细胞培养模型,人们对人诺如病毒的流行病学及其基因变异特征的研究较多,但对于病毒的生物学特性、病毒编码蛋白的功能特征及病毒感染和致病机制知之甚少.本文简要总结了诺如病毒非结构蛋白的研究进展,并期望随着最近人诺如病毒体外细胞培养模型的突破,为进一步开展人诺如病毒非结构蛋白的功能研究提供借鉴.

关键词：诺如病毒人杯状病毒非结构蛋白病毒复制

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鼠诺如病毒感染免疫研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 2017年第1期31卷 79-82页

作者：王慧敏庞立丽新燕段招军内蒙古医科大学基础医学院免疫学呼和浩特010000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、卫生部医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

人诺如病毒（Norovirus,NoV）是杯状病毒家族的成员,可引起以恶心、呕吐、腹痛和腹泻为主要临床症状的急性胃肠炎.NoV全球流行,可感染所有年龄阶段的人群,造成了严重的疾病负担.由于缺乏合适的小动物模型,人类对NoV的感染免疫和致病机... 详细信息

人诺如病毒（Norovirus,NoV）是杯状病毒家族的成员,可引起以恶心、呕吐、腹痛和腹泻为主要临床症状的急性胃肠炎.NoV全球流行,可感染所有年龄阶段的人群,造成了严重的疾病负担.由于缺乏合适的小动物模型,人类对NoV的感染免疫和致病机理还缺乏了解.鼠诺如病毒（Murine norovirus,MNV）最初在免疫缺陷的小鼠中分离得到,在小鼠中可感染和流行,为研究NoV感染引发的宿主肠道免疫机制提供了替代模型.本研究从固有免疫和适应性免疫两方面来阐述.

关键词：鼠诺如病毒感染免疫反应

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轮状病毒疫苗应用研究进展

国际病毒学杂志 2022年第5期29卷 437-440页

作者：范佳欣李丹地中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

轮状病毒可导致婴幼儿严重腹泻,最有效的预防手段是为婴幼儿接种轮状病毒疫苗。轮状病毒疫苗在全球的广泛应用,显著降低轮状病毒疾病负担,且具有较高的成本收益。目前我国未将轮状病毒疫苗纳入免疫规划,疫苗接种率较低。本文通过阐述轮... 详细信息

轮状病毒可导致婴幼儿严重腹泻,最有效的预防手段是为婴幼儿接种轮状病毒疫苗。轮状病毒疫苗在全球的广泛应用,显著降低轮状病毒疾病负担,且具有较高的成本收益。目前我国未将轮状病毒疫苗纳入免疫规划,疫苗接种率较低。本文通过阐述轮状病毒疫苗种类、覆盖率和接种率、经济学评价、对毒株型别的影响,以及疫苗存在的问题,了解疫苗研究进展,推进建立我国轮状病毒疫苗监测,促进轮状病毒疫苗在我国使用。

关键词：轮状病毒疫苗轮状病毒胃肠炎经济学评价

猪源P[19]轮状病毒VP8＊蛋白的表达及受体结合特征

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中华实验和临床病毒学杂志 2018年第1期32卷 89-92页

作者：王莉鸿孙晓曼李丹地温红玲段招军山东大学公共卫生学院病毒学研究室济南250012 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的研究猪源P[19]型轮状病毒（rotaviruses,RVs） VP8＊蛋白与寡糖的结合特征.方法以中国轮状病毒监测中腹泻症状的猪粪便标本中检测到1株P[19]型RV为研究对象,表达纯化得到病毒VP8＊蛋白,通过寡糖结合,唾液结合实验方法对其与寡糖... 详细信息

目的研究猪源P[19]型轮状病毒（rotaviruses,RVs） VP8＊蛋白与寡糖的结合特征.方法以中国轮状病毒监测中腹泻症状的猪粪便标本中检测到1株P[19]型RV为研究对象,表达纯化得到病毒VP8＊蛋白,通过寡糖结合,唾液结合实验方法对其与寡糖的结合特征进行研究.结果猪源P[19] VP8＊蛋白与黏蛋白核心（mucin core）,尤其黏蛋白核心2具有很好的结合.结论黏蛋白核心可能是猪源P[19] RV的潜在受体,为病毒感染机制的研究及其监测提供了一定的依据.

关键词：轮状病毒 VP8*蛋白组织血型抗原黏蛋白受体结合

猪源P[6]型轮状病毒GST-VP8^*-Z84蛋白的表达及受体结合特征

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中华实验和临床病毒学杂志 2019年第2期33卷 217-220页

作者：王萌璇王璐瑶李丹地张佳艳胡继宏段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 广西科技大学鹿山学院食品与化学工程系柳州545000

目的通过基因工程技术表达我国猪源P[6]基因型轮状病毒(rotaviruses,RVs)GST-VP8*-Z84蛋白,研究该蛋白与寡糖、唾液受体的结合特征。方法以猪源P[6]型RV Z84为研究对象,利用GST大肠杆菌表达系统及亲和层析、凝胶过滤层析法纯化得到病毒G... 详细信息

目的通过基因工程技术表达我国猪源P[6]基因型轮状病毒(rotaviruses,RVs)GST-VP8*-Z84蛋白,研究该蛋白与寡糖、唾液受体的结合特征。方法以猪源P[6]型RV Z84为研究对象,利用GST大肠杆菌表达系统及亲和层析、凝胶过滤层析法纯化得到病毒GST-VP8^*-Z84蛋白,通过ELISA唾液结合实验及寡糖结合实验分析该基因型与唾液及寡糖受体的结合特征。结果猪源P[6] GST-VP8^*-Z84蛋白与黏蛋白核心2具有很好的结合。结论P[6] RV的潜在受体可能是黏蛋白核心,为轮状病毒与受体间的作用机制及研发RV疫苗和高效治疗药物提供实验基础与理论依据。

关键词：轮状病毒 GST-VP8^*-Z84蛋白组织血型抗原受体结合

轮状病毒P[6]基因型毒株LL4260株的VP8＊核心区蛋白的表达和纯化

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中华实验和临床病毒学杂志 2018年第2期32卷 195-198页

作者：王璐瑶李丹地孙晓曼章青王宏庞立丽胡继宏段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的为研究P[6]基因型轮状病毒受体结合特性，利用原核表达纯化得到P[6]基因型轮状病毒LL4260毒株的VP8＊核心区蛋白。方法将P[6]基因型毒株LL4 260株的质粒利用PCR扩增得到核心区基因片段，克隆到pET30a载体中构建重组质粒pET30a-LL426... 详细信息

目的为研究P[6]基因型轮状病毒受体结合特性，利用原核表达纯化得到P[6]基因型轮状病毒LL4260毒株的VP8＊核心区蛋白。方法将P[6]基因型毒株LL4 260株的质粒利用PCR扩增得到核心区基因片段，克隆到pET30a载体中构建重组质粒pET30a-LL4260VP8＊core，重组质粒转化到BL21（DE3）感受态细胞中进行蛋白表达，经亲和层析和分子筛层析纯化表达后得到目的蛋白。结果P[6]基因型轮状病毒LL4260毒株核心区pET30 a-LL4260VP8＊core蛋白为可溶表达，经纯化及电泳鉴定，得到相对分子质量为22×103的目的蛋白。结论本研究构建的P[6]基因型轮状病毒LL4260毒株pET30 a-LL4260VP8＊core重组质粒，表达纯化了相应核心区目的蛋白，为进一步分析蛋白的性能和结构提供基础。

关键词：轮状病毒 P基因型 VP8*蛋白蛋白表达与纯化