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小麦赤霉病菌α-微管蛋白原核表达及纯化研究

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植物病理学报 2012年第3期42卷 252-259页

作者：徐建强张聪于金凤彭迪周明国南京农业大学植物保护学院/农业部作物病虫害监测及防控重点开放实验室南京210095 河南科技大学林学院洛阳471003

为了制备小麦赤霉病菌的α-微管蛋白,以小麦赤霉病菌cDNA为模板,PCR扩增出α1-、α2-微管蛋白基因,将其克隆到pET30a+表达载体上,转化到表达宿主菌Rossatta(DE3)pLysS,筛选阳性克隆,进行蛋白诱导表达。SDS-PAGE及Wes-tern-b1ot结果表明... 详细信息

为了制备小麦赤霉病菌的α-微管蛋白,以小麦赤霉病菌cDNA为模板,PCR扩增出α1-、α2-微管蛋白基因,将其克隆到pET30a+表达载体上,转化到表达宿主菌Rossatta(DE3)pLysS,筛选阳性克隆,进行蛋白诱导表达。SDS-PAGE及Wes-tern-b1ot结果表明:融合蛋白主要以包涵体形式存在;融合蛋白分子量约为52.1和55.9 kD;融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。通过对包涵体洗涤及透析复性后采用HisTrapTMHP Columns对融合蛋白进行纯化,可以得到纯度较高的融合蛋白。该研究为体外筛选以微管蛋白为靶标的杀菌剂提供了物质基础。

关键词：小麦赤霉病菌 α-微管蛋白包涵体融合蛋白纯化

禾谷镰孢菌β2-微管蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

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中国农业科学 2012年第6期45卷 1084-1092页

作者：徐建强周裕军张聪周明国南京农业大学植物保护学院/农业部作物病虫害监测及防控重点开发实验室河南科技大学林学院

【目的】在大肠杆菌中表达禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)的β2-微管蛋白,筛选使β2-微管蛋白可溶性表达的诱导因子,并对可溶性蛋白进行纯化。【方法】以构建好的质粒(pET32a+-β2-tubulin)为模板,PCR扩增出β2-微管蛋白基因,将其克... 详细信息

【目的】在大肠杆菌中表达禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)的β2-微管蛋白,筛选使β2-微管蛋白可溶性表达的诱导因子,并对可溶性蛋白进行纯化。【方法】以构建好的质粒(pET32a+-β2-tubulin)为模板,PCR扩增出β2-微管蛋白基因,将其克隆到pET30a+表达载体上,并转化到表达宿主菌BL21(DE3)及Rossatta(DE3)pLysS,筛选阳性克隆,进行蛋白诱导表达,并筛选蛋白可溶性表达的诱导因子;对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot验证。【结果】获得了在大肠杆菌中表达效率高的阳性克隆;为了克服常规诱导条件下表达的β2-微管蛋白主要以包涵体形式存在的问题,通过对诱导温度、时间、诱导物浓度、初始诱导时的菌液浓度、培养液及宿主菌等六因子的综合分析,获得了β2-微管蛋白可溶性表达的优化条件;利用HisTrap HP预装柱对β2-微管蛋白进行纯化,可获得纯度很高的可溶性β2-微管蛋白;SDS-PAGE确认表达出的融合蛋白分子量为51.6 kD;Western blot证实表达的融合蛋白能与6×His及β-微管蛋白的单克隆抗体发生特异性反应。【结论】本研究为外源基因在大肠杆菌中的可溶性表达提供了参考;获得的微管蛋白为研究微管蛋白靶标类药物的抗性机制以及生产中开发新的以微管蛋白为靶标的杀菌剂提供了物质基础。

关键词：禾谷镰孢菌 β2-微管蛋白包涵体可溶性表达纯化

枯草芽孢杆菌NJ-18和氟酰胺联合拌种防治小麦纹枯病研究

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农药学学报 2013年第4期15卷 427-433页

作者：李山东于金凤彭迪朱烨琳侯毅平王建新周明国陈长军南京农业大学植物保护学院南京210095

研究了枯草芽孢杆菌NJ-18菌株的芽孢制剂(109cfu/g)与20%氟酰胺可湿性粉剂(WP)联合拌种对小麦纹枯病的防治作用。结果表明:氟酰胺抑制小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis菌丝生长的平均EC50值为(0.34±0.06)μg/mL;NJ-18发酵液(108cfu/mL... 详细信息

研究了枯草芽孢杆菌NJ-18菌株的芽孢制剂(109cfu/g)与20%氟酰胺可湿性粉剂(WP)联合拌种对小麦纹枯病的防治作用。结果表明:氟酰胺抑制小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis菌丝生长的平均EC50值为(0.34±0.06)μg/mL;NJ-18发酵液(108cfu/mL)及其滤液稀释1 000倍时对小麦纹枯病菌菌丝生长的抑制率分别为96.38%和93.97%;氟酰胺对NJ-18的菌体生长和芽孢存活无抑制作用,具有很好的相容性;在温室条件下,NJ-18芽孢制剂(109cfu/g)300 g分别与20%氟酰胺WP 50 g和100 g混合拌种处理100 kg小麦种子,在小麦拔节期对纹枯病的防效分别为47.96%和64.58%,显著高于二者同剂量单用处理的防效;在大田条件下,二者混合拌种处理也能显著提高对小麦纹枯病的田间防效,NJ-18芽孢制剂(109cfu/g)300 g与20%氟酰胺WP 200 g混合拌种处理100 kg小麦种子,对拔节期小麦纹枯病的防效高达74.83%,且能显著提高小麦千粒重,同时对小麦生长安全。

关键词：枯草芽孢杆菌NJ-18 氟酰胺拌种小麦纹枯病联合作用

枯草芽孢杆菌NJ-18的质粒消解及其在小麦根部的定殖

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中国农业科学 2013年第18期46卷 3776-3783页

作者：卢靖乐余新燕侯毅平王建新周明国陈长军南京农业大学植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室

【目的】研究从土壤中分离出来的具有广谱抗菌活性的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株NJ-18与作物互作关系,并观察外源导入绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的NJ-18菌株在小麦根部的定殖能力。【方法】首先使用十... 详细信息

【目的】研究从土壤中分离出来的具有广谱抗菌活性的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株NJ-18与作物互作关系,并观察外源导入绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的NJ-18菌株在小麦根部的定殖能力。【方法】首先使用十二烷基硫酸钠(SDS)消解NJ-18的质粒,然后采用化学法导入gfp分子标记,并采用激光共聚焦显微镜检测该标记菌株在小麦根部的定殖能力。【结果】获得了NJ-18的质粒消解菌株C136,并采用化学方法成功将外源基因导入野生型菌株NJ-18及其质粒消解菌株C136,C136的转化效率可达到3.42×105cfu/μg质粒DNA,是NJ-18转化效率的10倍左右。对比NJ-18与C136的生物活性发现,C136能够保持原有的抑菌活性;但是C136的生长曲线第一峰值出现的时间滞后12 h,第一峰值被抑制了29.4%;NJ-18-GFP能够附着在病原菌菌体上,导致其菌丝呈现膨大、畸形等;接种7 d后能够在小麦根部表皮和中柱稳定定殖。【结论】枯草芽孢杆菌NJ-18菌株的转化方法宜选用化学法;该菌株能够在小麦根部定殖。

关键词： NJ-18 质粒消解化学转化 GFP 定殖

小麦赤霉病菌多菌灵抗性群体的扩散路径分析——基于致病菌种类及所产毒素化学型鉴定和抗药性检出的时序性

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农药学学报 2013年第3期15卷 279-285页

作者：戴大凯贾晓静武东霞侯毅平王建新陈长军周明国南京农业大学植物保护学院南京210095

通过对江苏、安徽、山东、河南、湖北、河北和四川7省小麦赤霉病菌对多菌灵抗性及敏感菌株Fusarium asiaticum和***的鉴定、所产生毒素的化学型及多菌灵抗性菌株检出时序性的分析,初步推测了小麦赤霉病菌对多菌灵抗性群体在中国麦区的... 详细信息

通过对江苏、安徽、山东、河南、湖北、河北和四川7省小麦赤霉病菌对多菌灵抗性及敏感菌株Fusarium asiaticum和***的鉴定、所产生毒素的化学型及多菌灵抗性菌株检出时序性的分析,初步推测了小麦赤霉病菌对多菌灵抗性群体在中国麦区的扩散路径。结果表明:江淮流域的江苏、安徽、湖北3省和四川省小麦赤霉病菌对多菌灵的抗性或敏感菌株优势群体均是***,而黄淮流域的山东、河南2省及河北省小麦赤霉病菌对多菌灵的敏感菌株优势群体为***,抗性菌株优势群体则为***。江苏、安徽、山东和河南抗多菌灵菌株***产生毒素的化学型为3-AcDON和NIV,并以3-AcDON为主。江苏省连续使用多菌灵防治小麦赤霉病长达20多年后才检测到田间抗性菌株,而近年来检测到田间抗性菌株的山东、河南2省用多菌灵防治赤霉病的历史较短,且为偶尔使用,药剂的选择压力相对较小,因此推测山东和河南麦区出现的小麦赤霉病菌抗多菌灵菌株可能是通过种子调运及联合收割机跨区作业等方式从抗药性发生较早的江淮麦区流入的。

关键词：小麦赤霉病禾谷镰刀菌多菌灵抗药性毒素化学型扩散路径

禾谷镰孢菌β2-tubulin基因点突变在生物进化中的意义

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禾谷镰孢菌β2-tubulin基因点突变在生物进化中的意义

禾谷镰孢菌α、β微管蛋白的原核表达及大量制备

中国植物病理学会第九届全国会员代表大会暨2010年学术...

作者：仇剑波徐建强于俊杰毕朝位陈长军王建新周明国南京农业大学植物保护学院杀菌剂实验室河南科技大学林学院

禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum Sehw.,有形态为玉蜀黍赤霉菌Gibbrella zeae ***)是我国小麦赤霉病的主要致病菌。人们在与该病害的斗争中寻找到微管蛋白抑制剂多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂,可以用来有效防治小麦赤霉病。本实验室的已有...

禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum Sehw.,有形态为玉蜀黍赤霉菌Gibbrella zeae ***)是我国小麦赤霉病的主要致病菌。人们在与该病害的斗争中寻找到微管蛋白抑制剂多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂,可以用来有效防治小麦赤霉病。本实验室的已有研究表明:多菌灵在禾谷镰孢菌中的靶标基因不同于其他真菌,是β-微管蛋白(tubulin)基因,如果该基因的功能域发生点突变,则可引起不同水平的抗药性。

关键词：

来源： cnki会议评论

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禾谷镰孢菌α、β微管蛋白的原核表达及大量制备