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STAT3与MAPK蛋白协同调节肿瘤坏死因子-α转录活性

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生物化学与生物物理进展 2009年第8期36卷 1003-1011页

作者：杨丽萍姚咏明李杰萍叶棋浓盛志勇解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048 军事医学科学院生物工程研究所北京100850

探讨信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在体内是否存在相互作用,并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的转录活性.采用聚合酶链反应技术,从人Flag-p38和Flag-细胞外信号蛋白调节激酶2(extracellular-signal regulated protein kinase 2,ERK2)中扩增出p38和ERK2基因,将其插入载体pcDNA3-HA中;用Westernblot方法在293T细胞中检测其表达后应用免疫共沉淀技术检测STAT3蛋白与p38/ERK2蛋白之间是否存在相互作用.然后应用报告基因技术检测这种相互作用如何影响TNF-α的转录表达,并在应用RNA干扰技术将STAT3通路抑制后,观察TNF-α启动子转录活性如何变化.酶切和测序结果表明,扩增的p38和ERK2基因序列正确,大小为1080bp,在293T细胞中正确表达大小约40ku的p38和ERK2蛋白.免疫共沉淀实验结果证实,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白在体内相互作用.下游基因TNF-α荧光素酶活性实验显示,p38和STAT3蛋白以及ERK2和STAT3蛋白复合物协同升高TNF-α的活性,应用STAT3的干扰RNA后其活性则明显下降.该研究表明,STAT3和p38/ERK2蛋白在体内存在相互作用,STAT3与p38、STAT3与ERK2均对TNF-α的表达发挥协同效应,在阻断STAT3通路后,STAT3与p38、STAT3与ERK2对TNF-α表达的协同效应将明显降低.

关键词：信号转导及转录激活因子3 p38丝裂原活化蛋白激酶细胞外信号蛋白调节激酶肿瘤坏死因子-α

信号转导和转录激活因子3调节肿瘤坏死因子α表达的结合位点研究

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生物化学与生物物理进展 2011年第12期38卷 1145-1152页

作者：杨丽萍姚咏明叶棋浓盛志勇军事医学科学院实验动物中心北京100071 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048 军事医学科学院生物工程研究所北京100850

脓毒症早期内毒素(脂多糖,LPS)可激活丝裂原活化蛋白激酶通路,诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种炎性细胞因子大量生成.TNF-α作为一种重要的早期炎症介质,间接激活Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路.STATs活化后直接进... 详细信息

脓毒症早期内毒素(脂多糖,LPS)可激活丝裂原活化蛋白激酶通路,诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种炎性细胞因子大量生成.TNF-α作为一种重要的早期炎症介质,间接激活Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路.STATs活化后直接进入核内参与LPS诱导的基因表达.本研究拟探讨STAT3在TNF-α启动子上的作用位点,为深入认识JAK/STAT信号通路在脓毒症发生中的分子基础及其干预途径提供理论依据.a.将Flag-STAT3与全长TNF-α启动子报告基因共同转染COS-7细胞,观察STAT3作用的剂量-效应.结果证实,STAT3对TNF-α基因的表达不受LPS调节,无论是否有LPS刺激,随着STAT3剂量的增加,TNF-α基因的表达亦随之增加.在将200μg/L浓度的Flag-STAT3质粒分别与不同长度的TNF-α启动子报告基因质粒共同转染COS-7细胞并用LPS刺激,观察不同片段的TNF-α启动子活性.结果发现,95 bp片段的TNF-α缺失突变体作用最为明显,增加了6.9倍.b.分别构建了70 bp、75 bp、80 bp和85 bp片段的TNF-α缺失突变体———pTNF-α(70 bp)、pTNF-α(75 bp)、pTNF-α(80 bp)和pTNF-α(85 bp),将它们与Flag-STAT3共同转染COS-7细胞并用LPS刺激,观察到85 bp片段的活性与95 bp片段相似,当片段到达80 bp时,活性降低到对照水平.为了进一步了解其精确结合位点,将85 bp片段突变体的81和82位碱基突变,检测其对TNF-α活性影响,发现启动子活性下降.c.为了证明STAT3的潜在结合位点在80 bp到85 bp之间,且81和82位这2个位点的突变确实改变了STAT3对TNF-α启动子活性,进行凝胶迁移阻滞实验,观察到TNF-α启动子62～85 bp的野生型γ-32P标记的探针可以与核蛋白STAT3结合,而突变的62～85 bp标记的探针不能与核蛋白STAT3结合.上述结果表明,STAT3对TNF-α基因表达的调节不依赖LPS的刺激,STAT3在TNF-α启动子的潜在结合位点是在80到85碱基片段之间.

关键词：信号转导及转录激活因子3 肿瘤坏死因子α 脂多糖

哺乳动物细胞线粒体融合-分裂与钙离子信号的关系

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生理科学进展 2010年第3期41卷 171-176页

作者：赵光举卢中秋姚咏明温州医学院附属第一医院急诊科浙江温州325000 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

线粒体是一种高度动态的细胞器,通过融合和分裂两个相反的过程来维持正常的形态结构。在哺乳动物中,多种因素影响线粒体的融合-分裂的平衡,但现已明确,线粒体融合的主要调节因子为Mfn1/2、OPA1,介导线粒体分裂的主要调节因子为Drp1、Fis... 详细信息

线粒体是一种高度动态的细胞器,通过融合和分裂两个相反的过程来维持正常的形态结构。在哺乳动物中,多种因素影响线粒体的融合-分裂的平衡,但现已明确,线粒体融合的主要调节因子为Mfn1/2、OPA1,介导线粒体分裂的主要调节因子为Drp1、Fis1。新近研究发现,线粒体融合-分裂平衡的紊乱将导致线粒体结构和在细胞内分布的异常,进而影响细胞和线粒体对钙离子信号的反应;同时,钙离子也可通过多种机制影响线粒体的形态结构与分布。

关键词：线粒体钙信号融合-分裂

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辅助性T细胞17的研究进展

生理科学进展 2008年第4期39卷 307-313页

作者：戴新贵姚咏明艾宇航解放军总医院第一附属医院烧伤研究所北京100037 中南大学湘雅医院重症医学科长沙410008

CD4+T细胞根据释放细胞因子不同可分为不同的亚型:辅助性T细胞(Thelper cells,Th)1、Th2和调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg)。最近发现了一种新的CD4+T细胞亚型:以分泌白细胞介素-17为主要特征的Th17细胞。Th17细胞的发现对CD4+T细... 详细信息

CD4+T细胞根据释放细胞因子不同可分为不同的亚型:辅助性T细胞(Thelper cells,Th)1、Th2和调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg)。最近发现了一种新的CD4+T细胞亚型:以分泌白细胞介素-17为主要特征的Th17细胞。Th17细胞的发现对CD4+T细胞分化、Th细胞漂移等传统理论提出了挑战,同样也为感染、免疫性疾病提供了新的研究思路,尤其是Treg、Th1、Th2和Th17细胞在体内的平衡对于维持正常免疫应答反应有重要意义。

关键词： Th17细胞白细胞介素-17 辅助性T细胞调节性T细胞

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凝溶胶蛋白与创伤后炎症反应

生理科学进展 2010年第4期41卷 279-282页

作者：祝筱梅姚咏明盛志勇解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所

凝溶胶蛋白（gelsolin,GSN）是机体内重要的肌动蛋白结合蛋白,对肌动蛋白的聚合/解聚具有重要调节作用。其生理效应不仅在于维持细胞结构稳定,而且参与多种细胞活动的调节过程,是一种重要的细胞功能调节蛋白。血浆型GSN是血浆肌动蛋白... 详细信息

凝溶胶蛋白（gelsolin,GSN）是机体内重要的肌动蛋白结合蛋白,对肌动蛋白的聚合/解聚具有重要调节作用。其生理效应不仅在于维持细胞结构稳定,而且参与多种细胞活动的调节过程,是一种重要的细胞功能调节蛋白。血浆型GSN是血浆肌动蛋白清除系统主要成员之一,对维持内环境稳定非常重要。严重创伤后血浆中GSN水平显著而持续降低,且与患者预后密切相关。本文综述GSN与创伤后炎症反应的关系。

关键词：凝溶胶蛋白创伤和损伤炎症

高迁移率族蛋白B1在大鼠肝脏热缺血／再灌注损伤中的作用

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中国中西医结合急救杂志 2009年第3期16卷 168-170页

作者：谭向龙王世斌姚咏明董宁熊瑜琳吴瑶解放军总医院第一附属医院肝胆外科北京100048

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在大鼠肝脏热缺血／再灌注（I／R）损伤中的作用。方法90只Wistar大鼠被随机分为正常对照组、林格液组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组。采用夹闭左、右肝蒂使95％肝脏缺血90min再恢复血流并切除未缺血的尾... 详细信息

目的探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在大鼠肝脏热缺血／再灌注（I／R）损伤中的作用。方法90只Wistar大鼠被随机分为正常对照组、林格液组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组。采用夹闭左、右肝蒂使95％肝脏缺血90min再恢复血流并切除未缺血的尾叶肝脏制模。林格液组和EP治疗组制模前分别经阴茎背静脉注射林格液4ml或EP3．26g／L（溶于林格液4ml中），于术后2、8、24、48h取下腔静脉血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平，处死动物后检测肝组织HMGB1、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-10（IL-10）含量。结果林格液组和EP治疗组血清ALT、AST水平均显著高于正常对照组，EP治疗组各时间点ALT及术后2h、8hAST水平均显著低于林格液组（P〈0．05或P〈0．01）。林格液组8、24、48h肝组织HMGB1水平显著高于正常对照组，EP治疗组仅48h显著升高；EP治疗组在8h、24h时HMGB1水平显著低于林格液组；林格液组和EP治疗组在8h时TNF—α水平均高于正常对照组，而EP治疗组显著低于林格液组（P〈0．05或P〈0．01）。各组IL-10水平无明显差异。结论HMGB1参与了肝I／R损伤的病理过程。

关键词：高迁移率族蛋白B1 丙酮酸乙酯缺血/再灌注损伤,肝细胞因子

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内质网应激与急性损伤后免疫反应

生理科学进展 2009年第1期40卷 51-55页

作者：祝筱梅姚咏明盛志勇解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100037

严重损伤后机体免疫功能紊乱发病机制及其调控途径是现代危重病医学亟待解决的重大难题。创伤、烧伤等急性打击及伴随的失血、低氧、缺血-再灌注损伤等多种因素均可引起组织细胞内质网功能状态的改变即内质网应激(ERS)。ERS持续时间及... 详细信息

严重损伤后机体免疫功能紊乱发病机制及其调控途径是现代危重病医学亟待解决的重大难题。创伤、烧伤等急性打击及伴随的失血、低氧、缺血-再灌注损伤等多种因素均可引起组织细胞内质网功能状态的改变即内质网应激(ERS)。ERS持续时间及应激水平决定应激细胞适应、损伤或凋亡的发生与发展,对机体免疫系统功能状态具有重要影响。本文综述ERS与急性损伤后机体免疫功能状态的关系及其在脓毒症病理过程中的意义。

关键词：创伤和损伤脓毒症内质网应激

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线粒体融合蛋白2研究新进展

生物化学与生物物理进展 2010年第3期37卷 252-260页

作者：赵光举卢中秋姚咏明温州医学院附属第一医院急诊科温州325000 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,Mfn2)是一种高度保守的跨膜GTP酶,在线粒体融合中的关键作用已为人所熟知.随着认识的不断深入,Mfn2在介导线粒体融合之外的功能日渐显现,其在细胞信号转导、能量代谢、增殖及凋亡等生命过程中均具有重要调... 详细信息

线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,Mfn2)是一种高度保守的跨膜GTP酶,在线粒体融合中的关键作用已为人所熟知.随着认识的不断深入,Mfn2在介导线粒体融合之外的功能日渐显现,其在细胞信号转导、能量代谢、增殖及凋亡等生命过程中均具有重要调节作用.Mfn2效应的广泛性及作用机制的复杂性预示着其在现代生物医学中可能极具应用价值.综述了Mfn2结构和生物学功能研究的最新认识,并简要介绍了Mfn2功能或表达异常与疾病发生的关系及其治疗学意义.

关键词：线粒体线粒体融合蛋白2 信号转导凋亡疾病

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胆碱能抗炎通路在炎症反应中的作用

生理科学进展 2010年第3期41卷 217-220页

作者：王大伟周荣斌姚咏明北京军区总医院急诊科北京100700 解放军总医院第一附属医院烧伤研究所北京100048

胆碱能抗炎通路是调节免疫系统的一种神经生理机制,其在脾脏、肝脏和胃肠道等网状内皮系统通过释放乙酰胆碱抑制细胞因子的合成,控制炎症反应。乙酰胆碱与巨噬细胞和其他分泌细胞因子细胞表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体相互作用,抑制致炎... 详细信息

胆碱能抗炎通路是调节免疫系统的一种神经生理机制,其在脾脏、肝脏和胃肠道等网状内皮系统通过释放乙酰胆碱抑制细胞因子的合成,控制炎症反应。乙酰胆碱与巨噬细胞和其他分泌细胞因子细胞表面的α7烟碱型乙酰胆碱受体相互作用,抑制致炎细胞因子的合成与释放,防止组织损伤。本文着重综述胆碱能抗炎通路调节炎症反应的神经生理机制及其在炎症性疾病中的干预价值。

关键词：胆碱能抗炎通路迷走神经炎症反应 α7烟碱型乙酰胆碱受体