检索结果-南通市图书馆

Ad介导人AFP和IFN-γ协同诱发抗小鼠肝癌免疫效应

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

癌症 2008年第2期27卷 155-159页

作者：谭晓华竺青北京军区总医院血液科北京007002 Center for Gene Therapy Department of Molecular and Pathological MedicineMedical CenterMcMaster University

背景与目的:原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一,目前对HCC的治疗尚无行之有效的手段。本研究探讨腺病毒(Adenovirus,Ad)载体介导异种甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP)和酌干扰素(Interferon-gamma,IFN-γ酌)的协同抗肝癌效应。方法:用RT-PCR(reverse transcri-ptase-polymerase chain reaction)方法克隆小鼠IFN-γ酌基因并构建复制缺损型腺病毒编码人AFP和小鼠IFN-γ酌联合表达载体(Ad-hAFP/IFN-γ酌)。皮内免疫C57BL/6小鼠7d后,取脾细胞行51Cr释放实验检测特异性细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocytes,CTLs)杀伤活性;或给免疫小鼠皮下接种Hepa1-6肝癌细胞,观察荷瘤小鼠成活情况。结果:51Cr释放实验显示,Ad-hAFP/IFN-γ酌免疫小鼠1周后其诱导产生的特异性CTL杀伤活性明显强于Ad-hAFP或Ad-IFN-γ酌单独免疫,在效∶靶比(E∶T)为10∶1时,Ad-hAFP/IFN-γ酌、Ad-hAFP和Ad-IFN-γ酌诱发的CTL杀伤率分别(43.8±5.5)%、(28.2±3.2)%和(12.8±1.9)%;30∶1时,为(79.6±6.4)%、(51.9±4.3)%和(15.6±2.3)%以及90∶1时(88.2±6.3)%、(62.5±4.8)%和(26.5±2.4)%。荷瘤试验表明,Ad-hAFP或Ad-IFN-γ酌单独免疫小鼠后1周接种5×106Hepa1-6肝瘤细胞,观察2个月,Ad-hAFP免疫组80%的小鼠荷瘤,Ad-IFN-γ酌免疫组小鼠则100%荷瘤;而Ad-hAFP/IFN-γ酌免疫小鼠在接种同样数量的Hepa1-6细胞,2个月无小鼠荷瘤,小鼠100%存活。结论:腺病毒载体介导异种AFP能有效地诱发针对小鼠AFP的特异性细胞免疫反应,IFN-γ酌能明显增强这种效应。

关键词：腺病毒载体肝肿瘤甲胎蛋白异种抗原 γ干扰素

人AFP腺病毒载体感染的树突状细胞诱导小鼠抗肝癌免疫

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肿瘤杂志 2006年第1期28卷 13-16页

作者：谭晓华 Zhu Qing 刘畅刘秀丽邵晓婷魏兵北京军区总医院血液科 100700 Centre for Gene Therapy Molecular and Pathological Medicine DepartmentMedical CentreMcMaster UniversityHamil．ton0N．CanadaL8S．

目的探讨复制缺损型腺病毒载体(Ad)介导异种AFP修饰的树突状细胞(DCs)诱发抗肝癌免疫、打破肿瘤免疫耐受的效果。方法从HepG2和Hepa16细胞中克隆人和小鼠AFP,插入Ad中构建AdhAFP和AdmAFP。用AdhAFP或AdmAFP感染小鼠骨髓来源的DC后,在无... 详细信息

目的探讨复制缺损型腺病毒载体(Ad)介导异种AFP修饰的树突状细胞(DCs)诱发抗肝癌免疫、打破肿瘤免疫耐受的效果。方法从HepG2和Hepa16细胞中克隆人和小鼠AFP,插入Ad中构建AdhAFP和AdmAFP。用AdhAFP或AdmAFP感染小鼠骨髓来源的DC后,在无或有删除CD4或CD8情况下免疫C57BL/6小鼠,7d后取脾细胞行51Cr释放实验,检测特异性CTL杀伤活性;或给免疫小鼠接种Hepa16肝癌细胞,观察荷瘤小鼠成活情况。结果AdhAFP/DCs免疫小鼠1周后其细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性明显强于AdmAFP/DCs。AdhAFP/DCs免疫小鼠后1周接种5×106Hepa16肝瘤细胞,2个月后仍然有80%的小鼠无瘤生长;而接种1×106Hepa16细胞至AdmAFP/DCs免疫小鼠,2个月后小鼠成活率为20%。删除小鼠CD4或CD8T细胞均使AdhAFP/DCs诱发的抗肿瘤免疫反应消失。结论Ad介导异种AFP修饰的DCs能有效地打破肿瘤的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应,这种特异性细胞免疫反应是CD4和CD8依赖性的。

关键词：腺病毒载体感染 AFP修饰树突状细胞肝肿瘤

腺病毒编码人TRP2修饰DC诱发抗小鼠黑色素瘤免疫的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第12期25卷 993-997页

作者：谭晓华 Wan Yonghong 100700 北京军区总医院血液科 Centre for Genqe Therapy Molecular and Pathological Medicine DepartmentMedical CentreMcMaster UniversityHamiltonON.CanadaL8S

目的比较腺病毒载体(Ad)介导人和小鼠酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-relatedpro-tein2,TRP2)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(BM-DC)诱发抗小鼠黑色素瘤免疫的差异。方法Ad编码人或小鼠TRP2(AdhTRP2或AdmTRP2)体外感染小鼠BM-DC并体内皮... 详细信息

目的比较腺病毒载体(Ad)介导人和小鼠酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-relatedpro-tein2,TRP2)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(BM-DC)诱发抗小鼠黑色素瘤免疫的差异。方法Ad编码人或小鼠TRP2(AdhTRP2或AdmTRP2)体外感染小鼠BM-DC并体内皮下免疫C57BL/6小鼠,7d后取出被免疫小鼠脾细胞行体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤试验(invivoCTL)和细胞内IFN-γ染色(ICS)分析CTL的杀伤活性和IFN-γ的产生;或给免疫后小鼠皮下接种小鼠B16.F10黑色素瘤细胞,观察荷瘤小鼠的成活情况。结果invivoCTL和ICS分析显示,AdhTRP2/BM-DC免疫小鼠,其6hCTL杀伤率为(98.7±1.2)%,IFN-γ产生的CD8+T细胞占总CD8+T细胞的(1.25±0.21)%;而AdmTRP2/BM-DC免疫的小鼠,其6hCTL杀伤率和产生IFN-γ的CD8+T细胞比例分别为(28.6±6.3)%和(0.24±0.06)%。荷瘤试验表明,AdhTRP2/BM-DC免疫小鼠后1周皮下接种106B16.F10细胞,观察3个月100%的小鼠无瘤生长;而接种5×104B16.F10细胞至AdmTRP2/BM-DC免疫1周的小鼠,3个月后小鼠成活率仅为40%。结论Ad介导异种(人)TRP2较自身(小鼠)TRP2修饰的BM-DC更为有效地打破肿瘤免疫耐受、诱导强烈的抗黑色素瘤免疫反应,是一种高效的以DC为基础的肿瘤疫苗。

关键词：人腺病毒树突状细胞一元酚单氨酶嗜异性抗原免疫耐受

负载抗原肽的树突状细胞增强腺病毒载体介导hTRP2诱发抗小鼠黑色素瘤免疫

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肿瘤杂志 2006年第9期28卷 658-661页

作者：谭晓华刘畅万永红北京军区总医院血液科 100700 加拿大麦克玛斯特大学病理分子医学系基因治疗中心

目的探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHCⅠ多肽TRP2p180-188 (SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果。方法Ad hTRP2免疫C57BL／6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或D... 详细信息

目的探讨人黑色素瘤相关抗原TRP2(hTRP2)MHCⅠ多肽TRP2p180-188 (SVYDFFVWL)修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),增强腺病毒载体介导hTRP2(Ad hTRP2)诱发的抗小鼠黑色素瘤免疫效果。方法Ad hTRP2免疫C57BL／6小鼠,3周后分别用Ad hTRP2或DC／SVYDFFVWL再免疫一次。用体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验和细胞内IFNγ染色(ICS)分析CTL杀伤活性和IFNγ的产生;或给免疫小鼠皮下接种B16．F10细胞,观察荷瘤小鼠的成活情况。结果测定脾脏中6 h CTL杀伤率和产生IFNγ的CD8+T细胞比例,结果分别是:Ad hTRP2(初免)- Ad hTRP2(加强)组为68．40％±5．50％和0．67％±0．16％,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为28．50％±6．40％和0．22％±0．07％,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组为98．90％±0．90％和1．05％±0．21％。荷瘤实验显示,小鼠接种1×106 B16．F10细胞后3个月,DC／SVYDFFVWL(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠无一成活,Ad hTRP2(初免)-Ad hTRP2(加强)组只有40％的小鼠存活,而Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)组小鼠100％存活。结论用DC／SVYDFFVWL加强免疫能显著地增强Ad hTRP2初次免疫的效果,表明Ad hTRP2(初免)-DC／SVYDFFVWL(加强)免疫是一种克服重复应用腺病毒并不能提高抗肿瘤免疫效应的有效方式。

关键词：腺病毒载体树突状细胞酪氨酸酶相关蛋白2 抗原肽初免-加强免疫方式

hKDR基因胞外区mRNA转染树突状细胞诱发对表达mKDR的Hepa1-6细胞的特异性杀伤效应

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

免疫学杂志 2009年第5期25卷 495-499页

作者：孙林英刘畅刘秀丽邵晓婷谭晓华泰山医学院医学检验系北京军区总医院肿瘤诊疗中心北京军区总医院血液科

目的探讨人血管内皮细胞生长因子受体-2(KDR)胞外段(Ig1~3)mRNA修饰的树突状细胞(DC)诱发的体外特异性细胞免疫效应。方法构建pmRNA IRES-hKDR)(Ig1~3),体外转录出相应的mRNA,Western blot鉴定其蛋白表达;以hKDR(Ig1~3)mRNA致敏来源于... 详细信息

目的探讨人血管内皮细胞生长因子受体-2(KDR)胞外段(Ig1~3)mRNA修饰的树突状细胞(DC)诱发的体外特异性细胞免疫效应。方法构建pmRNA IRES-hKDR)(Ig1~3),体外转录出相应的mRNA,Western blot鉴定其蛋白表达;以hKDR(Ig1~3)mRNA致敏来源于小鼠骨髓的DC,并免疫小鼠,同时设空白DC对照组,7d后取鼠脾细胞为效应细胞,表达mKDR的肿瘤细胞为靶细胞按100∶1、50∶1、25∶1的比例混合,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒作用。结果未经修饰DC激活的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对靶细胞的杀伤率为(19.6±3.7)%、(10.2±2.6)%、(6.2±2.2)%,经mRNA修饰的DC激活的CTL对靶细胞杀伤率为(75.2±2.3)%、(54.3±3.4)%、(20.9±3.1)%,同一效靶比情况下显著强于其他3组。结论hKDR(Ig1~3)mRNA致敏的DC能诱导针对Hepa1-6(mKDR)的特异性细胞免疫反应。

关键词：血管内皮细胞生长因子受体2 树突状细胞细胞毒性T淋巴细胞反应

不同免疫途径对抗原肽修饰DC疫苗免疫效应的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国免疫学杂志 2006年第11期22卷 1036-1040页

作者：谭晓华刘端祺北京军区总医院血液科北京100700 北京军区总医院肿瘤诊疗中心北京100700

目的探讨不同的免疫途径对抗原肽修饰树突状细胞(DC)疫苗免疫效果的影响。方法用鸡卵清蛋白(OVA)MHCⅠ限制性多肽SIINFEKL(OVAp257-264)包被小鼠骨髓来源的DC,通过皮下、腹腔、静脉或肌肉注射免疫小鼠,7天后行体内细胞毒性T淋巴细胞杀... 详细信息

目的探讨不同的免疫途径对抗原肽修饰树突状细胞(DC)疫苗免疫效果的影响。方法用鸡卵清蛋白(OVA)MHCⅠ限制性多肽SIINFEKL(OVAp257-264)包被小鼠骨髓来源的DC,通过皮下、腹腔、静脉或肌肉注射免疫小鼠,7天后行体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验(InvivoCTL)分析CTL杀伤活性和细胞内IFN-γ染色(ICS)分析免疫小鼠脾脏CD8+细胞产生IFN-γ的情况。结果免疫7天后,InvivoCTL结果显示SIINFEKL修饰的DC皮下、腹腔、静脉或肌肉注射免疫小鼠其特异性CTL杀伤效应分别是37.3%±7.3%、61.0%±4.2%、56.9%±3.6%和10.8%±2.3%;ICS结果示四组小鼠产生IFN-γ的CD8+细胞占总CD8+细胞的比例分别是0.31%±0.07%、0.85%±0.12%、0.76%±0.14%和0.15%±0.04%。结论不同免疫途径可明显影响抗原肽修饰DC疫苗的免疫效应,其中腹腔注射诱发的抗原特异性CTL反应最强,静脉注射者次之,而皮下注射特别是肌肉注射较弱,提示通过腹腔注射DC疫苗可能是安全、高效的免疫途径。

关键词：树突状细胞抗原肽免疫途径

mCD20-腺病毒穿梭质粒pDC315的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

实用医学杂志 2007年第21期23卷 3310-3313页

作者：李慧刘兵王友臣谭晓华北京军区总医院血液科第三军医大学在读硕士研究生100700 第三军医大学研究生队重庆市400038

目的:构建腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20重组质粒,为探讨编码mCD20基因的腺病毒载体做好准备,为CD20基因治疗淋巴瘤的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法将CD20基因克隆出来,通过分子生物学技术构建过渡质粒pcDNA3.1-mCD20质粒,用PCR、酶... 详细信息

目的:构建腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20重组质粒,为探讨编码mCD20基因的腺病毒载体做好准备,为CD20基因治疗淋巴瘤的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法将CD20基因克隆出来,通过分子生物学技术构建过渡质粒pcDNA3.1-mCD20质粒,用PCR、酶切进行鉴定后,将该基因cDNA片段插入腺病毒穿梭质粒pDC315中,转化至高效感受态DH5a细菌细胞中进行扩增,提取质粒,获得重组质粒腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20。结果:经分析鉴定,重组质粒中含有mCD20基因,达到实验预期目的。结论:成功构建表达mCD20基因的重组质粒腺病毒穿梭质粒pDC315-mCD20,有助于后续研究构建腺病毒载体AdmCD20。

关键词：腺病毒科质粒抗原,CD20 基因治疗

树突状细胞融合疫苗对黑色素瘤小鼠的免疫保护作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国医师杂志 2006年第3期8卷 306-308页

作者：刘秀丽孙林英邵晓婷王帅刘畅谭晓华北京军区总医院血液科北京100700

目的探讨树突状细胞(DCs)融合疫苗对黑色素瘤小鼠的免疫保护作用。方法取小鼠骨髓细胞,用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)定向诱导分化为骨髓来源的树突状细胞(BMDCs),体外转录血管内皮生长因子受体2(KDR)融合基因的mRNA,将其致敏DCs,... 详细信息

目的探讨树突状细胞(DCs)融合疫苗对黑色素瘤小鼠的免疫保护作用。方法取小鼠骨髓细胞,用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)定向诱导分化为骨髓来源的树突状细胞(BMDCs),体外转录血管内皮生长因子受体2(KDR)融合基因的mRNA,将其致敏DCs,按同量不同次免疫小鼠;皮下接种5×105个/只B16细胞建立荷瘤小鼠模型,20 d后未长肿瘤的小鼠再次接种相同剂量的B16细胞,观察小鼠成瘤情况。实验分组:致敏DCs免疫1次组(A组),致敏DCs免疫2次组(B组),致敏DCs免疫3次组(C组),对照组(D组)。结果对照组小鼠一周成瘤率100%,平均存活时间15 d,A组,B组,C组小鼠观察20 d未见肿瘤生长;第二次接种B16细胞后,A组7只中有2只小鼠长出了肿瘤,B组8只中有2只长出了肿瘤,从第一次接种肿瘤细胞开始计算小鼠生存时间,A组平均生存时间50 d;B组平均生存时间72 d;C组未见肿瘤生长。结论树突状细胞KDR融合疫苗对黑色素瘤小鼠具有免疫保护作用。

关键词：树突细胞黑色素瘤血管内皮生长因子受体2 疫苗免疫保护作用

hKDR融合基因致敏树突状细胞对小鼠肝癌细胞杀伤活性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华北国防医药 2006年第1期18卷 5-7,F0003页

作者：刘秀丽孙林英邵晓婷刘端祺谭晓华北京军区总医院血液科北京100700 北京军区总医院肿瘤诊疗中心北京100700

目的:探讨hKDR融合基因致敏树突状细胞(DC)激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠肝癌细胞的杀伤活性。方法:自小鼠骨髓中获取DC,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和hKDR融合基因的mRNA致敏DC;用致敏的DC免疫小鼠取其脾脏获得CTL,... 详细信息

目的:探讨hKDR融合基因致敏树突状细胞(DC)激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠肝癌细胞的杀伤活性。方法:自小鼠骨髓中获取DC,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和hKDR融合基因的mRNA致敏DC;用致敏的DC免疫小鼠取其脾脏获得CTL,即效应细胞,用脂质体将pCDNA hKDR转染至小鼠肝癌Hepal-6细胞株中,作为靶细胞;将效应细胞与靶细胞按不同比例混合,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒作用。结果:未经修饰的DC激活的CTL与靶细胞比例为100∶1、50∶1、25∶1情况下,其杀伤率分别为19.2%、12.3%、6.9%;经hKDR修饰的DC激活的CTL与靶细胞比例为100∶1、50∶1、25∶1情况下,其杀伤率分别为71.6%、55.8%、22.7%,将两组结果在相同的比例下两两比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论:hKDR融合基因致敏DC激活的CTL对小鼠肝癌细胞具有较强的杀伤作用,且杀伤能力随效应细胞与靶细胞比例增高而增强。

关键词： hKDR融合基因树交状细胞肝肿瘤杀伤活性