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机器学习鉴定KDELR3作为骨关节炎缺氧特征基因的实验验证

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中国组织工程研究 2024年第21期28卷 3431-3437页

作者：徐文飞明春玉梅其杰袁长深郭锦荣曾超段戡广西中医药大学第一附属医院四肢骨伤科广西壮族自治区南宁市530023 广西中医药大学附属瑞康医院老年病科广西壮族自治区南宁市530011

背景:缺氧与骨关节炎软骨细胞损伤的发生、发展密切相关,但具体作用靶点及调控机制尚不清楚。目的:运用机器学习方法鉴定KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu)受体3(KDELR3)作为骨关节炎缺氧的特征基因及免疫浸润分析,以期为骨关节炎的治疗提供新的思... 详细信息

背景:缺氧与骨关节炎软骨细胞损伤的发生、发展密切相关,但具体作用靶点及调控机制尚不清楚。目的:运用机器学习方法鉴定KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu)受体3(KDELR3)作为骨关节炎缺氧的特征基因及免疫浸润分析,以期为骨关节炎的治疗提供新的思路与方法。方法:从GEO数据库下载骨关节炎相关的数据集和GSEA网站中获取缺氧相关基因;采用R语言对骨关节炎数据集进行批次校正及免疫浸润分析,并提取骨关节炎缺氧基因进行差异分析,对差异表达基因进行GO功能及KEGG信号通路分析;同时运用加权基因共表达网络分析(Weighted correlation network analysis,WGCNA)及机器学习筛选骨关节炎缺氧的特征基因,并进行体外细胞实验,运用数据集及qPCR验证表达并行相关免疫浸润分析。结果与结论:①经批次校正及主成分分析获得骨关节炎基因8492个,主要与Macrophages M2和Mast cells resting等免疫细胞密切相关;同时获得缺氧基因200个,进而得到41个骨关节炎缺氧差异表达基因。②GO分析主要涉及对营养水平、糖皮质激素反应等生物过程;涉及溶酶体腔、高尔基内腔等细胞组分;涉及14-3-3蛋白结合、DNA结合转录激活剂活性等分子功能。③KEGG分析骨关节炎缺氧差异表达基因与PI3K-Akt、FoxO及癌症中的微小RNA等信号通路有关。④运用WGCNA分析及机器学习筛选后获得特征基因KDELR3。⑤通过基因芯片验证后发现KDELR3基因在滑膜中实验组基因表达高于对照组(P=0.014),而半月板中实验组基因的表达却低于对照组(P=0.024)。⑥体外软骨细胞实验显示KDELR3基因在软骨中实验组表达高于对照组(P=0.005),同时KDELR3基因与Macrophages M0(P=0.014),T cells follicular helper(P=0.014)等密切相关。运用机器学习方法证实KDELR3可作为骨关节炎缺氧特征基因,可能通过改善缺氧来干预骨关节炎发病,期待能为更好地治疗骨关节炎提供新方向。

关键词：骨关节炎机器学习缺氧特征基因软骨细胞生物标志物免疫浸润分析

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静电纺丝构建中药控释系统的研究及应用

中国组织工程研究 2024年第17期28卷 2759-2765页

作者：张树智曲鹏飞韩俊泉王红天津中医药大学第二附属医院普外科天津市300250

背景:静电纺丝多孔纳米纤维是一种具有优良性能和可设计性的材料,将传统中药与其联合构建新型中药控释系统是实现中药的控制释放和提高生物利用度的有效途径,具有广阔应用前景。目的:综述静电纺丝中药控释系统的构建方法及其在医学领域... 详细信息

背景:静电纺丝多孔纳米纤维是一种具有优良性能和可设计性的材料,将传统中药与其联合构建新型中药控释系统是实现中药的控制释放和提高生物利用度的有效途径,具有广阔应用前景。目的:综述静电纺丝中药控释系统的构建方法及其在医学领域相关研究进展。方法:以“静电纺丝,中药,药物载体,释药系统,组织工程,敷料”为中文检索词,以“electrospinning,traditional Chinese medicine,drug carrier,drug delivery system,tissue engineering,dressing”为英文检索词,检索中国知网、PubMed和Web of Science数据库的关于静电纺丝中药控释系统的研究应用文献,检索时间范围为2013-2023年,最终纳入62篇文献进行综述分析。结果与结论:①构建电纺多孔纤维中药控释系统的关键要素为基质材料、中药成分和载药方式。②电纺多孔纤维中药控释系统的构建可依据应用场景和治疗目的进行,首先选定中药成分种类,然后依据药物特性选择与其适配的聚合物基体及溶液,最后依据释药需求设计纤维结构并采用适宜的载药方式。③目前在电纺纤维中药控释系统中所应用的药剂以易制备纺丝溶液的植物中药提取物为主,缺少动物中药和矿物中药的系统研究。④共混载药是研究应用最多的载药方式,且通过对溶液理化性质的优化和负载物质多样性的选择不断扩展其释药特性和适应场景;同轴、多轴及顺序纺丝等载药方式可以制备具有多层成分性质不同的复合纤维,具有广阔发展前景。⑤电纺纤维中药控释系统早期应用集中于医用敷料方面,利用中药活性成分的抗菌止血功能,近年来发现中药某些成分能促进细胞黏附增殖分化,开启了组织工程领域的探索研究。⑥目前对电纺多孔纤维中药控释系统的研究主要集中在对负载材料、工艺、理化性能、生物性能的表征和优化上,而对机制的研究较少,其在临床中的应用尚未普及,在体内的不良反应尚不明了,对其降解行为与释药行为的相互影响也缺乏研究。⑦未来研究中需要考虑:通过改善中药与纺丝溶剂的理化性能和加大中药活性成分的提纯以扩大非植物中药的应用范围,对中药成分的治疗效果和作用机制进行全面研究,并阐明控释系统的降解行为与释药行为的相互影响规律,在更准确的机制下实现中药与电纺纳米纤维更完美的联合和应用。

关键词：静电纺丝纳米纤维中药药物载体药物释放系统组织工程敷料多功能生物材料综述

水甘草碱抑制破骨细胞活化缓解磨损颗粒诱导的炎性骨溶解

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中国组织工程研究 2024年第10期28卷 1519-1525页

作者：张巍俞磊杨鹏耿德春苏州大学附属第一医院骨科江苏省苏州市215006

背景:水甘草碱因其抗炎生物活性在心肌重塑、急性肾损伤和肺损伤等疾病中表现出良好的治疗作用。假体磨损颗粒常引发无菌性炎症,炎性因子的大量释放进一步导致了假体周围骨质的破坏和骨量丢失,然而目前尚无水甘草碱对假体周围骨溶解确... 详细信息

背景:水甘草碱因其抗炎生物活性在心肌重塑、急性肾损伤和肺损伤等疾病中表现出良好的治疗作用。假体磨损颗粒常引发无菌性炎症,炎性因子的大量释放进一步导致了假体周围骨质的破坏和骨量丢失,然而目前尚无水甘草碱对假体周围骨溶解确切疗效的基础研究。目的:探讨水甘草碱对破骨细胞活化、炎症因子表达及磨损颗粒诱导炎性骨溶解的影响。方法:①细胞实验:将RAW264.7细胞分4组培养:对照组细胞加入完全培养基;破骨诱导组加入破骨诱导培养基(含50 ng/mL RANKL的完全培养基);水甘草碱低、高剂量组分别加入1,5μmol/L水甘草碱处理4 h后加入破骨诱导培养基。破骨诱导5 d后,分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、F-actin染色及RT-PCR检测。②动物实验:采用随机数字表法将20只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、骨溶解组、水甘草碱低及高剂量组,每组5只。骨溶解组、水甘草碱低及高剂量组通过将钛颗粒注射至颅骨表面的方法建立颅骨骨溶解模型,造模后第2天,水甘草碱低、高剂量组分别腹腔注射10,20 mg/kg水甘草碱,每隔1 d注射1次,直至造模2周后,收集小鼠动脉血血清进行炎性因子(白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)检测,收集颅骨进行micro-CT扫描和骨参数分析。结果与结论:①细胞实验:抗酒石酸酸性磷酸酶和F-actin染色显示,与破骨诱导组比较,水甘草碱低、高剂量组可抑制破骨细胞的活化及骨吸收,其中以高剂量组抑制更显著。RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,破骨诱导组3种炎症因子的mRNA表达升高(P<0.01);与破骨诱导组比较,水甘草碱低及高剂量组3种炎症因子的mRNA表达降低(P<0.01),其中以高剂量组降低更明显。②动物实验:与假手术组比较,骨溶解组3种炎性因子水平升高(P<0.01);与骨溶解组比较,水甘草碱低及高剂量组3种炎性因子水平降低(P<0.05,P<0.01),其中以高剂量组降低更明显。micro-CT扫描结果显示,钛颗粒导致小鼠颅骨骨溶解破坏,水甘草碱可抑制钛颗粒诱导的骨溶解,其中以高剂量组抑制作用更显著。③结果表明:水甘草碱可通过抑制炎症因子释放下调破骨细胞的骨吸收功能来改善钛颗粒诱导的骨溶解、骨破坏。

关键词：水甘草碱炎性因子破骨细胞活化磨损颗粒假体周围骨溶解

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白与运动、高脂肪/高盐饮食和衰老的关系

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中国组织工程研究 2024年第4期28卷 574-580页

作者：王士杰文登台王京峰高颖晖鲁东大学体育学院山东省烟台市264025

背景:衰老是一个不可逆的过程,其特征与基因、饮食和环境有关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTor)作为生长发育的中心调节剂对衰老、运动及不良饮食导致的负面影响具有调节作用,这些作用与mTor及其复合物的... 详细信息

背景:衰老是一个不可逆的过程,其特征与基因、饮食和环境有关。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTor)作为生长发育的中心调节剂对衰老、运动及不良饮食导致的负面影响具有调节作用,这些作用与mTor及其复合物的活性相互关联。然而各因素间的相互联系仍不十分清楚,如mTor、运动对衰老的影响。目的:拟通过研究运动、高脂/高盐饮食和mTor在衰老中的关系,从而对衰老的防治机制有更加全面的认识。方法:①文献资料法,通过在CNKI及Web of Science核心合集数据库中进行检索,围绕“mTor基因(mammalian target of rapamycin/mTor)、运动(exercise)、高脂肪/高盐饮食(high-fat diet/high-salt diet)及衰老(aging)”等关键词进行关键词的组合搜索,对相关文献进行检索、查阅和筛选,为文章提供理论支撑。②对比分析法,通过对所得到的有效文献进行仔细阅读,比较各文献间的差异,为文章论点提供理论基础。③通过对比分析文献间的异同点,明确各指标的定义及关系,从而理清文章思路。结果与结论:mTor与衰老密切相关,通过分析文献,认为mTor的2个复合物mTorC1和mTorC2在衰老、运动和骨骼肌的生长发育中起着重要作用。此外,mTor介导的S6K1、Akt、FOXO和4E-BP1信号通路与运动、高脂饮食、高盐饮食和骨骼肌/心脏衰老密切相关。

关键词：老龄化 mTor 肌肉心脏高脂肪/高盐饮食运动

六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全模型小鼠的分子机制

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中国组织工程研究 2024年第26期28卷 4151-4157页

作者：李晓荣仲佳雯罗玉雪高婷秦岭王雪怡宁夏医科大学总医院宁夏回族自治区银川市750000 宁夏医科大学少数民族医药现代化教育部重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学中医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学生育力保持重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 银川市中医医院宁夏回族自治区银川市750000

背景:在临床上,大多数治疗早发性卵巢功能不全的方剂均以六味地黄丸为基础方演变而来,并且取得了较好的疗效。目前对六味地黄丸的实验研究大多为体内动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究报道较少。目的:探... 详细信息

背景:在临床上,大多数治疗早发性卵巢功能不全的方剂均以六味地黄丸为基础方演变而来,并且取得了较好的疗效。目前对六味地黄丸的实验研究大多为体内动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究报道较少。目的:探讨六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全的分子作用机制。方法:环磷酰胺120 mg/kg联合白消安12 mg/kg腹腔注射制备早发性卵巢功能不全小鼠模型,然后用六味地黄丸混悬液对早发性卵巢功能不全小鼠进行干预,干预12周采用ELISA法检测小鼠血清中促卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗苗勒氏管激素、8-羟脱氧鸟苷、总抗氧化能力、活性氧水平;苏木精-伊红染色观察小鼠卵巢形态学改变;透射电镜观察小鼠卵泡颗粒细胞超微结构及颗粒细胞线粒体的凋亡情况;免疫组化法检测六味地黄丸对小鼠卵巢颗粒细胞中核受体转录辅激活因子(receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1α)、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,TFAM)的表达水平。结果与结论:①与模型组比较,实验组小鼠血清促卵泡刺激素、促黄体生成素、活性氧、8-羟脱氧鸟苷水平降低(P<0.05),雌激素、抗苗勒氏管激素、总抗氧化能力水平升高(P<0.05);②苏木精-伊红染色发现模型组小鼠卵巢组织中闭锁卵泡和黄体较多,个别可见次级卵泡,间质纤维化增生;实验组小鼠卵巢组织可见大量闭锁卵泡,黄体较少,边缘可见原始卵泡,次级卵泡较少,未见明显成熟卵泡;③透射电镜发现实验组小鼠卵巢颗粒细胞内细胞器较完整;④免疫组化结果显示,实验组小鼠卵巢组织PGC-1α的表达水平在第4周稍有升高至第8,12周无明显变化,与模型组有明显差异;实验组小鼠卵巢组织TFAM的表达水平在第4周时短暂升高,然后稍有所下降,但结果均与模型组有明显差异;⑤结果表明,六味地黄丸通过PGC-1α-TFAM-ROS信号通路在一定程度上抑制早发性卵巢功能不全小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,从而改善卵巢的内分泌功能,提高机体抗氧化能力,减轻氧化应激损伤程度。

关键词：六味地黄丸早发性卵巢功能不全转录激活因子线粒体转录因子A 活性氧

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中药抑制间充质干细胞衰老的作用及机制

中国组织工程研究 2024年第7期28卷 1091-1098页

作者：潘小龙樊飞燕应春苗刘飞祥张运克河南中医药大学河南省郑州市450046 河南中医药大学第一附属医院河南省郑州市450046

背景:间充质干细胞的衰老严重影响其临床应用并且是衰老相关疾病发生的主要诱因之一,中药具有良好的抗衰老作用,可抑制间充质干细胞衰老从而促进其在组织工程中的应用并防治衰老相关疾病。目的:综述中药抑制间充质干细胞衰老的作用及机... 详细信息

背景:间充质干细胞的衰老严重影响其临床应用并且是衰老相关疾病发生的主要诱因之一,中药具有良好的抗衰老作用,可抑制间充质干细胞衰老从而促进其在组织工程中的应用并防治衰老相关疾病。目的:综述中药抑制间充质干细胞衰老的作用及机制。方法:检索中国知网和PubMed数据库2012-2022年关于中药抑制间充质干细胞衰老的文献,以“中药,间充质干细胞,衰老”为中文检索词,以“traditional chinese medicines,mesenchymal stem cells(MSCs),aging”为英文检索词,最终共纳入92篇文献进行分析。结果与结论:(1)文章总结了当前间充质干细胞衰老的5个主要机制:包括DNA损伤、端粒缩短、氧化应激、自噬障碍及线粒体功能障碍。(2)文章梳理了衰老间充质干细胞的表型特征,主要包括细胞体积增大、增殖和多向分化能力下降、β-半乳糖苷酶活性增加、p21及p16通路激活等。(3)文章总结了当前中药抑制间充质干细胞衰老的主要机制,包括抑制Wnt通路激活、抑制线粒体活性氧产生、促进沉默信息调节因子2同系物1、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B、腺苷酸活化蛋白激酶及核因子E2相关因子2通路激活、促进端粒酶反转录酶表达等。(4)目前在中药抑制间充质干细胞衰老的研究中以对骨髓间充质干细胞研究最多,效果较好。(5)左归丸、补肾调肝方、白藜芦醇及黄芪等中药均可通过促进衰老间充质干细胞增殖及成骨分化起到防治骨质疏松作用,但对中药通过抑制间充质干细胞衰老改善间充质干细胞旁分泌功能及防治其他衰老相关疾病的机制仍需进一步探究。

关键词：中药间充质干细胞衰老端粒氧化应激自噬线粒体

川芎嗪对脊髓损伤大鼠铁死亡的调控作用及机制

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中国组织工程研究 2024年第26期28卷 4158-4163页

作者：陶经纬周婧雅赵毅任敬佩胡传宇徐林穆晓红范筱北京中医药大学东直门医院北京市100700 青岛市市立医院山东省青岛市266011

背景:研究表明脊髓损伤与铁死亡存在密切联系,而川芎嗪具有调控氧化还原反应的功能。目的:探究川芎嗪对脊髓损伤大鼠铁死亡的调控作用及机制。方法:将36只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及川芎嗪组,每组12只。模型组、川芎嗪组大... 详细信息

背景:研究表明脊髓损伤与铁死亡存在密切联系,而川芎嗪具有调控氧化还原反应的功能。目的:探究川芎嗪对脊髓损伤大鼠铁死亡的调控作用及机制。方法:将36只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及川芎嗪组,每组12只。模型组、川芎嗪组大鼠采用改良Allen’s法建立脊髓损伤模型,造模后分别腹腔注射生理盐水、川芎嗪注射液,1次/d,连续治疗28d;假手术组不建模也不进行治疗。结果与结论:①川芎嗪组治疗14,21,28 d的运动功能BBB评分低于假手术组(P<0.05)、高于模型组(P<0.05);②治疗28 d的苏木精-伊红染色显示,模型组大鼠脊髓组织可见空洞形成,局部见坏死组织及炎性浸润,并伴有纤维组织形成;川芎嗪组大鼠脊髓组织缺损面积较小,炎性浸润及纤维组织形成少于模型组;③治疗28 d的普鲁士蓝染色显示,模型组大鼠脊髓组织内可见大量铁沉积,川芎嗪组大鼠脊髓组织内铁沉积少于模型组;④治疗28 d,与假手术组比较,模型组大鼠脊髓组织内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶水平降低(P<0.05),丙二醛水平升高(P<0.05);与模型组比较,川芎嗪组大鼠脊髓组织内谷胱甘肽、超氧化物歧化酶水平升高(P<0.05),丙二醛水平降低(P<0.05);⑤治疗28d,qRT-PCR与Westernblot检测显示,与假手术组比较,模型组大鼠脊髓组织内谷胱甘肽过氧化物酶4、铁蛋白重链、铁输出蛋白的mRNA与蛋白表达水平均降低(P<0.05);与模型组比较,川芎嗪组大鼠脊髓组织内谷胱甘肽过氧化物酶4、铁蛋白重链、铁输出蛋白的mRNA与蛋白表达水平均升高(P<0.05);⑥治疗28 d的免疫荧光染色显示,假手术组大鼠脊髓组织神经元特异性核蛋白表达最多,模型组大鼠脊髓组织神经元特异性核蛋白表达最少;⑦结果表明,川芎嗪可通过调控铁死亡改善脊髓损伤大鼠的运动功能并起到神经保护作用。

关键词：川芎嗪脊髓损伤铁死亡神经保护作用氧化应激

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Mg-Zn-Ca合金的体外降解行为

中国组织工程研究 2024年第5期28卷 717-723页

作者：兰伟伟于耀东黄棣陈维毅太原理工大学生物医学工程学院纳米生物材料与再生医学研究中心山西省太原市030024 山西浙大新材料与化工研究院山西省太原市030032

背景:鉴于人体复杂的生理环境,目前降解实验中使用的模拟生理体液种类繁多,因此分析Mg-Zn-Ca合金在不同模拟体液中的降解行为具有重要意义。目的:研究Mg-Zn-Ca合金在不同模拟体液中的降解过程和性能变化,明确Ca含量和模拟体液种类对合... 详细信息

背景:鉴于人体复杂的生理环境,目前降解实验中使用的模拟生理体液种类繁多,因此分析Mg-Zn-Ca合金在不同模拟体液中的降解行为具有重要意义。目的:研究Mg-Zn-Ca合金在不同模拟体液中的降解过程和性能变化,明确Ca含量和模拟体液种类对合金的影响。方法:采用熔融挤压成型工艺制备含钙质量分数分别为0.2%,0.5%,1%的Mg-Zn-Ca合金,依次命名为Mg-Zn-0.2Ca、Mg-Zn-0.5Ca、Mg-Zn-1Ca合金,以Mg-Zn合金作为对照。将每种合金分别置于3种模拟体液(生理盐水、PBS和Hank’s液)中,对合金降解过程中的形貌、成分变化、质量损失、pH值及力学性能等进行表征分析。结果与结论:①随着降解时间的延长,4种合金表面生成了大量的纳米级片层和柱状结构,主要成分是MgO和Mg(OH)2,4种合金在生理盐水中的降解速度最快,在Hank’s液中的降解速率最慢,在生理盐水中的降解速率快慢为:Mg-Zn

关键词： Mg-Zn-Ca合金骨缺损体外降解力学性能模拟体液

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类装配体的构建方法及应用

中国组织工程研究 2024年第1期28卷 113-120页

作者：刘春磊姚茜韦正波谢莹广西医科大学生命科学研究院广西壮族自治区南宁市530021 广西医科大学附属肿瘤医院广西壮族自治区南宁市530021 广西区域性高发肿瘤早期防治研究重点实验室广西壮族自治区南宁市530021

背景:近年来,许多研究证实类装配体可弥补类器官无法完全重现细胞与细胞、细胞与基质间的互作关系的缺点,但处于发展初期的类装配体构建方式种类繁多,更无统一标准。目的:综述目前类装配体的构建方法、应用和优缺点,为促进体外细胞模型... 详细信息

背景:近年来,许多研究证实类装配体可弥补类器官无法完全重现细胞与细胞、细胞与基质间的互作关系的缺点,但处于发展初期的类装配体构建方式种类繁多,更无统一标准。目的:综述目前类装配体的构建方法、应用和优缺点,为促进体外细胞模型的发展和完善提供指导。方法:以“assembloids,organoids,tumor microenvironment,organoids AND assemble,organoids AND microenvironment”为英文检索词,以“类装配体、类器官、类组装体、肿瘤微环境、类器官重组、多细胞模型”为中文检索词,检索PubMed、中国知网及万方数据库,在排除无关文章及去重后筛选出94篇文章进行综述。结果与结论:①根据细胞来源的不同,可将类装配体的构建方法分为自体组装、直接组装及混合组装3种;根据细胞培养方式的差异,又可分为悬浮培养法、“基质”培养法、器官芯片培养法和3D生物打印法。②自体组装过程涵盖细胞和组织的发育等早期过程,因此,在器官发育和发育障碍等领域有广阔的前景,而分化成熟细胞的功能相对较完善,由它们直接组装成的类装配体在功能障碍及细胞损伤性疾病的研究中更具潜力;自体组装或在器官移植方面更胜一筹,直接组装将更适用于组织损伤的修复,混合组装综合了前两者的优势,多用于探索微环境中细胞的生理和病理机制以及药物筛选等领域。③虽然不同的类装配体各具优势,但都面临脉管系统不完善的难题;每种类装配体构建方法也存在各自的局限性,如自体组装形成的类装配体中细胞分化程度与体内的差异,直接组装模型的细胞种类固定、无法完全反映复杂的体内微环境等均是亟待解决的难题。④将来随着类装配体培养技术的不断完善,研究者们可以在体外组装出具有更复杂组织结构的仿生类器官,为研究人类组织和器官生理及病理过程提供无限趋近真实的模型。

关键词：类装配体类器官自体组装直接组装混合组装悬浮培养基质培养器官芯片 3D生物打印肿瘤微环境