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人参叶片中人参皂苷含量、关键酶基因表达和生态因子的相关性分析

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华南农业大学学报 2018年第3期39卷 39-47页

作者：杨林林张涛杨利民韩梅吉林农业大学中药材学院吉林长春130118

【目的】明确人参皂苷生物合成的生理生态机制,揭示生态因子和遗传因素与药材质量的关系。【方法】以4年生不同生长时期的人参叶为试验材料,用HPLC法测定人参叶中8种单体人参皂苷(Rg_1、Re、Rf、Rb_1、Rb_2、Rb_3、Rc和Rd)含量;实时荧... 详细信息

【目的】明确人参皂苷生物合成的生理生态机制,揭示生态因子和遗传因素与药材质量的关系。【方法】以4年生不同生长时期的人参叶为试验材料,用HPLC法测定人参叶中8种单体人参皂苷(Rg_1、Re、Rf、Rb_1、Rb_2、Rb_3、Rc和Rd)含量;实时荧光定量PCR法测定7个参与人参皂苷合成的关键酶基因(HMGR、FPS、SS、SE、DS、β-AS和CYP716A47)的表达量;通过相关性和灰色关联度分析生态因子和人参皂苷合成关键酶表达对人参叶中皂苷合成和积累的影响。【结果】7月13日—9月29日人参皂苷合成关键酶基因表达活跃,各个关键酶之间有协同增减的趋势;人参叶中单体皂苷含量最高的是Re和Rg_1,在果后参根生长期(8月31日—9月13日)分别达到最大值60.30和39.38 mg·g^(-1);温度、光合有效辐射、土壤水势、相对湿度与叶中人参皂苷含量显著相关(P<0.05);人参叶中HMGR基因的表达与Rb_2含量显著负相关(P<0.05),SS基因的表达与Rg_1、Re含量显著负相关(P<0.05),β-AS基因的表达分别与Rc、Rb_2含量呈显著(P<0.05)、极显著(P<0.01)负相关;温度、光合有效辐射、土壤水势和相对湿度与人参皂苷含量灰色关联度较高,达到0.727 9~0.871 1。【结论】在生态因子调控下,人参皂苷合成关键酶基因的表达影响人参皂苷的合成与积累。

关键词：人参生态因子人参皂苷基因表达相关性灰色关联度

应用多重PCR技术鉴别3种肾源性中药的实验研究

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中国药学杂志 2022年第12期57卷 1015-1020页

作者：邵博宇杨畅徐宁于文莹迟凯月高丽君夏薇张亚丽艾金霞高锋北华大学医学技术学院吉林吉林132013

目的建立一种应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术鉴别3种肾源性药品的方法。方法提取梅花鹿、驴、犬3个物种肾组织的基因组DNA,通过多重PCR对梅花鹿、驴、犬的特异性片段进行扩增,鉴别样品中是否含有梅花鹿、驴、犬3种动物源性成分。结果... 详细信息

目的建立一种应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术鉴别3种肾源性药品的方法。方法提取梅花鹿、驴、犬3个物种肾组织的基因组DNA,通过多重PCR对梅花鹿、驴、犬的特异性片段进行扩增,鉴别样品中是否含有梅花鹿、驴、犬3种动物源性成分。结果通过对特异性片段的PCR扩增,可同时将梅花鹿、驴、狗的肾与其他物种进行区分。结论本研究建立了一种基于多重PCR技术的快速、准确的同时鉴别梅花鹿、驴、犬3个物种肾源性药品方法,为解决药用性产品易混、难以鉴定的问题提供了又一个新方法。

关键词：多重聚合酶链式反应种属鉴别肾源性中药

黄连总生物碱对结核菌PhoPR双组份系统基因转录水平影响的研究

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中国兽药杂志 2016年第9期50卷 6-10页

作者：曾范利于丹姜园园时坤李健明宗颖赵丹杜锐吉林农业大学中药材学院长春130118 长春市动物疫病预防控制中心长春130061 吉林农业大学农业质量标准与检测技术研究中心长春130118 吉林省梅花鹿生产与产品应用研究室长春130118

为研究黄连总生物碱对结核菌Pho PR双组份系统基因转录水平的影响,对不同药物作用的菌液提取总RNA并进行反转录,根据Gen Bank中H37Rv的Pho P(0757)基因、PhoR(0758)基因和Sig A的基因序列,应用Primer6.0软件设计荧光定量引物并进行荧光... 详细信息

为研究黄连总生物碱对结核菌Pho PR双组份系统基因转录水平的影响,对不同药物作用的菌液提取总RNA并进行反转录,根据Gen Bank中H37Rv的Pho P(0757)基因、PhoR(0758)基因和Sig A的基因序列,应用Primer6.0软件设计荧光定量引物并进行荧光定量PCR分析。结果显示:在高浓度黄连生物碱作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,并且黄连总生物碱与RPF联合作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,表明黄连生物碱是RFP抗菌增效剂。本试验为结核菌抗菌增效作用机制研究奠定了理论基础。

关键词：黄连总生物碱结核菌 Pho PR双组份系统转录水平

鹿胎阳性质控品DNA检测试剂盒的开发与应用

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中国药学杂志 2021年第3期56卷 232-237页

作者：崔琳艾金霞段思琪刘琳李亚茹邵博宇杨畅高丽君孙丽媛李明成苑广信北华大学医学技术学院吉林吉林132013 吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心吉林吉林132013

目的研发鹿胎DNA阳性质控品,组装检测试剂盒。方法提取鹿胎及其伪品DNA,设计通用鹿引物并进行PCR扩增,克隆种属特异性目的片段,构建鹿胎DNA阳性质控品并组装DNA检测试剂盒,进行试剂盒性能实验并应用于市售鹿胎样品检测。结果应用美国国... 详细信息

目的研发鹿胎DNA阳性质控品,组装检测试剂盒。方法提取鹿胎及其伪品DNA,设计通用鹿引物并进行PCR扩增,克隆种属特异性目的片段,构建鹿胎DNA阳性质控品并组装DNA检测试剂盒,进行试剂盒性能实验并应用于市售鹿胎样品检测。结果应用美国国家生物技术信息中心(NCBI)分析测序比对结果,正确率为100%,在526 bp处可见明显条带,与目的片段相符,可作为鹿胎阳性质控品。阳性质控品灵敏性最低检测限为10 ng·μL-1,经多次反复冻融的试剂盒,仍可确保PCR检测结果的稳定性。试剂盒应用于对市售鹿胎及伪品的检测,PCR检测结果与预期相符。结论构建鹿胎阳性质控品作为电泳分析时的阳性对照,结果更加准确稳定,适用于对鹿胎及伪品的快速鉴定,保障对鹿胎质量的有效监管。

关键词：鹿胎阳性质控品 DNA检测试剂盒分子生物学鉴别真伪

黄芩葡萄糖醛酸水解酶基因的克隆、生物信息学分析及表达

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中国中药杂志 2015年第22期40卷 4370-4377页

作者：郭双双程林杨利民韩梅吉林农业大学中药材学院吉林长春130118

该文从黄芩叶中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了葡萄糖醛酸水解酶基因(sbGUS)的全长(Gene Bank登录号KR364726)。该基因全长1584 bp,含有1个完整的开放阅读框,编码527个氨基酸,为不稳定亲水蛋白。生物信息学分析结果显示sbGUS编码蛋白... 详细信息

该文从黄芩叶中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了葡萄糖醛酸水解酶基因(sbGUS)的全长(Gene Bank登录号KR364726)。该基因全长1584 bp,含有1个完整的开放阅读框,编码527个氨基酸,为不稳定亲水蛋白。生物信息学分析结果显示sbGUS编码蛋白分子质量为58.724 8 kDa,等电点pI5.55,含有信号肽和1个跨膜区,具有1个水解酶超级家族结构域1个未整合的转移糖苷酶催化结构域。二级结构中α-螺旋(Alpha helix)占25.62%,延伸链(extended strand)占28.84%,β-转角(Beta turm)占13.28%,无规卷曲(random coil)占32.26%。序列比对和系统进化分析表明,sbGUS基因与黄芩(BAA97804.1)核苷酸相似性为98.93%、氨基酸相似性为98.29%,在9个位置氨基酸不同。实时荧光定量PCR检测sbGUS在根中表达丰度最高,其次为花和茎,在叶中表达量最低。这为进一步鉴定sbGUS的功能及开展黄芩素的合成生物学研究奠定基础。

关键词：葡萄糖醛酸水解酶生物信息学分析黄芩素克隆

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菌糠的营养及其在家畜饲料中的应用

家畜生态学报 2019年第1期40卷 69-73页

作者：袁崇善张爱武吉林农业大学中药材学院吉林长春130118

对菌糠的营养价值及其影响因素、在家畜饲料中的应用情况及菌糠在饲喂时应注意的事项予以综述,以期充分利用菌糠这一饲料资源,使饲料来源更加多元化,为菌糠科学利用提供理论依据。

关键词：菌糠营养家畜

复方嗜酸乳杆菌片对便秘的治疗作用及对肠道菌群的影响

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第三军医大学学报 2020年第20期42卷 2031-2038页

作者：周凯旋鲍慧玮朱志杰李丽静长春中医药大学药学院长春130117 通化金马药业集团股份有限公司研发部吉林通化134003

目的通过动物实验和细菌16S rRNA基因高通量测序,研究复方嗜酸乳杆菌片对便秘的治疗作用和对肠道菌群的影响。方法采用复方地芬诺酯片对小鼠进行便秘造模,给予复方嗜酸乳杆菌片治疗,阳性对照药为酚酞片,测量小鼠的小肠运动能力和粪便含... 详细信息

目的通过动物实验和细菌16S rRNA基因高通量测序,研究复方嗜酸乳杆菌片对便秘的治疗作用和对肠道菌群的影响。方法采用复方地芬诺酯片对小鼠进行便秘造模,给予复方嗜酸乳杆菌片治疗,阳性对照药为酚酞片,测量小鼠的小肠运动能力和粪便含水量,进行病理切片,观察结肠病理变化,使用16s rRNA基因测序研究药物对肠道菌群的影响。结果小肠运动情况表明:复方嗜酸乳杆菌片和酚酞能明显提升便秘小鼠的碳墨推进率和粪便含水量;结肠病理切片表明:模型组结肠损伤严重,给药各组有不同程度改善;16S rRNA测序结果显示:便秘模型动物物种丰富度相较于正常组增多,在门水平上,拟杆菌门和厚壁菌门发生显著性变化,在属水平上,有7个属发生显著性变化,复方嗜酸乳杆菌片对肠道菌群失调有所改善,而酚酞片对肠道菌群几乎无调节作用。结论复方嗜酸乳杆菌片对便秘具有治疗作用,并对肠道菌群具有调节作用。

关键词：便秘复方嗜酸乳杆菌片酚酞片肠道菌群高通量测序

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拉曼光谱联合ICP-AES法鉴定鹿茸真伪

中成药 2020年第2期42卷 523-527页

作者：冯源高丽君韩笑苑广信孙晶波北华大学药学院吉林吉林132013 北华大学医学技术学院吉林吉林132013

目的利用拉曼光谱联合电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP⁃AES)法鉴定鹿茸的真伪。方法激光拉曼光谱仪采集鹿茸样品拉曼光谱,进一步运用表面增强技术处理并采集样品拉曼光谱数据;运用独立样本t检验结合Fisher识别法建立判别鹿茸真伪的识... 详细信息

目的利用拉曼光谱联合电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP⁃AES)法鉴定鹿茸的真伪。方法激光拉曼光谱仪采集鹿茸样品拉曼光谱,进一步运用表面增强技术处理并采集样品拉曼光谱数据;运用独立样本t检验结合Fisher识别法建立判别鹿茸真伪的识别函数;采用ICP⁃AES测定鹿茸中11种微量元素的含有量。结果正品鹿茸的主要拉曼特征峰有9个出现在155、227、723、959、999、1094、1322、1460、2918 cm-1位移处,且除2918 cm-1外的拉曼振动峰强度均显著强于伪品鹿茸(P<0.05)。正品鹿茸中Na元素含有量为1000≤Na≤1500 mg/kg,K元素含有量为K≥500 mg/kg;而伪品中Na元素含有量为Na<1000 mg/kg,K<500 mg/kg。结论该方法稳定、准确,鉴别速度快,可用于鹿茸产品的真伪鉴定。

关键词：鹿茸拉曼光谱法电感偶合等离子体原子发射光谱

鹿角脱盘及其5种提取部位21种氨基酸含量对比分析

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药物分析杂志 2017年第10期37卷 1851-1857页

作者：陈思郜玉钢臧埔王璐宋胜男赵岩祝洪艳张连学吉林农业大学中药材学院长春130118 吉林省人参工程技术研究中心长春130118

目的:建立RP-HPLC法同时检测鹿角脱盘及其提取部位中21种水解氨基酸含量,分析鹿角脱盘5种提取部位氨基酸含量和组成。方法:采用RP-HPLC法,异硫氰酸苯酯(PITC)作为衍生剂,乙腈-水(4∶1)为流动相A,0.1 mol·L^(-1)乙酸钠溶液(乙酸调pH 6.... 详细信息

目的:建立RP-HPLC法同时检测鹿角脱盘及其提取部位中21种水解氨基酸含量,分析鹿角脱盘5种提取部位氨基酸含量和组成。方法:采用RP-HPLC法,异硫氰酸苯酯(PITC)作为衍生剂,乙腈-水(4∶1)为流动相A,0.1 mol·L^(-1)乙酸钠溶液(乙酸调pH 6.5)-乙腈(97∶3)为流动相B,检测波长254 nm,流速1 mL·min^(-1),柱温36℃,以梯度洗脱的方法(0 min,100%B;11 min,98.5%B;21.7 min,92.4%B;23.9 min,89%B;27 min,86.6%B;39 min,70%B;42 min,30%B;45 min,0%B;52 min,0%B;55 min,100%B;70 min,100%B)检测鹿角脱盘及其5种提取部位中水解氨基酸含量。结果:21种氨基酸质量浓度在0.001 9~2.700 0μmol·mL^(-1)范围内线性关系良好,R2均>0.992 0,水解氨基酸的加样回收率在93.2%~102.8%,RSD在0.65%~2.6%之间;5种提取部位的氨基酸含量均显著高于鹿角脱盘粉(P0.05);药用氨基酸的比例达60%以上;鹿角脱盘碱提取部位中必需氨基酸与总氨基酸的含量比值和必需氨基酸与非必需氨基酸的含量比值为各组最高。结论:本方法适合鹿角脱盘及其提取部位水解氨基酸含量的测定;5种提取部位较鹿角脱盘有更高的医学和营养学价值。

关键词：鹿角脱盘不同提取部位氨基酸异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱含量测定