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磁珠快速提取乙型肝炎病毒DNA方法的建立及其应用研究

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中华检验医学杂志 2012年第9期35卷 843-850页

作者：陆佳飞周科隆王缦华东理工大学生物工程学院上海200237 上海科华生物工程股份有限公司

目的建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度血液HBV DNA提取方法（以下简称磁珠法），为用于临床自动化定量检测的核酸诊断试剂研发提供技术支持。方法用科华生物公司内部5份HBV强阳性血清标本，先通过磁珠的磁性、悬浮性、HBV DNA提... 详细信息

目的建立一种基于磁珠法的快捷、简便、高纯度血液HBV DNA提取方法（以下简称磁珠法），为用于临床自动化定量检测的核酸诊断试剂研发提供技术支持。方法用科华生物公司内部5份HBV强阳性血清标本，先通过磁珠的磁性、悬浮性、HBV DNA提取效果等对4种磁珠（A～D磁珠）进行筛选，并对磁珠用量（1～1．75μL／m1）、裂解液pH值（4～9）、洗涤液中是否加入乙醇和洗脱液带磁珠扩增等条件进行系统优化；并对建立的磁珠法线性范围、精密度、灵敏度、抗污染和抗干扰能力等技术性能进行评价。然后，分别用磁珠法与国内成熟的煮沸法定量检测100份HBV血清标本，用磁珠法与国际“金标准”Roche COBAS TaqManTest（以下简称Roche法）定量检测50份HBV血清标本，并比较分析3种方法的相关性。结果通过实验条件优选试验确定超顺磁A磁珠在物理性能和DNA提取效果都优于其他3种磁珠，磁珠最佳使用量为1．25μl／ml，裂解液最佳pH值为7—8，洗涤液中可去除乙醇成分，并可直接带磁珠进行扩增反应。通过平行检测5份公司内部HBV强阳性血清标本以及梯度稀释的血清标本确定磁珠法的线性范围为4×101～4×108 IU／ml，煮沸法为4×102-4×108 IU／ml；磁珠法检测灵敏度为30IU／ml，高于煮沸法（100IU／ml）；在低浓度HBV血清标本检测中，磁珠法的精密度（CV为6．0％）优于煮沸法（CV为11．9％）；磁珠法检测的假阳性率为0，而煮沸法假阳性率为3．1％，磁珠法抗污染能力优于煮沸法；煮沸法在标本中肝素钠含量达到62．5U／ml时，检出血清中HBV DNA含量明显下降，当肝素钠达1000U／ml时，无法检出HBV DNA，而肝素钠对磁珠法几乎无影响。同时，磁珠法和煮沸法平行检测100份临床HBV血清标本，磁珠法的阳性率（86％）高于煮沸法（74％），且2种方法的相关性较好（R2=0．948，P〈0．05）；磁珠法和Roche法平行检测50份临床HBV血清标本，磁珠法检出阳性率[95％（49／50）]与Roche法[100％（50／50）]接近，2种方法间有显著相关性（R2=0．963，P〈0．05）。结论建立的磁珠法定量检测HBV DNA的得率高，具有较宽的检测范围、定量准确、操作简单，可作为实验室首选的核酸提取方法用于临床乙型肝炎诊断。

关键词：肝炎病毒乙型 DNA 病毒磁力学

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信息管理系统在传染病学本科教学中的实践

基础医学教育 2014年第7期16卷 565-567页

作者：刘静刘秀红孙国平李宁首都医科大学附属北京佑安医院肝胆外科暨肝移植中心北京100069

在传染病学本科教学中新增设信息管理系统课程是培养医学生形成慢性肝病管理理念,并在医疗实践中应用信息化管理提高慢性肝病的管理诊治水平。通过调整教学目标、教授重点难点内容、改进教学方法等使学生掌握慢性肝病信息管理系统。慢... 详细信息

在传染病学本科教学中新增设信息管理系统课程是培养医学生形成慢性肝病管理理念,并在医疗实践中应用信息化管理提高慢性肝病的管理诊治水平。通过调整教学目标、教授重点难点内容、改进教学方法等使学生掌握慢性肝病信息管理系统。慢性肝病信息管理系统从基础知识、基本技能和整体素质等方面全面有力培养了学生的人文素养、创新意识与科研能力。

关键词：传染病学信息管理系统本科教育

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌Spa和SCCmec分型研究

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重庆医学 2015年第34期44卷 4821-4824页

作者：李艳萌赵瑞珂黄宝丽张险峰韩清珍顾国浩陈泽良史进方徐杰苏州大学附属第一医院检验科江苏苏州215006 军事医学科学院疾病预防控制所传染病控制中心北京100071

目的对医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)A蛋白(Spa)和葡萄球菌mec基因盒(SCCmec)分型同源性研究,为预防和控制医院感染提供依据。方法采用药敏纸片法(K-B法)、SCCmec分型及Spa分型技术,收集自2013年8月至2014年4月80株HA-MR... 详细信息

目的对医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)A蛋白(Spa)和葡萄球菌mec基因盒(SCCmec)分型同源性研究,为预防和控制医院感染提供依据。方法采用药敏纸片法(K-B法)、SCCmec分型及Spa分型技术,收集自2013年8月至2014年4月80株HA-MRSA,进行药敏试验和同源性分析,并检测毒力基因杀白细胞毒素(pvl)基因和毒性休克综合征(tsst)基因。结果药敏结果显示,80株HA-MRSA对青霉素、氨苄西林/舒巴坦、亚胺培南均耐药,对环丙沙星耐药率为90.0%,对克林霉素耐药率为58.8%,对复方磺胺类耐药率为13.8%,对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁均敏感。SCCmec分型结果显示,80株MRSA中SCCmecⅡ型占73.75%、SCCmecⅢ型(13.75%)、SCCmecⅤ型(12.5%)。Spa分型,28株为t2460型(35%)、9株为t002型(11%)、6株为t030型(8%)、7株为t632型(9%)、5株为t037型(6%),其他Spa型相对分散。pvl基因阳性率为7.5%(6株),tsst基因为阴性。结论 HA-MRSA SCCmec分型以Ⅱ为主,Spa分型以t2460型为主,有较高的同源性;HA-MRSA对多种药物具有较高的耐药性并且存在多重耐药。

关键词：交叉感染葡萄球菌,金黄色 SCCmec分型 Spa分型耐药性

基于TPI基因的城市污水中蓝氏贾第鞭毛虫的分子鉴定

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中国病原生物学杂志 2012年第5期7卷 347-348,379页

作者：张唯哲凌虹张晓丽李懿宏姬红杨凤坤沈玉娟刘爱芹哈尔滨医科大学寄生虫学教研室黑龙江哈尔滨150081 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的对哈尔滨市污水处理厂原水中的蓝氏贾第鞭毛虫进行分子鉴定。方法收集哈尔滨市污水处理厂原水样,提取基因组DNA,巢式PCR扩增蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,通过序列分析确定蓝氏贾第鞭毛虫的集聚体类型和亚型,并进行同源性分析。结果从哈... 详细信息

目的对哈尔滨市污水处理厂原水中的蓝氏贾第鞭毛虫进行分子鉴定。方法收集哈尔滨市污水处理厂原水样,提取基因组DNA,巢式PCR扩增蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,通过序列分析确定蓝氏贾第鞭毛虫的集聚体类型和亚型,并进行同源性分析。结果从哈尔滨市污水处理厂原水DNA提取物中扩增出蓝氏贾第鞭毛虫TPI基因,经分子鉴定为蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII,其序列与文献报道人源蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII序列(AB516351,FJ560570,EF688021)的同源性为100%。结论哈尔滨市污水处理厂原水中存在蓝氏贾第鞭毛虫集聚体AII,威胁当地居民健康。

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫集聚体污水 TPI基因分子鉴定

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氧化应激在肝纤维化中的作用及治疗对策

世界华人消化杂志 2013年第17期21卷 1573-1578页

作者：李俊峰郑素军段钟平兰州大学第一医院甘肃省兰州市730000 首都医科大学附属北京佑安医院人工肝中心北京市100069

多种因素可以导致肝脏发生慢性炎性病变,进而可导致肝纤维化的发生,其中的关键是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化.活化的HSC发生形态和功能上的变化,促进肝纤维化的发展.肝内氧化应激损伤作为重要机制之一,参与到了HSC活... 详细信息

多种因素可以导致肝脏发生慢性炎性病变,进而可导致肝纤维化的发生,其中的关键是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化.活化的HSC发生形态和功能上的变化,促进肝纤维化的发展.肝内氧化应激损伤作为重要机制之一,参与到了HSC活化和肝内胶原成分的沉积,与肝纤维化之间有密切的关系.而针对降低氧化应激水平的治疗手段也逐渐应用于临床,发挥抗肝纤维化的作用.鉴于此,本文从近几年氧化应激与肝纤维化研究和治疗对策出发,介绍该领域研究进展.

关键词：肝纤维化肝星状细胞氧化应激策略

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上海市91所医院注射器具及药液共用调查

中华医院感染学杂志 2016年第11期26卷 2617-2619页

作者：高晓东胡必杰崔扬文孙伟沈燕复旦大学附属中山医院感染管理科上海200032

目的通过问卷调查及现场核查了解上海市医院注射器具和药液共用情况,以加强医院注射器具和药液的管理。方法于2015年11月设计调查问卷下发上海市级质量控制中心覆盖的91所二级以上甲等综合医院医院感染管理科,由专职人员采用问卷调查和... 详细信息

目的通过问卷调查及现场核查了解上海市医院注射器具和药液共用情况,以加强医院注射器具和药液的管理。方法于2015年11月设计调查问卷下发上海市级质量控制中心覆盖的91所二级以上甲等综合医院医院感染管理科,由专职人员采用问卷调查和现场督查方法,调查2015年7月1日-9月30日各所医院的介入手术室、心导管室、CT室、内镜中心、手术室、人流室、门诊注射室、重症监护病房、内分泌科、感染性疾病科等856个科室注射器具及药液共用情况;将数据上报信息系统,组织市级专家现场督查并核实调查表的准确性;所有数据采用SPSS 21.0软件进行统计分析。结果对91所医院下发调查问卷,回收91份,回收率100.0%,共调查91所医院856个科室;病区内的操作例如皮内试验、胰岛素注射、冲封管、血气分析的注射器具共用率较少,仅为0.5%,但注射药液共用率例较高,为25.0%;造影剂、麻醉注射、肉毒杆菌的注射药液和注射器具共用率分别为14.0%和11.2%。结论上海市目前注射器具及药液存在不同程度的共用现象,皮内试验、胰岛素、冲封液、造影剂药液共用和造影剂注射器具共用率例较高,亟待加强管理。

关键词：注射药液注射器具共用胰岛素冲管液造影剂

2019-2020年冬春季武汉儿童医院收治流感和新型冠状病毒肺炎患儿的流行病学特点

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中华医院感染学杂志 2020年第15期30卷 2241-2246页

作者：唐锋罗万军王筱雯刘为勇侯红艳陈中举熊燕陈智刘洁王芳赵滢华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)检验部湖北武汉430016 华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)医院感染管理办公室湖北武汉430016 华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院(武汉市妇幼保健院)肾内科湖北武汉430016 华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科湖北武汉430030 武汉市疾病预防控制中心病原生物检验所微检科湖北武汉430015

目的对2019-2020年冬春季节武汉儿童医院收治流感病毒和新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV-2)感染患儿的流行病学发病特征进行统计分析,为科学防控及高效决策提供依据。方法以武汉儿童医院冬春季(2... 详细信息

目的对2019-2020年冬春季节武汉儿童医院收治流感病毒和新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV-2)感染患儿的流行病学发病特征进行统计分析,为科学防控及高效决策提供依据。方法以武汉儿童医院冬春季(2019年11月1日-2020年2月29日)收治诊疗的流感样、流感确诊、新冠样和新冠确诊病例为研究对象,对年龄、性别、确诊日期、地区的病例数及比例进行统计分析。结果在统计期内,流感样病例报告共44038例,男生总发病例数高于女生,各年龄段不同性别间的流感样患儿发病例数差异具有统计学意义(χ^2=40.990,P传染防控。

关键词：流感病毒新型冠状病毒儿童感染流行病学趋势

结核分枝杆菌Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4重组基因克隆及表达

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中国病原生物学杂志 2010年第6期5卷 414-417页

作者：吴玉敏谭继英王革刘万波胡丽娜祝秉东兰州大学结核病研究中心甘肃兰州730000 兰州大学基础医学院免疫学研究所兰州生物制品研究所兰州大学基础医学院病原生物学研究所

目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌去标签重组蛋白Mtb8.4-Hspx(MH)和Hspx-Mtb8.4(HM)原核表达载体,并在大肠埃希菌株BL21(DE3)中表达。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增Mtb8.4、Hspx基因,产物经纯化后与载体PET30a连接、转化及测序鉴定,构建原核重组表达质粒PET30a-Mtb8.4和PET30a-Hspx。抽提重组质粒,产物经纯化后与目的基因Hspx、Mtb8.4连接,转化及测序鉴定,构建重组目的基因质粒PET30a-Mtb8.4-Hspx(PET30a-MH)和PET30a-Hspx-Mtb8.4(PET30a-HM)载体,转化大肠埃希菌BL21,以IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测表达产物。结果 SDS-PAGE蛋白电泳验证去标签MH和HM融合蛋白分子质量单位为28 ku,与预期值相符。结论本研究成功表达去标签结核杆菌重组蛋白MH和HM,为结核亚单位疫苗免疫原性和临床前研究奠定了基础。

关键词：分枝杆菌,结核 Mtb8.4 Hspx 克隆表达

肝衰竭人工肝术后深静脉血栓形成的调查及影响因素分析

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中国实用护理杂志 2018年第9期34卷 661-665页

作者：叶云姜林仙郭琴芳谭友文江苏大学附属镇江三院肝病科 212003

目的了解肝衰竭人工肝术后深静脉血栓发生率并分析影响因素。方法采用回顾性调查江苏大学附属镇江三院肝病科2014年1月至2016年12月的进行过人工肝治疗肝衰竭连续住院患者，采集患者资料，包括一般人口资料、病史资料。结果采集到人工... 详细信息

目的了解肝衰竭人工肝术后深静脉血栓发生率并分析影响因素。方法采用回顾性调查江苏大学附属镇江三院肝病科2014年1月至2016年12月的进行过人工肝治疗肝衰竭连续住院患者，采集患者资料，包括一般人口资料、病史资料。结果采集到人工肝治疗的肝衰竭患者共189例，其中下肢深静脉血栓11例，无深静脉血栓178例，深静脉血栓发生率为5.82%（11/189）。血栓组和无血栓组在年龄（χ2=7.17，P=0.027）、置管方式（χ2=4.99，P=0.025）、置管成功次数（χ2=10.856，P=0.004）、人工肝次数（χ2=67.481，P〈0.01）、活动状态（χ2=9.607，P=0.022）、D-二聚体（t=12.318，P〈0.01）、感染（χ2=17.231，P=0.001）等因素上有显著差异性。二分类Logistic回归显示，年龄（OR=1.643，P=0.01）、置管成功次数（OR=1.667，P=0.005）、活动状态（OR=6.049，P〈0.01）、D-二聚体（OR=2.532，P=0.005）、感染（OR=2.463，P=0.008）是血栓形成的独立危险因素。结论肝衰竭人工肝术后深静脉血栓并不少见，加强人工肝术后预防深静脉血栓形成的护理，尤其对高龄、置管穿刺次数较多者、绝对卧床、D-二聚体增高及感染患者需针对性加强护理。

关键词：肝功能衰竭急性肝人工静脉血栓形成影响因素