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肝配蛋白B2在牙龈卟啉单胞菌诱导单核细胞黏附人脐静脉内皮细胞中的作用

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中华口腔医学杂志 2014年第10期49卷 614-618页

作者：张彩霞宋洁徐杨吴娟孙卫斌李宽钰南京大学医学院细胞生物学与遗传学教研室·江苏省医学分子技术重点实验室 210093

目的检测肝配蛋白B2 （erythropoietin producing hepatomocellular receptor interacting protein B2,Ephrin B2）及其受体在单核细胞THP-1黏附人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）中的作用,揭示牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）感染增强THP-1黏附HUVEC的分子机制.方法应用厌氧罐培养Pg,以感染复数1∶100感染人单核细胞株THP-1,感染8和24 h后,收集部分样品分别用于检测THP-1细胞Ephrin B2及其受体表达水平的变化;其余样品与转染空载体或过表达Ephrin B2的HUVEC细胞共培养,用实时荧光定量和蛋白质印迹法检测HUVEC细胞Ephrin B2的表达水平,并观察Ephrin B2对THP-1与HUVEC黏附的影响.结果 Pg感染24 h后,THP-1细胞Ephrin B2受体EphB3、EphB4和EphA4的mRNA表达水平分别提高至5.169±0.152、11.040± 1.195和4.976±0.122,与未感染对照组（结果数据为1）相比差异均有统计学意义（P＜0.01）;与经Pg感染的THP-1共培养后,HUVEC细胞Ephrin B2的表达提高至8.938±0.962,与未感染对照组相比差异均有统计学意义（P=0.008）;不经过感染,HUVEC直接过表达Ephrin B2后,THP-1对HUVEC黏附性显著增加.结论感染Pg的THP-1黏附HUVEC的数量增多与Ephrin B2及其受体的相互作用有关,提示动脉血管内皮细胞特异性表达的Ephrin B2分子参与动脉粥样硬化的发生.

关键词：紫单胞菌龈单核细胞内皮细胞促红细胞生成素产生的肝细胞受体-肝配蛋白B2

牙龈卟啉单胞菌感染对单核细胞与人脐静脉内皮细胞黏附的影响

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中华口腔医学杂志 2014年第3期49卷 151-154页

作者：张彩霞宋洁黎景景高鑫孙卫斌李宽钰南京大学医学院细胞生物学和遗传学教研室·江苏省医学分子技术重点实验室 210093

目的观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gigivalis,Pg）感染单核细胞后是否增加单核细胞对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）的黏附并探讨其分子机制,为从牙周病的角度预防动脉粥样硬化的发生提供新... 详细信息

目的观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gigivalis,Pg）感染单核细胞后是否增加单核细胞对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）的黏附并探讨其分子机制,为从牙周病的角度预防动脉粥样硬化的发生提供新的研究思路.方法应用厌氧罐培养Pg,以感染复数为1∶100感染人单核细胞株THP-1.感染0（对照组）、8和24h后与HUVEC共培养1h,去除未黏附的THP-1后观察THP-1对HUVEC的黏附,再培养23 h后用酶联免疫吸附测定法检测相应细胞因子的表达及黏附分子的变化.结果 Pg感染24h后,THP-1对HUVEC的黏附较对照组提高了13.8％～35.2％（P =0.006）;细胞间黏附分子1的表达量[（164.9±9.1） ng/L]显著高于对照组[（132.5±7.7） ng/L] （P =0.005）;单核细胞趋化蛋白1的分泌量[（221.0±4.9）ng/L]显著高于对照组[（183.2±3.1）ng/L]（P=0.012）;细胞分泌白细胞介素8的量[（787.2±10.3） ng/L]亦显著高于对照组[（587.2±5.1）ng/L] （P=0.002）.结论 Pg感染促进单核细胞与HUVEC的黏附;Pg感染可能是动脉粥样硬化发生的危险因素.

关键词：紫单胞菌,龈单核细胞内皮细胞细胞粘附分子

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酶法测定人尿中L-瓜氨酸含量

分析化学 2006年第3期34卷 379-381页

作者：李加友曹瑜刘茜焦庆才南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室南京210093

L-瓜氨酸是人体多种疾病的重要检测指标。利用鸟氨酸甲氨酰转移酶和氨甲酰激酶对L-瓜氨酸的专一性作用,建立了一种准确、简便、灵敏的L-瓜氨酸含量酶法测定方法。较为适宜的酶转化条件是:30℃;5℃,pH6;。固定化酶有较高的稳定性,4℃保存... 详细信息

L-瓜氨酸是人体多种疾病的重要检测指标。利用鸟氨酸甲氨酰转移酶和氨甲酰激酶对L-瓜氨酸的专一性作用,建立了一种准确、简便、灵敏的L-瓜氨酸含量酶法测定方法。较为适宜的酶转化条件是:30℃;5℃,pH6;。固定化酶有较高的稳定性,4℃保存60d后酶活回收率仍高达95%。该方法测定L-瓜氨酸的线性范围为2;0mg/L;工作曲线回归系数r=0.9987;样品回收率达99%以上。

关键词： L-瓜氨酸酶法氨

白蚁巢拮抗放线菌BYC01代谢产物的分离和鉴定

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微生物学报 2014年第7期54卷 754-759页

作者：卢贻会李帅周端顼张应烙浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 南京大学药生物技术国家重点实验室江苏南京210093

【目的】从白蚁巢中分离出具有抗菌活性的放线菌,并在其代谢产物中寻找具有抗菌活性的先导化合物。【方法】通过形态学观察和16S rRNA序列分析初步确定目标菌株BYC 01的分类地位。利用生长速率法和琼脂扩散法测定其代谢产物的抗菌活性... 详细信息

【目的】从白蚁巢中分离出具有抗菌活性的放线菌,并在其代谢产物中寻找具有抗菌活性的先导化合物。【方法】通过形态学观察和16S rRNA序列分析初步确定目标菌株BYC 01的分类地位。利用生长速率法和琼脂扩散法测定其代谢产物的抗菌活性。并通过大量发酵提取浸膏,运用多种色谱方法对发酵产物进行分离、纯化,利用质谱和核磁共振谱分析鉴定出化合物的结构。【结果】通过形态学观察和16S rRNA序列分析,菌株BYC 01被鉴定为紫红链霉菌(Streptomyces violaceoruber)。BYC 01发酵液不同极性溶剂萃取物的抗菌活性结果表明其有效抑菌物质主要存在于中等极性的乙酸乙酯部位。在供试浓度为100μg/mL时,BYC 01发酵液乙酸乙酯萃取物对苹果树腐烂病菌具有强烈的抑制作用,抑制率大于90%;对水稻纹枯病菌和杨树溃疡病菌具有较好抑制活性,抑制率均大于60%;在供试浓度为30μg/滤纸片时,与阳性对照相比,乙酸乙酯提取物对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和水稻白叶枯病菌有中等的抑制作用,其抑菌圈直径范围为11.3 mm-16.5 mm。经质谱和核磁共振谱分析,从BYC 01发酵产物中分离到的单体化合物被鉴定为fogacin;在供试浓度为30μg/滤纸片时,化合物fogacin对白色念珠菌生长的抑制作用与阳性对照两性霉素相当,其抑菌圈大小分别为19.3 mm和20.1 mm。【结论】菌株BYC 01具有开发为微生物杀菌剂的潜力。

关键词：白蚁巢放线菌代谢产物抗菌活性

马蜂肠道菌抑制反枝苋的活性筛选及菌株MF06的活性代谢产物

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微生物学报 2015年第3期55卷 292-298页

作者：张蕴邵明伟张应烙李帅卢贻会肖孝辉浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 南京大学医药生物技术国家重点实验室江苏南京210093

【目的】研究马蜂肠道真菌对反枝苋的抑制活性,为开发微生物源除草剂奠定基础。【方法】通过测试11种肠道真菌发酵液对反枝苋根生长的抑制效果筛选出活性菌株MF06。通过形态学观察和分子生物学鉴定确定MF06的分类地位。通过硅胶柱层析... 详细信息

【目的】研究马蜂肠道真菌对反枝苋的抑制活性,为开发微生物源除草剂奠定基础。【方法】通过测试11种肠道真菌发酵液对反枝苋根生长的抑制效果筛选出活性菌株MF06。通过形态学观察和分子生物学鉴定确定MF06的分类地位。通过硅胶柱层析法、薄层层析法、葡聚糖凝胶柱层析法对乙酸乙酯粗提物进行分离、纯化,得到代谢产物1,研究代谢产物1对反枝苋根生长的抑制作用。利用核磁共振谱和质谱确定代谢产物1的化学结构。【结果】经形态学观察和ITS序列分析确定MF06菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。当供试质量浓度为100μg/mL时,该菌株发酵液的乙酸乙酯提取物对反枝苋根生长的抑制率大于68%。从乙酸乙酯粗提物中分离得到代谢产物1,经过结构鉴定为镰刀菌酸与9,10-脱氢镰刀菌酸以1:1比例形成的混合物。活性测试表明代谢产物1对反枝苋根生长具有很强的抑制作用,抑制活性的IC50值为(0.51±0.18)μg/mL,与阳性对照药2,4-二氯苯氧乙酸的活性[IC50值为(0.30±0.14)μg/mL]相当。【结论】MF06菌株具有开发为微生物源除草剂的潜力。

关键词：马蜂肠道菌反枝苋尖孢镰刀菌除草活性

中国少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutillans)的毒腺结构

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中国细胞生物学学报 2012年第2期34卷 162-167页

作者：华卫建徐国华周祀乔华子春江苏教育学院生物系南京210013 南京大学医药生物技术国家重点实验室南京210093 南京大学医学院附属鼓楼医院病理科南京210008

用免疫组化和光镜、透射电镜等观察了中国少棘蜈蚣毒腺的结构。结果显示,纵贯颚肢的弯月形毒腺为单管泡状腺,主要由柱状分泌细胞和介于其间的纤细表皮细胞组成。被肌肉束环绕的分泌细胞辐射状排列于几丁质的毒液导管外,其纤细的颈部由... 详细信息

用免疫组化和光镜、透射电镜等观察了中国少棘蜈蚣毒腺的结构。结果显示,纵贯颚肢的弯月形毒腺为单管泡状腺,主要由柱状分泌细胞和介于其间的纤细表皮细胞组成。被肌肉束环绕的分泌细胞辐射状排列于几丁质的毒液导管外,其纤细的颈部由环状括约肌控制,分泌端以折叠回转的单向瓣膜经导管壁上的孔道直接伸入管腔,膨大的盲端直达毒腺底膜。高电子密度的分泌溶酶体向分泌口汇集时电子密度逐渐降低并降解为分泌小泡,其中的杆状结晶样毒蛋白也经无定型状态逐渐分散,经胞吐作用进入管腔并进一步疏散和均质化。免疫组化显示,分泌细胞颈部密集的分泌颗粒的主要成分为毒蛋白,毒蛋白在分泌细胞中呈明显的向心式梯度增强型分布。根据上述观察,提出了蜈蚣毒液以分泌溶酶体介导的非经典途径分泌的观点。

关键词：少棘蜈蚣毒腺显微结构超微结构免疫组化分泌溶酶体

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酶法转化液中L-瓜氨酸的分光光度法测定

分析试验室 2005年第12期24卷 8-10页

作者：李加友曹瑜焦庆才南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室南京210093

根据L-瓜氨酸在强酸性溶液中与二乙酰一肟的专一性显色反应及反应复合物在490 nm处吸光度与L-瓜氨酸浓度呈线性关系的特点,通过考察酶转化液中转化底物L-精氨酸、副产物L-鸟氨酸、增效剂、磷酸盐缓冲溶液、细胞自溶释放物以及显色剂用... 详细信息

根据L-瓜氨酸在强酸性溶液中与二乙酰一肟的专一性显色反应及反应复合物在490 nm处吸光度与L-瓜氨酸浓度呈线性关系的特点,通过考察酶转化液中转化底物L-精氨酸、副产物L-鸟氨酸、增效剂、磷酸盐缓冲溶液、细胞自溶释放物以及显色剂用量、显色反应时间等条件对L-瓜氨酸测定的影响,建立了一种准确、简便、灵敏的L-精氨酸酶法转化液中L-瓜氨酸的光度分析方法。该方法的相关系数r=0.999,样品回收率达99.58%。

关键词： L-瓜氨酸 L-精氨酸二乙酰一肟分光光度法

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白念珠菌烯醇化酶的抗原特异性研究

中华皮肤科杂志 2001年第5期34卷 340-342页

作者：唐宁枫焦瑞清吴绍熙郭宁如秦浚川中国医学科学院中国协和医科大学真菌中心南京210042 南京大学医药生物技术国家重点实验室

目的探讨白念珠菌烯醇化酶的抗原特异性。方法和结果①免疫印迹显示烯醇化酶是白念珠菌非糖基化蛋白中可以和感染兔血清发生反应的主要蛋白质。②以纯化的白念珠菌烯醇化酶免疫家兔获得最高效价为1:6400的多克隆抗体(ELISA法测定)。③... 详细信息

目的探讨白念珠菌烯醇化酶的抗原特异性。方法和结果①免疫印迹显示烯醇化酶是白念珠菌非糖基化蛋白中可以和感染兔血清发生反应的主要蛋白质。②以纯化的白念珠菌烯醇化酶免疫家兔获得最高效价为1:6400的多克隆抗体(ELISA法测定)。③与另外3种多克隆抗体相比,抗烯醇化酶抗体在检测白念珠菌菌体抗原时显示出较高的特异性。结论白念珠菌烯醇化酶是一种值得进一步研究的特异性抗原。

关键词：白色念珠菌烯醇化酶抗原

E·coli L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位氨基酸残基Lys^(196)对其抗原性的影响

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中国药科大学学报 2006年第3期37卷 277-280页

作者：陈建华徐欣吴梧桐姚萍刘广桢张艳丽王进中国药科大学分子生物学教研室南京210009 南京大学医药生物技术国家重点实验室南京210093

目的:研究重组*** L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位中关键氨基酸残基对其抗原性的影响。方法:以Ala为替代残基,对抗原表位192TPARKHTS199中Lys196进行PCR定点突变,双向免疫扩散法和间接ELISA法分析新型重组*** L-天冬酰胺酶的抗原性。结果:... 详细信息

目的:研究重组*** L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位中关键氨基酸残基对其抗原性的影响。方法:以Ala为替代残基,对抗原表位192TPARKHTS199中Lys196进行PCR定点突变,双向免疫扩散法和间接ELISA法分析新型重组*** L-天冬酰胺酶的抗原性。结果:采用双向免疫扩散法和间接ELISA法检测,与重组*** L-天冬酰胺酶相比,新型重组***-天冬酰胺酶与重组*** L-天冬酰胺酶抗体结合率下降64%。结论:通过对重组*** L-天冬酰胺酶B细胞抗原表位关键残基的定点突变有效地降低了其抗原性。

关键词：重组E.coli L-天冬酰胺酶定点突变抗原表位间接ELISA法