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负载脊髓匀浆蛋白的树突状细胞促进小鼠脊髓损伤功能恢复的作用研究

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中华神经外科杂志 2008年第5期24卷 393-397页

作者：刘明永赵建华梁华平吴丹卞修武第三军医大学大坪医院野战外科研究所重庆400042 第三军医大学西南医院病理学研究所

目的研究负载脊髓匀浆蛋白的未成熟树突状细胞（hpDCs）对小鼠脊髓损伤的促修复作用。方法通过局部或腹腔注射hpDCs，并设立对照，利用BBB功能评分及组织病理学方法，观察其对小鼠脊髓损伤神经功能恢复和局部病变范围、空洞大小、胶质... 详细信息

目的研究负载脊髓匀浆蛋白的未成熟树突状细胞（hpDCs）对小鼠脊髓损伤的促修复作用。方法通过局部或腹腔注射hpDCs，并设立对照，利用BBB功能评分及组织病理学方法，观察其对小鼠脊髓损伤神经功能恢复和局部病变范围、空洞大小、胶质瘢痕厚度等病理改变的影响。结果注射后第84天，腹腔注射hpDCs组BBB评分为16．5，与对照组相比有显著统计学意义（P〈0．01）。各组腹腔或局部注射效果无统计学意义（P〉0．05）。同时hpDCs可延长Nestin表达时间，缩小损伤区范围、空洞面积、胶质瘢痕厚度。结论腹腔或局部注射hpDCs均可改善局部环境并促进小鼠脊髓损伤神经功能恢复。

关键词：脊髓损伤树突状细胞脊髓匀浆蛋白

抗肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA单克隆抗体的制备及其特性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第7期23卷 657-659页

作者：余抒罗萍陈洪章李海侠毛旭虎第三军医大学临床微生物学教研室重庆400038

目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot... 详细信息

目的:制备抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA单克隆抗体(mAb)。方法:以重组EspA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术并且联合间接ELISA筛选只针对EspA的杂交瘤细胞株。以Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类,ELISA、Western blot及免疫荧光技术鉴定抗体的免疫学特性。结果:获得3株稳定分泌抗EspA杂交瘤细胞的mAb,Ig亚型分别为IgG1κ型、IgG2aκ型、IgG2bκ型。Western blot和免疫荧光分析表明,3株杂交瘤细胞制备的mAb腹水都能特异地结合重组EspA蛋白和识别O157:H7的EspA成分。结论:成功地制备了抗肠出血性大肠杆菌O157:H7EspA的mAb,并证明了该mAb的生物学活性,为深入研究肠出血性大肠杆菌O157:H7的致病机制提供新的手段。

关键词： EspA 单克隆抗体特性鉴定

肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠的实验研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第9期28卷 828-832页

作者：程建平邹全明毛旭虎易勇王庆旭马颖徐州医学院附属淮安医院检验科 233002 第三军医大学临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的研究肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力。方法将60只BALB／c小鼠平均分为5组，分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组，用注射方式免疫3次，抗原和佐剂均为每次100μg／只。采集免... 详细信息

目的研究肠出血性大肠杆菌O157：H7基因工程疫苗免疫小鼠后对该菌感染的保护能力。方法将60只BALB／c小鼠平均分为5组，分别为3种抗原单独免疫、三抗原联合免疫和PBS对照组，用注射方式免疫3次，抗原和佐剂均为每次100μg／只。采集免疫前和各次免疫后7d的小鼠血清检测抗体，末次免疫10d后以10^9CFU的O157全菌液经口感染小鼠。观察小鼠临床症状及死亡情况，检测粪便与肠道带菌情况，并作病理组织学检测。结果各抗原免疫组小鼠特异抗体明显增加，感染后各组小鼠均有死亡，IntiminC300、Stx2B、HlyAN436和联合免疫组保护率分别为73％、64％、36％和91％。未病死小鼠粪便排菌情况：对照组22d，实验组为5—14d。肠道带菌情况：对照组阳性率为100％，实验组为25％-83％。病死小鼠肺脏、肝脏均有明显组织病理学改变。结论IntiminC300、Stx2B和HlyAN436疫苗对于O157感染具有一定的预防作用，而联合免疫效果又大于单独免疫。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 紧密黏附素志贺毒素ⅡB亚单位 EHEC溶血素基因工程疫苗

骨髓间充质干细胞对异体外周血B淋巴细胞的免疫调节作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 486-491页

作者：武令启白海王存邦杨小亮赵强杨义武林梅兰州军区总医院血液科暨全军血液学中心 730050

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）在体外对异体外周血B淋巴细胞的免疫调节作用。方法用密度梯度离心法从骨髓中分离、培养MSC，从外周血中分离单个核细胞，L-亮氨酸甲酯去除单核细胞，以2-氨乙基硫脲溴化物（AE... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）在体外对异体外周血B淋巴细胞的免疫调节作用。方法用密度梯度离心法从骨髓中分离、培养MSC，从外周血中分离单个核细胞，L-亮氨酸甲酯去除单核细胞，以2-氨乙基硫脲溴化物（AET）处理绵羊红细胞（SRBC）的花环形成法，去除T淋巴细胞获得纯化的B淋巴细胞。用羊抗人IgM单克隆抗体（anti-IgM）刺激与或未与MSC或其培养上清共培养3d的B淋巴细胞，应用MTT法测B淋巴细胞的增殖，ELISA法测培养上清中免疫球蛋白IgG、IgM的产生，应用流式细胞术分别检测与MSC共培养24、48h后B淋巴细胞的凋亡。结果MSC及其培养上清抑制由anti-IgM诱导的B淋巴细胞的增殖和分泌IgG、IgM，且随着MSC细胞数量及其培养上清浓度的增加，这种抑制越明显。流式细胞术结果显示，与MSC共培养不同时间的B淋巴细胞的凋亡变化无统计学意义，MSC抑制B淋巴细胞的增殖存在暂时性和可逆性。结论MSC对异体外周血B淋巴细胞存在免疫调节作用，并且这种调控机制是复杂的，不仅与MSC细胞数量有关，还与细胞间的相互作用和MSC分泌的细胞因子有关。

关键词：间充质干细胞 B淋巴细胞免疫球蛋白免疫调节

肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7志贺毒素研究进展

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中国人兽共患病学报 2007年第1期23卷 83-85页

作者：陈洪章邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

肠出血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7于1975年被首次分离，为革兰氏阴性杆菌，对酸耐受性强，在pH3～5条件下，可长期生存，能产生致死性志贺毒素（Shiga toxin，Stx），1982年被确认为严重致病菌。其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性... 详细信息

肠出血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7于1975年被首次分离，为革兰氏阴性杆菌，对酸耐受性强，在pH3～5条件下，可长期生存，能产生致死性志贺毒素（Shiga toxin，Stx），1982年被确认为严重致病菌。其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点，已经成为全球性的公共卫生问题，对人们的健康构成了巨大威胁。据报道，美国每年感染STEC约有10万例．其中O157：H7感染约有7．3万例。近年来，美国、日本、加拿大、英国等发达国家EHEC O157：H7发病呈上升趋势，许多国家已把它列为法定报告传染病。我国江苏、安徽省曾于1999年暴发流行大肠杆菌O157感染性腹泻，患者超过2万例，死亡177例，流行时间7个月。

关键词：肠出血性大肠杆菌志贺毒素 O157:H7 O157:H7感染大肠杆菌O157 革兰氏阴性杆菌法定报告传染病公共卫生问题

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致泻性大肠杆菌疫苗研究进展

免疫学杂志 2006年第4期22卷 466-468页

作者：毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

大肠杆菌引起的腹泻多发生在儿童及发展中国家,发展致泻性大肠杆菌疫苗具有特殊的意义。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗和ghost疫苗技术为疫苗的研制提供了新的思路。本文综述... 详细信息

大肠杆菌引起的腹泻多发生在儿童及发展中国家,发展致泻性大肠杆菌疫苗具有特殊的意义。除了灭活疫苗、减毒疫苗、结合多糖疫苗和亚单位疫苗外,新近出现的DNA疫苗、转基因植物疫苗和ghost疫苗技术为疫苗的研制提供了新的思路。本文综述了目前致泻性大肠杆菌疫苗研究的新进展。

关键词：大肠杆菌腹泻疫苗

间充质干细胞对异体B淋巴细胞增殖和凋亡的影响

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中华医学杂志 2008年第36期88卷 2562-2565页

作者：武令启白海王存帮杨小亮赵强杨义武林梅兰州军区总医院血液科暨全军血液学中心 730050

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSC）在体外对异体外周血B淋巴细胞增殖和凋亡的影响。方法从骨髓中分离、培养MSC。从外周血中分离单个核细胞，L-亮氨酸甲酯去除单核细胞，以2-氨乙基硫脲溴化物（AET）处理绵羊红细胞（SRBC）的花环形成法... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSC）在体外对异体外周血B淋巴细胞增殖和凋亡的影响。方法从骨髓中分离、培养MSC。从外周血中分离单个核细胞，L-亮氨酸甲酯去除单核细胞，以2-氨乙基硫脲溴化物（AET）处理绵羊红细胞（SRBC）的花环形成法，去除T淋巴细胞获得纯化的B淋巴细胞。用羊抗人IgM单克隆抗体（Anti-IgM，终浓度10μg／ml）刺激与不同比例的MSC（B：MSC 50：1、10：1、1：1）及不同浓度的MSC培养上清（12．5％、25％、50％）共培养的B淋巴细胞，72h后四甲基偶氮唑蓝（MTY）比色分析测B淋巴细胞的增殖。B淋巴细胞与MSC等比例，加或不加Anti—IgM，共培养24、48h后，流式细胞术检测B淋巴细胞的凋亡。结果10：1、1：1组B淋巴细胞A值分别为0．418±0．103、0．365±0．114，显著低于对照组的0．679±0．049（P〈0．01），1：1组显著低于50：1组（P〈0．05）；50％MSC上清组B淋巴细胞A值（0．504±0．099），同对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05），并且显著低于12．5％组（0．669±1．023，P〈0．05）。MSC不诱导B淋巴细胞的凋亡；B淋巴细胞与MSC共培养24、48h，加或不加Anti—IgM，各组细胞凋亡率为（1．90±0．75）％、（2．33±1．01）％、（2．33±0．75）％、（1．39±0．63）％，组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MSC及其上清抑制B淋巴细胞增殖，作用机制与MSC细胞数量和MSC分泌的细胞因子有关，但是在体外MSC不诱导B淋巴细胞的凋亡。

关键词：间充质干细胞 B淋巴细胞免疫调节凋亡

转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 453-457页

作者：吴静王琳刘妍叶海燕丁宁刘永明徐东平桂林医学院广西桂林541004 解放军302医院全军传染病研究所肝衰竭研究中心病毒性肝炎研究室北京100039 桂林市第三人民医院肝病科广西桂林541004

目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PC... 详细信息

目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因;构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达。结果从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5～5.0)×105IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06%～2.25%,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03%～2.06%和1.05%～1.12%,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞均低于0.05%。结论通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性。

关键词：乙型肝炎病毒细胞毒性T淋巴细胞 T细胞受体表位特异性表达

丹参对肝星状细胞c—fos和c—jun基因表达的影响

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中华实验外科杂志 2013年第2期30卷 288-289页

作者：王爱民阴赪宏李元平马红熊英王宝恩解放军252医院消化科河北保定071000 北京友谊医院肝病研究中心

目的观察丹参对肝星状细胞c—fos和c-jun基因表达的影响。方法在培养的肝星状细胞株中分别加入不同浓度的丹参（终质量浓度分别为0．8、0．4g／L）；于8、24、48、72h4个时间点分别收集细胞，提取肝星状细胞总RNA；用逆转录定量聚合酶... 详细信息

目的观察丹参对肝星状细胞c—fos和c-jun基因表达的影响。方法在培养的肝星状细胞株中分别加入不同浓度的丹参（终质量浓度分别为0．8、0．4g／L）；于8、24、48、72h4个时间点分别收集细胞，提取肝星状细胞总RNA；用逆转录定量聚合酶链反应（RT—qPCR）方法测定c—fos和c-jun的基因表达水平。结果丹参两组HSC—T细胞c—fos基因表达水平在8h（0．30±0．08、0．48±0．11）、24h（0．26±0．09、0．43±0．10）、48h（0．20±0．06、0．36±0．09）、72h（0．13±0．04、0．23±0．06）4个时间点均明显低于对照组（0．63±0．13、0．50±0．12、0．43±0．06、0．32±0．04）；c-jun基因表达水平在8h（0．43±0．12、0．69-t-O．14）、24h（0．38±0．09、0．56±0．10）、48h（0．27±0．08、0．46-4-0．10）、72h（0．20±0．04、0．34±0．06）4个时间点也均明显低于对照组（0．93±0．13、0．80±0．12、0．63±0．10、0．46±0．07）；随剂量加大，HSC-T细胞c—fos、c-jun基因表达水平逐渐降低；两组问差异有统计学意义（P〈0．01）。结论丹参对肝星状细胞c—fos和c-jun基因表达有明显的下调作用。

关键词：丹参肝星状细胞 c-fos c-Jun 基因表达