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穴位埋线调控NOD样受体热蛋白结构域3/半胱氨酸蛋白酶-1信号通路抗溃疡性结肠炎损伤的机制研究

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针刺研究 2023年第7期48卷 625-634页

作者：谢超群陈凯孙豪娴董慧朱莹湖南中医药大学第一附属医院脾胃病科长沙410007

目的:观察穴位埋线对“虚、瘀”状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用及对NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)信号通路的调控作用,探讨穴位埋线治疗UC的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组10只和造模组48只... 详细信息

目的:观察穴位埋线对“虚、瘀”状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用及对NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)信号通路的调控作用,探讨穴位埋线治疗UC的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组10只和造模组48只,采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃,再予2,4,6-三硝基苯磺酸与乙醇复合物灌肠复制“虚、瘀”状态下UC大鼠模型。造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、非穴位埋线组和穴位埋线组,每组11只。穴位埋线组选“足三里”“天枢”“肾俞”等穴进行穴位埋线治疗,非穴位埋线组于大鼠臀部肌肉丰厚处进行埋线治疗,每14 d治疗1次,共治疗3次;SASP组予SASP溶液(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,每日1次,共治疗42 d。观察大鼠一般情况,计算大鼠疾病活动指数(DAI);测量各组大鼠结肠长度;肉眼评估结肠黏膜大体病理学改变,并进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;HE染色评估结肠组织病理学改变,进行结肠病理损伤(TDI)评分;ELISA法检测各组大鼠血清NLRP3、白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量;荧光定量PCR法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β及IL-18 mRNA水平;Western blot法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平;免疫组织化学染色法检测结肠组织ASC阳性表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),结肠长度明显缩短(P<0.01),结肠黏膜形成明显溃疡面,隐窝破坏明显,大量炎性细胞浸润,DAI、CMDI及TDI评分升高(P<0.01),血清中NLRP3、IL-1β及IL-18含量升高(P<0.01),结肠组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA水平和Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,穴位埋线组和SASP组体质量升高(P<0.01),大鼠结肠长度增长(P<0.01),结肠黏膜病理损伤明显减轻,DAI、CMDI及TDI评分显著降低(P<0.01),血清中NLRP3、IL-1β及IL-18含量显著降低(P<0.01),结肠组织内NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA和Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。穴位埋线组各指标较非穴位埋线组均有明显改善(P<0.01)。结论:穴位埋线可通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路抑制炎性小体活化,缓解UC大鼠的炎性反应。

关键词：溃疡性结肠炎穴位埋线 NOD样受体热蛋白结构域3/半胱氨酸蛋白酶-1信号通路凋亡相关斑点样蛋白炎性反应

基于网络药理学探讨三物白散治疗胃癌的分子机制及初步验证

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湖南中医药大学学报 2021年第4期41卷 566-575页

作者：娄余朱莹彭瑶王燚霈易书林湖南中医药大学第二附属医院湖南长沙410005 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的运用网络药理学联合分子对接探讨三物白散治疗胃癌的作用机制,通过体外细胞实验对相关靶点作初步验证。方法利用TCMSP数据库获取三物白散的活性成分及潜在靶点;通过Genecards、OMIM、TTD数据库,收集胃癌相关的作用靶点;将三物白散... 详细信息

目的运用网络药理学联合分子对接探讨三物白散治疗胃癌的作用机制,通过体外细胞实验对相关靶点作初步验证。方法利用TCMSP数据库获取三物白散的活性成分及潜在靶点;通过Genecards、OMIM、TTD数据库,收集胃癌相关的作用靶点;将三物白散潜在靶点与胃癌靶点相匹配,获得三物白散抗胃癌的作用靶点,使用STRING数据库对作用靶点进行蛋白互作分析,构建PPI网络,并进行拓扑分析筛选核心靶点;用R语言对作用靶点进行GO生物学过程和KEGG通路富集分析;采用Auto Dock Vina软件对核心靶点与对应活性成分进行分子对接;运用qPCR验证三物白散对胃癌细胞SGC-7901中Caspase-3、Caspase-7作用靶点的调控作用。结果经筛选获得三物白散活性成分17个,三物白散作用靶点84个,经拓扑分析得到12个核心作用靶点,包括TP53、AKT1、MAPK1、JUN、CASP3等。三物白散作用靶点涉及PI3K-AKT、p53、HIF-1、IL-17等多条信号通路,通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖、调节缺氧及炎性微环境发挥抗肿瘤作用。分子对接结果表明,活性成分与核心靶点有良好的结合能力。体外实验结果证实,三物白散可上调凋亡相关分子Caspase-3、Caspase-7的表达,这在一定程度上证实了网络药理学预测及指导实验设计的可靠性。结论本研究结果体现了三物白散多成分、多靶点、多通路的治疗特点,系统地揭示了其抗胃癌的药效物质、核心靶点和信号通路,为后续深入研究作用机制提供参考。

关键词：胃癌三物白散网络药理学作用靶点分子对接体外细胞实验

基于PPARγ信号通路探讨安脑平冲方调节大鼠脑出血后神经炎症的作用机制

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时珍国医国药 2023年第1期34卷 26-30页

作者：张瑛郭纯周德生湖南中医药大学研究生院湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的基于PPARγ信号通路,探讨安脑平冲方调节脑出血后神经炎症的作用机制。方法将45只雄性大鼠分为假手术组、模型组、安脑平冲方组、安脑平冲方+GW9662组。采用自体血注入左侧尾状核建立脑出血大鼠模型。造模成功后,给予相应药物干预,... 详细信息

目的基于PPARγ信号通路,探讨安脑平冲方调节脑出血后神经炎症的作用机制。方法将45只雄性大鼠分为假手术组、模型组、安脑平冲方组、安脑平冲方+GW9662组。采用自体血注入左侧尾状核建立脑出血大鼠模型。造模成功后,给予相应药物干预,予以HE染色观察血肿周围脑组织形态,采用改良大鼠神经功能缺损评分(mNSS)进行大鼠神经功能评价;采用免疫荧光(IF)、蛋白免疫印迹法(WB)、实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测大鼠血肿周围脑组织PPARγ、Arg-1和IL-4的表达含量及酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测ICH大鼠IL-1β和TNF-α的血清含量。结果与模型组比较,安脑平冲方组可明显减少血肿周围脑组织炎性细胞浸润,降低mNSS评分,提高血肿周围脑组织PPARγ、Arg-1和IL-4的表达量,同时减少IL-1β和TNF-α的血清含量(P部分抵消安脑平冲方的保护效应。结论安脑平冲方可以减轻脑出血大鼠神经炎症级联反应,促进脑出血大鼠神经功能恢复,其机制可能是通过激活PPARγ信号通路,提高PPARγ、Arg-1和IL-4表达,同时降低IL-1β和TNF-α的表达。

关键词：脑出血神经炎症安脑平冲方过氧化物酶体增殖物激活受体γ 精氨酸酶-1 白介素-4

复方七芍降压片保护自发性高血压大鼠血管内皮损伤的作用研究

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中国中医急症 2016年第12期25卷 2220-2222页

作者：蔺晓源刘丹曾勇湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208

目的探讨复方七芍降压片保护自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮损伤的作用机制。方法将30只SHR大鼠根据体质量按随机数字表法分为模型组、复方七芍降压片组和厄贝沙坦片组,每组各10只。另取10只Wistar-kyoto(WKY)大鼠为正常组;给药6周后,采... 详细信息

目的探讨复方七芍降压片保护自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮损伤的作用机制。方法将30只SHR大鼠根据体质量按随机数字表法分为模型组、复方七芍降压片组和厄贝沙坦片组,每组各10只。另取10只Wistar-kyoto(WKY)大鼠为正常组;给药6周后,采用ELISA检测血清中生长素(Ghrelin)、一氧化氮合酶(NOS)和内皮素-1(ET-1)的含量变化,RT-PCR测定胸主动脉Ghrelin受体(GHSR)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的m RNA表达。结果模型组血清Grelin、NOS含量和胸主动脉GHSR、e NOS m RNA表达降低,血清ET-1含量升高,与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。复方七芍降压片组和厄贝沙坦组上述指标均较模型组有不同程度的改善(P<0.05或P<0.01),且复方七芍降压片组对血清Ghrelin、NOS、ET-1含量和胸主动脉e NOS m RNA表达的影响优于厄贝沙坦组(P<0.05)。结论复方七芍降压片可能通过调节Ghrelin、NO、ET-1含量及GHSR、NOS的基因表达而起保护SHR大鼠血管内皮损伤的作用。

关键词：复方七芍降压片自发性高血压大鼠生长素血管内皮活性物质

复方七芍降压片对SHR大鼠IL-8、IL-10水平及AP-1、MCP-1蛋白表达的影响

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中成药 2020年第4期42卷 1031-1034页

作者：任卫琼李弘刘叶倩龚姗刘林王宇红湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学湖南长沙410208

目的研究复方七芍降压片对SHR大鼠肠系膜动脉组织AP-1、MCP-1蛋白表达及血清中IL-8、IL-10水平的影响。方法 30只雄性SPF级SHR大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦片组(27 mg/kg)、复方七芍降压片组(8. 73 g/kg生药),另设10只WKY大鼠为正常对... 详细信息

目的研究复方七芍降压片对SHR大鼠肠系膜动脉组织AP-1、MCP-1蛋白表达及血清中IL-8、IL-10水平的影响。方法 30只雄性SPF级SHR大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦片组(27 mg/kg)、复方七芍降压片组(8. 73 g/kg生药),另设10只WKY大鼠为正常对照组。无创血压仪测定尾动脉血压,透射电镜技术观察肠系膜动脉壁超微结构,ELISA法检测血清中IL-8、IL-10水平,免疫组化法检测肠系膜动脉中AP-1、MCP-1蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠各周大鼠血压均上升(P<0. 01),肠系膜动脉中AP-1、MCP-1蛋白表达升高(P<0. 01),血清中IL-8水平升高(P<0. 01)、IL-10水平降低(P<0. 01)。药物干预后与模型组比较,复方七芍降压片组各周血压均降低(P<0. 01),肠系膜动脉中AP-1、MCP-1蛋白表达降低(P<0. 05),血清中IL-8水平降低(P<0. 01)、IL-10水平升高(P<0. 01)。结论复方七芍降压片能够显著改善SHR大鼠血压,其机制可能与调控肠系膜动脉中AP-1、MCP-1蛋白表达,减轻炎症反应有关。

关键词：复方七芍降压片高血压炎症因子 AP-1-MCP-1

基于AKT/mTOR信号通路探讨复方七芍降压片治疗自发性高血压大鼠的作用机制

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北京中医药大学学报 2020年第4期43卷 296-303页

作者：李弘刘叶倩龚姗刘林曾勇蔡晓王宇红任卫琼湖南中医药大学第一附属医院湖南410007 湖南中医药大学科技创新中心

目的探讨复方七芍降压片通过调控蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对自发性高血压(SHR)大鼠血压、炎症因子及胸主动脉自噬相关蛋白表达的影响。方法 SHR大鼠30只,随机分为模型组、厄贝沙坦片组(27 mg/kg)、复方七芍降压片组... 详细信息

目的探讨复方七芍降压片通过调控蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对自发性高血压(SHR)大鼠血压、炎症因子及胸主动脉自噬相关蛋白表达的影响。方法 SHR大鼠30只,随机分为模型组、厄贝沙坦片组(27 mg/kg)、复方七芍降压片组(1.73 g/kg),连续给药6周,另设10只WKY大鼠为正常组,灌胃生理盐水。分别在给药前及给药1、2、3、4、5、6周,测量各组大鼠尾动脉血压。给药6周后取材,电镜观察胸主动脉超微结构及自噬情况;ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平;免疫组化法检测胸主动脉中Beclin-1、Bcl-2、AKT、mTOR蛋白表达;Western-blot检测胸主动脉中Beclin-1、Bcl-2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6水平升高(P<0.01);胸主动脉Bcl-2、AKT、mTOR蛋白表达升高(P<0.01或P<0.05),Beclin-1表达降低(P<0.01),且未见明显的自噬体结构。与模型组比较,复方七芍降压片组大鼠各周血压均降低(P<0.01);血清IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05);胸主动脉中AKT、mTOR蛋白表达均降低(P<0.05),Beclin-1表达升高(P<0.05),且可见明显的自噬体结构。结论复方七芍降压片能够降低SHR大鼠血压,其机制可能与抑制胸主动脉中自噬相关信号通路蛋白AKT、mTOR的表达,促进主动脉自噬,改善炎症反应有关。

关键词：调控蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白信号通路自噬炎症反应复方七芍降压片自发性高血压大鼠

复方七芍降压片对SHR大鼠P2Y6、MEK1/2、ERK1/2及血管重塑标志物MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响

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中药新药与临床药理 2020年第2期31卷 156-162页

作者：任卫琼李弘刘叶倩龚姗刘林曾勇张稳王宇红湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的研究复方七芍降压片对自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉中G蛋白偶联受体P2Y6、酪氨酸激酶受体(MEK1/2)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)及血管重塑标志物基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)等蛋白表达的影响... 详细信息

目的研究复方七芍降压片对自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉中G蛋白偶联受体P2Y6、酪氨酸激酶受体(MEK1/2)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)及血管重塑标志物基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)等蛋白表达的影响,探讨复方七芍降压片干预血管重塑的作用机制。方法将雄性SHR大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦片组(13.5 mg·kg^-1)、复方七芍降压片组(8.73 g·kg^-1),每组10只,另设10只WKY大鼠为正常对照组;灌胃给药,每日1次,连续给药6周。采用无创血压仪测定每周大鼠尾动脉血压;ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)水平;免疫组化法检测肠系膜动脉中P2Y6、MEK1/2、ERK1/2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达;肠系膜动脉组织HE染色后进行体视学分析,测量肠系膜动脉血管中膜厚度及相同位置的管腔直径,计算两者比值作为动脉壁厚度(WT)值。结果与正常对照组比较,模型组大鼠各周血压明显上升(P<0.01);肠系膜动脉P2Y6、MEK1/2、ERK1/2、MMP-9蛋白表达及MMP-9/TIMP-1比值、WT值明显升高(P<0.05,P<0.01),TIMP-1表达明显降低(P<0.01);血清中IL-1β水平明显升高(P<0.01)。药物干预后,与模型组比较,复方七芍降压片组各周血压均明显降低(P<0.01);肠系膜动脉P2Y6、MEK1/2、ERK1/2、MMP-9蛋白表达及MMP-9/TIMP-1比值、WT值均明显降低(P<0.05,P<0.01),TIMP-1表达明显升高(P<0.05);血清中IL-1β水平明显降低(P<0.05)。结论复方七芍降压片能够显著降低SHR大鼠血压,改善血管重塑,可能与调控肠系膜动脉中P2Y6、MEK1/2、ERK1/2蛋白表达,减轻炎症反应有关。

关键词：复方七芍降压片高血压血管重塑炎症 P2Y6 MEK1/2 ERK1/2

脑泰方Ⅱ号含药血清对LPS诱导的小胶质细胞极化的调节作用

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北京中医药大学学报 2020年第5期43卷 408-413页

作者：张秀丽雷昌刘洋葛金文孟盼张君宇任永镇资冬朱伟湖南中医药大学科技创新中心湖南410208 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南中医药大学心脑疾病中西医结合防治湖南省重点实验室

目的探明脑泰方Ⅱ号含药血清对LPS诱导的HAPI小胶质细胞形态、M1/M2型极化标记分子及炎性因子的影响。方法建立LPS诱导的HAPI细胞炎症模型,将培养的细胞分为:空白组、LPS模型组、脑泰方Ⅱ号组、米诺环素组。高内涵观察细胞形态与数量的... 详细信息

目的探明脑泰方Ⅱ号含药血清对LPS诱导的HAPI小胶质细胞形态、M1/M2型极化标记分子及炎性因子的影响。方法建立LPS诱导的HAPI细胞炎症模型,将培养的细胞分为:空白组、LPS模型组、脑泰方Ⅱ号组、米诺环素组。高内涵观察细胞形态与数量的变化,Real-time PCR检测M1型标志分子MHCⅡ、iNOS、MCP-1、CD11b,M2型标志分子Arg1、Mrc1、Ym1,促炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α,抗炎性因子IL-4、IL-10、TGF-βmRNA水平。结果与正常组比较,LPS模型组细胞胞体变大,并呈多极化或阿米巴型,突触变粗变短;其M1型标记分子与促炎性因子的mRNA水平显著升高(P部分恢复,突触变长,且细胞数量增多;M1型标记分子MHCⅡ、iNOS、CD11b与促炎性因子的mRNA水平显著降低(P0.05),对促炎性因子IL-6、IL-12、TNF-α的mRNA水平的降低作用虽优于米诺环素组(P0.05);其对M2型标志分子的Mrc1、Ym1及抗炎性因子IL-4、TGF-βmRNA水平的提升作用均明显优于米诺环素组(P<0.01或P<0.05)。结论脑泰方Ⅱ号可通过对细胞形态、M1/M2型标记分子与炎性因子的调节作用抑制LPS诱导的HAPI细胞M1型极化,并促进M2型极化。脑泰方Ⅱ号对M2型标志分子及抗炎性因子的调节作用较米诺环素具有一定优势。

关键词：脑泰方Ⅱ号小胶质细胞极化 M1型标记分子 M2型标记分子促炎性因子抗炎性因子

云南萝芙木与催吐萝芙木HPLC指纹图谱建立及利血平测定

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中成药 2020年第8期42卷 2107-2112页

作者：唐林肖望重刘检龙红萍吴笛王宇红湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410208

目的建立萝芙木属药材HPLC指纹图谱,并测定利血平的含有量。方法样品80%乙醇提取物的分析采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%三乙胺溶液,梯度洗脱;检测波长280 nm。采用UPLC-Q-TOF进行色谱峰组分鉴定。通过相似度评... 详细信息

目的建立萝芙木属药材HPLC指纹图谱,并测定利血平的含有量。方法样品80%乙醇提取物的分析采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%三乙胺溶液,梯度洗脱;检测波长280 nm。采用UPLC-Q-TOF进行色谱峰组分鉴定。通过相似度评价并结合聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘法-判别分析对云南萝芙木与催吐萝芙木的总体质量评价。结果15批样品HPLC指纹图谱中有15个共有峰,对其中11个共有峰进行成分鉴别。相似度0.83~0.97,表明该药材总体质量较为稳定;但通过模式识别技术均发现不同批次药材质量之间存在一定的差异,且主要分为2类,最后进一步采用正交偏最小二乘法-判别分析筛选出云南萝芙木与催吐萝芙木质量差异的2种主要成分,分别为利血平、萝芙木碱。结论该方法科学、准确、可靠且简便,可系统、全面地评价萝芙木属药材的质量。

关键词：云南萝芙木催吐萝芙木指纹图谱 HPLC 化学模式识别