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Characterization and Expression Analysis of Four Glycine-Rich RNA-Binding Proteins Involved in Osmotic Response in Tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi)

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Agricultural Sciences in China 2010年第11期9卷 1577-1587页

作者： CHEN Xuan zeng qian-chun LU Xiu-ping YU Di-qiu LI Wen-zheng Industrial Crop Research Institute Yunnan Academy of Agricultural Sciences Kunming 650205 P.R. China College of Agronomy and Biotechnology Yunnan Agricultural University Kunming 650201 P.R. China Yunnan Tobacco Research Institute Yuxi 653100 P.R.China Xishuangbanna Tropical Botanic Garden Chinese Academy of Sciences Kunming 650223 P.R. China

Plants have developed many signals and specific genes＇ regulations at both transcriptional and post-transcriptional levels in order to tolerate and adapt to various environmental stresses. RNA-binding proteins （RBPs） play crucial roles in the post- transcriptional regulation via mRNA splicing, polyadenylation, sequence editing, transport, mRNA stability, mRNA localization, and translation. In this paper, four cDNAs of glycine-rich RNA-binding proteins （GR-RBPs）, named NtRGP-la, -lb, -2, and -3, were isolated from Nicotiana tabacum by RT-PCR analysis, and special emphases were given to the sequences alignment, phylogenetic analysis and gene expression. Sequences alignment revealed minor difference of cDNA sequences, but no difference of deduced proteins between N. sylvestris and N. tabacum. Phylogenetic alignment revealed that four cDNAs in tobacco were clustered into two different groups. NtRGP-2 and -3 were evolutionarily closest to Arabidopsis GR-RBPs genes and related to animal GR-RBPs genes, while NtRGP-la and -lb were closest to Gramineae GR-RBPs genes. The expression analyses of these four NtRGPs in response to different abiotic stresses revealed the similar expression pattern. Moreover, the four NtRGPs, especially NtRGP-la and NtRGP-3, were strongly induced by stresses including water, wound, cold, and high temperature, weakly induced by PEG, drought and SA, while reduced by NaC1 and unaffected by ABA treatment. The fact that all of these abiotic stresses included in our experiments affected the water balance and resulted in osmotic stress on cellular level, suggests that NtRGPs in tobacco should be a family of crucial osmosis-related proteins, and may play a key role in signal transduction with ABA-independent pathway under abiotic stresses.

关键词： glycine-rich RNA-binding proteins abiotic stresses phylogenesis expression pattern osmotic stress

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木霉菌重寄生过程中的酶学研究进展

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中国生物防治 2009年第3期25卷 276-280页

作者：叶小波曾千春蒋细良云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201 中国农科院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室北京100081

木霉是一种重要的生防真菌,重寄生作用是木霉的主要生防机制之一。本文对国内外在木霉重寄生过程中产生的主要酶类及其作用的研究进展进行综述。

关键词：木霉重寄生作用细胞壁降解酶研究进展

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微生物β-甘露聚糖酶的生产及应用

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湖北农业科学 2011年第17期50卷 3483-3485页

作者：郑艳丽曾千春云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201

β-甘露聚糖酶可应用于造纸、饲料、洗涤、纺织、食品、医药和石油开采等工业领域,特别是在造纸和饲料工业中已得到了广泛的应用。从β-甘露聚糖酶的水解方式和产物、微生物的来源及其工业应用等方面做了简要介绍。

关键词： β-甘露聚糖酶微生物应用

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中国水稻杂种优势利用现状

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中国水稻科学 2000年第4期14卷 243-246页

作者：曾千春周开达朱祯罗琼四川农业大学水稻研究所四川温江611130 中国科学院遗传研究所北京100101

分析了 1996～ 1998年我国杂交水稻生产应用中主要品种的胞质类型及播种情况。现阶段 ,中国杂交水稻种植面积占水稻年播种面积的 5 0 %以上。生产上应用的三系杂交稻仍以野败胞质为主 ,其次为冈· D型和印尼水田谷型 ,后者的面积比重在... 详细信息

分析了 1996～ 1998年我国杂交水稻生产应用中主要品种的胞质类型及播种情况。现阶段 ,中国杂交水稻种植面积占水稻年播种面积的 5 0 %以上。生产上应用的三系杂交稻仍以野败胞质为主 ,其次为冈· D型和印尼水田谷型 ,后者的面积比重在逐年增加。两系杂交稻研究取得新突破 ,10余个组合通过了省级审定 ,培矮 6 4S的广泛应用展示了两系杂交稻超三系杂交稻的诱人前景。我国业已育成超级杂交稻苗头组合 ,个别组合在部分百亩 (6 .6 7hm2 )连片示范点已经达到了日产稻谷10 0 kg/

关键词：育种应用杂交水稻中国

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小叶龙竹的快速繁殖与离体保存

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云南农业大学学报（自然科学版） 2011年第3期26卷 359-363页

作者：何巨擘程治英郭振华曾千春云南农业大学农学与生物技术学院云南昆明650201 中国科学院昆明植物研究所云南昆明650204

利用小叶龙竹种子培养的试管苗对其快速繁殖体系的建立与离体保存进行了研究,结果表明:根、茎、叶和小芽各外植体中,小芽切段可以较好的诱导芽的增殖且基本培养基MS附加3 mg/L BA和0.1 mg/L NAA为芽增殖最适培养基,增殖率可达1∶4.4。... 详细信息

利用小叶龙竹种子培养的试管苗对其快速繁殖体系的建立与离体保存进行了研究,结果表明:根、茎、叶和小芽各外植体中,小芽切段可以较好的诱导芽的增殖且基本培养基MS附加3 mg/L BA和0.1 mg/L NAA为芽增殖最适培养基,增殖率可达1∶4.4。培养基1/2MS附加1 mg/L NAA和1 mg/L IBA为最佳生根培养基,15 d丛芽生根率为93%,27 d丛芽生根率则达到了100%。MS培养基附加10 mg/L CCC培养基为最佳离体保存培养基,保存时间可达120 d以上,转接到MS外加3 mg/L BA和0.1 mg/L NAA的恢复培养基上,培养50d,可以100%恢复生长。据调查:小叶龙竹的快速繁殖与离体保存研究国内外尚属首次报道。

关键词：小叶龙竹快速繁殖离体保存

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Influence of Matrix Attachment Regions from Maize on Transgene Expression Level in Tobacco

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Acta Botanica Sinica 2002年第7期44卷 804-808页

作者：李旭刚曾千春陈松彪徐军望常团结朱祯中国科学院遗传研究所北京100101

The effect of matrix attachment regions (MARs) on foreign gene expression in transgenic plants was studied, The beta-glucuronidase (GUS) gene (uidA) was flanked by the MARs isolated from the genome of maize to form plant expression vector. The vectors with and without MARs were transferred into tobacco ( Nicotiana tabacum L.) through Agrobacterium-mediated transformation procedure. GUS activity assays indicated that MARs could increase expression level of uidA gene. The mean GUS activity could be increased twofold as compared to that of transformants without MARs, and the highest GUS activity of transformant could reach tenfold. The correspondence between GUS activity and mRNA accumulation was positive and indicated that MARs could improve transcription of foreign gene.

关键词： matrix attachment region beta-glueuronidase transgene gene expression

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超声波提取-气相色谱/质谱联用分析烟叶中挥发性和半挥发性有机酸

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分析科学学报 2011年第1期27卷 35-39页

作者：陈飞钦曾千春宋春满方敦煌逄涛邓建华云南农业大学农学与生物技术学院云南昆明650201 云南省烟草农业科学研究院云南玉溪653100

采用超声波提取、硅烷化衍生、气相色谱-质谱(GC-MS)法,并以山梨酸和肉桂酸为双内标,建立了同时、快速分析烟叶中26种挥发性和半挥发性有机酸的方法。结果显示,所测定的26种有机酸中,工作曲线线性相关系数有23种在0.999以上;方法的相对... 详细信息

采用超声波提取、硅烷化衍生、气相色谱-质谱(GC-MS)法,并以山梨酸和肉桂酸为双内标,建立了同时、快速分析烟叶中26种挥发性和半挥发性有机酸的方法。结果显示,所测定的26种有机酸中,工作曲线线性相关系数有23种在0.999以上;方法的相对标准偏差在0.87%～5.67%范围;回收率在83.5%～109.6%范围;方法检出限和定量限分别为0.33～8.27μg/L和1.08～27.55μg/L。该法操作简单,分析时间短,具有重现性好、回收率高、灵敏度高的优点,适合于批量、同时、快速分析烟叶的挥发性、半挥发性有机酸。采用该法对部分烤烟样品进行了分析。

关键词：烟叶有机酸超声波硅烷化气相色谱-质谱选择离子

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甘蔗遗传转化中不同阶段潮霉素抗性筛选

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中国糖料 2010年第2期32卷 17-19页

作者：姚丽吴才文曾千春云南农业大学农学与生物技术学院昆明650201 云南省甘蔗遗传改良重点实验室开远661600

以新台糖22的胚性愈伤组织为材料,在诱导培养基、分化培养基及生根培养基中,分别添加不同浓度的潮霉素(Hyg)为选择性试剂,以确定甘蔗遗传转化时的最佳筛选浓度。结果表明:潮霉素对不同阶段培养基的敏感性存在一定差异,在甘蔗遗传转化时... 详细信息

以新台糖22的胚性愈伤组织为材料,在诱导培养基、分化培养基及生根培养基中,分别添加不同浓度的潮霉素(Hyg)为选择性试剂,以确定甘蔗遗传转化时的最佳筛选浓度。结果表明:潮霉素对不同阶段培养基的敏感性存在一定差异,在甘蔗遗传转化时3种培养基的抗性筛选浓度分别以50、30、30mg/L为佳;在分化培养基内的毒性作用比在诱导培养基内更快、效果更好,故遗传转化时可直接将Hyg用于分化培养基进行抗性芽筛选试验。

关键词：甘蔗组织培养潮霉素抗性试验遗传转化

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烟草属RGP-3基因克隆及多样性分析

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西南农业学报 2014年第3期27卷 960-965页

作者：陈璇曾千春张家瑞胡尊红李文正云南省农业科学院经济作物研究所云南昆明650205 云南省烟草农业科学研究院云南昆明650021 云南农业大学农学与生物技术学院云南昆明650201 红云红河烟草(集团)有限责任公司云南昆明650202

前期研究表明普通烟草(*** ***)中富含甘氨酸RNA结合蛋白基因(NtRGP-3),该基因为涉及渗透胁迫相关的一个重要转录后调节基因,本研究旨在明确烟草属不同种中RGP-3基因多样性。通过PCR同源克隆方法克隆了12个烟草种中RGP-3基因,对RGP-3基... 详细信息

前期研究表明普通烟草(*** ***)中富含甘氨酸RNA结合蛋白基因(NtRGP-3),该基因为涉及渗透胁迫相关的一个重要转录后调节基因,本研究旨在明确烟草属不同种中RGP-3基因多样性。通过PCR同源克隆方法克隆了12个烟草种中RGP-3基因,对RGP-3基因及其编码蛋白的结构、变异和系统进化等方面进行了分析。结果显示,RGP-3在烟草属不同种中相似性介于89%~100%,其中栽培烟草种(***_K326)和野生林烟草(***)相似性为100%;多序列比较显示,RGP-3在不同烟草种中存在484个变异位点,其中外显子中变异占8.88%,内含子中变异占79.55%,3'UTR中变异占11.57%,推导的氨基酸仅有14个变异位点,且RNA识别结构域(RRM)高度保守;系统进化分析显示,普通烟亚属(Tabacum)和碧冬烟亚属(Petunioides)中RGP-3遗传距离较近,而和黄花烟亚属(Rustica)较远,与植物分类学上烟草亲缘关系结论一致。研究结果表明烟草属中RGP-3基因变异丰富,而编码的蛋白较保守,且RGP-3基因能够较好地用于烟草系统进化分析,这些结果为进一步研究烟草属中RGP-3的生理功能奠定了基础。

关键词：烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白 RGP-3 克隆基因多样性

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转修饰cry1 Ac基因籼稻明恢81经花药培养获得抗虫DH系

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生物工程学报 2002年第4期18卷 442-446页

作者：曾千春吴茜冯德江周开达刘翔朱祯中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101 四川农业大学水稻研究所温江611130

对基因枪法获得的明恢 81转修饰的cry1Ac基因当代植株进行花药培养 ,共接种花药 2 6 0 0枚 ,获得 83份花培植株 ,其中双倍体植株 43份 ,单倍体植株 40份。PCR结果表明含有cry1Ac基因的植株 5 5份 ,花培植株群体中转基因与非转基因植株... 详细信息

对基因枪法获得的明恢 81转修饰的cry1Ac基因当代植株进行花药培养 ,共接种花药 2 6 0 0枚 ,获得 83份花培植株 ,其中双倍体植株 43份 ,单倍体植株 40份。PCR结果表明含有cry1Ac基因的植株 5 5份 ,花培植株群体中转基因与非转基因植株的比值为 2∶1(5 5 2 8)。进一步结合Southernblot和ELISA分析 ,于花培植株当代筛选到转基因纯合株系 36份。外源蛋白表达量上 ,花药来源于同一克隆的DH系的不同植株之间基本一致 ,最高的Cry1Ac含量达 0 2 5 %。田间抗虫性试验表明 ,经花药培养纯合获得的部分转基因纯合系植株对二化螟 (Chilosuppressalis)表现出高抗 ,而且主要农艺性状保持不变。以上结果表明水稻花药培养可以加速转基因的纯合与育种利用。

关键词：修饰cry1Ac基因籼稻明恢81 花药培养抗虫DH系转基因水稻生物检测二化螟

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