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氟马西尼有关物质的研究与测定

药学学报 2024年第6期59卷 1765-1772页

作者：缪雪艳杨园陆思思莫金梅黄琳凯韦佳均谷亦平桂林医学院公共卫生学院广西桂林541199 广西环境暴露组学与全生命周期健康重点实验室广西桂林541199 武汉药品医疗器械检验所国家药品监督管理局药物制剂质量研究与控制重点实验室湖北武汉430075

建立高效液相色谱法采用校正因子测定氟马西尼原料中有关杂质。采用Agilent Pursuit XRs C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以稀磷酸溶液、甲醇和四氢呋喃为流动相,等度洗脱。采用标准曲线法测定校正因子,通过校正因子计算杂质含量。并... 详细信息

建立高效液相色谱法采用校正因子测定氟马西尼原料中有关杂质。采用Agilent Pursuit XRs C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以稀磷酸溶液、甲醇和四氢呋喃为流动相,等度洗脱。采用标准曲线法测定校正因子,通过校正因子计算杂质含量。并用外标法验证校正因子方法的合理性、准确性和可行性。通过强制降解制备含有降解产物的氟马西尼降解溶液;采用LC-MS对降解产生的杂质进行结构确证。结果表明,氟马西尼和各杂质之间均分离良好,杂质A、杂质B、杂质D和杂质E的定量限分别为0.1699、0.3147、0.1439和0.2708 ng,检测限分别为0.0558、0.0969、0.0488和0.0890 ng,质量浓度分别在0.0349~7.8470、0.0387~8.7107、0.0346~7.7941和0.0324~7.2928μg·mL^(-1)内,线性关系良好(n=7)。平均回收率在98.25%~99.42%之间,相对标准偏差(RSD)均小于2.0%(n=9),方法的准确度高。采用外标法和校正因子法测定氟马西尼有关物质,两种方法结果一致。建立的HPLC方法准确度和灵敏度高、重复性好,可用于氟马西尼有关物质的测定。

关键词：氟马西尼校正因子有关物质降解产物高效液相色谱法

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环状RNA同源性蛋白激酶3靶向微RNA-338促进胶质瘤细胞侵袭、迁移的实验研究

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安徽医药 2024年第1期28卷 138-142,I0005页

作者：刘莹连海伟易伟张淑娣朱晓楠武汉大学人民医院神经外科湖北武汉430060

目的探讨人血清环状RNA同源性蛋白激酶3(CircHIPK3)靶向微RNA-338(miR-338)对胶质瘤细胞U251细胞侵袭、迁移的影响。方法2021年2-12月,在武汉大学人民医院科研中心将U251细胞分为空白(ng)组、CircHIPK3阴性对照(shcontrol)组、HIPK3敲减... 详细信息

目的探讨人血清环状RNA同源性蛋白激酶3(CircHIPK3)靶向微RNA-338(miR-338)对胶质瘤细胞U251细胞侵袭、迁移的影响。方法2021年2-12月,在武汉大学人民医院科研中心将U251细胞分为空白(ng)组、CircHIPK3阴性对照(shcontrol)组、HIPK3敲减(sh-CircHIPK3)组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测U251细胞中CircHIPK3、miR-338表达水平;Transwell检测细胞迁移与侵袭;划痕法检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞周期;通过Circular RNA Interactome、RegRNA2.0、CircBank Database网站预测CircHIPK3(ID:hsa_circ_0000284)的靶向miRNA并用双萤光素酶实验验证,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达。结果与ng组、sh-control组比较,sh-CircHIPK3组中CircHIPK3(1.00±0.00、1.06±0.26比0.56±0.06)表达水平显著降低(Png组、sh-control组比较,sh-CircHIPK3组MMP-2(1.31±0.23、1.33±0.20比0.61±0.05)、MMP-9(1.16±0.22、1.15±0.21比0.85±0.19)蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论沉默CircHIPK3通过靶向上调miR-338表达能抑制胶质瘤细胞U251细胞迁移和侵袭。

关键词：神经胶质瘤微RNA-338 人血清环状RNA同源性蛋白激酶3 迁移侵袭 U251细胞

Downregulation of EphB2 by RNA interference attenuates glial/fibrotic scar formation and promotes axon growth

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Neural Regeneration Research 2022年第2期17卷 362-369页

作者： Jian Wu zhen-Yu zhu zhi-Wei Fan ying Chen Ri-Yun Yang yi Li Department of Histology and Embryology Medical CollegeNantong UniversityNantongJiangsu ProvinceChina

The rapid formation of a glial/fibrotic scar is one of the main factors hampering axon growth after spinal cord injury. The bidirectional Eph B2/ephrin-B2 signaling of the fibroblast-astrocyte contact-dependent interaction is a trigger for glial/fibrotic scar formation. In the present study, a new in vitro model was produced by coculture of fibroblasts and astrocytes wounded by scratching to mimic glial/fibrotic scar-like structures using an improved slide system. After treatment with RNAi to downregulate Eph B2, changes in glial/fibrotic scar formation and the growth of VSC4.1 motoneuron axons were examined. Following RNAi treatment, fibroblasts and astrocytes dispersed without forming a glial/fibrotic scar-like structure. Furthermore, the expression levels of neurocan, ng2 and collagen I in the coculture were reduced, and the growth of VSC4.1 motoneuron axons was enhanced. These findings suggest that suppression of Eph B2 expression by RNAi attenuates the formation of a glial/fibrotic scar and promotes axon growth. This study was approved by the Laboratory Animal Ethics Committee of Jiangsu Province, China(approval No. 2019-0506-002) on May 6, 2019.

关键词： astrocyte EphB2 fibroblast glial/fibrotic scar microfluidic platform RNAi spinal cord injury VSC4.1 motoneuron

姜黄素预处理的骨髓间充质干细胞外泌体对骨关节炎软骨细胞的影响

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中华实验外科杂志 2024年第2期41卷 305-308页

作者：牛中科张翼王秀霞李树山郑州大学第一附属医院骨科郑州450052

目的观察姜黄素预处理的骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡以及关键基因、蛋白表达的影响。方法从郑州大学第一附属医院骨外科选择10例在2023年3月至2023年6月住院的患者, 在手术中提取人BMSCs(hBMSCs)和骨关... 详细信息

目的观察姜黄素预处理的骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡以及关键基因、蛋白表达的影响。方法从郑州大学第一附属医院骨外科选择10例在2023年3月至2023年6月住院的患者, 在手术中提取人BMSCs(hBMSCs)和骨关节炎软骨细胞进行培养, 其中股骨颈骨折患者5例, 年龄(56.8±6.0)岁, 女3例, 膝关节骨关节炎5例, 年龄(54.6±5.9)岁, 女4例。在BMSCs培养基中加入10 μmol/L姜黄素培养48 h后, 从BMSCs培养上清中利用差速离心法和超速离心法提取姜黄素外泌体, 并对其进行鉴定。将骨关节炎软骨细胞分为对照组、白细胞介素(IL)-1β组(1 ng/ml IL-1β预刺激)、IL-1β+姜黄素组(1 ng/ml IL-1β预刺激+游离姜黄素)、IL-1β+姜黄素外泌体组(1 ng/ml IL-1β预刺激+经过姜黄素预处理的BMSCs来源的外泌体), 并用噻唑蓝(MTT)法、半胱酰胺天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3/7活性试验检测姜黄素预处理外泌体对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测关键基因、蛋白的表达差异, 两组以上比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)。结果提取到的外泌体为粒径约90~120 nm之间的圆形膜性囊泡, 表达外泌体特异性标记物CD9、CD63。荧光显微镜下可见软骨细胞内的由红色荧光标记的外泌体。MTT法检测结果显示, 对照组设置为1.00, IL-1β组(0.50±0.03), IL-1β+姜黄素组(0.51±0.04), IL-1β+姜黄素外泌体组(0.83±0.03)。IL-1β+姜黄素外泌体组增殖能力明显高于IL-1β组(0.83±0.03比0.50±0.03, t=8.77, P<0.001), 差异有统计学意义。Caspase-3/7活性细胞凋亡检测显示, 对照组设置为1.00, IL-1β组(1.53±0.08), IL-1β+姜黄素组(1.51±0.05), IL-1β+姜黄素外泌体组(0.73±0.04)。IL-1β+姜黄素外泌体组凋亡率明显低于IL-1β组(0.73±0.04比1.53±0.08, t=11.89, P<0.001), 差异有统计学意义。RT-PCR结果显IL-1β+姜黄素外泌体组IL-6、MMP-13表达显著低于IL-1β组(0.59±0.04、0.39±0.03比1.00, 0.68±0.04、0.40±0.04比1.00, IL-1β组设置为1.00, t=25.24、22.11, P<0.01), COL2A1表达显著高于IL-1β组(2.39±0.17、2.91±0.17比1.00, t=16.19, P<0.01), 而IL-1β+姜黄素外泌体组与IL-1β+姜黄素组相比, COL2A1表达更高。结论姜黄素预处理的BMSCs外泌体能够使骨关节炎软骨细胞增殖增强, 凋亡减少, 减弱软骨基质分解, 促进软骨修复。

关键词：骨髓间充质干细胞外泌体姜黄素软骨细胞骨关节炎

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崖城21—1—3井钻井技术

天然气工业 1999年第1期19卷 79-82页

作者：段异生中国海洋石油南海西部公司钻采工艺研究所

南海西部石油公司自营钻探成功的崖城２１—１—３井，井深４６８８ｍ，是一口高温高压并存的天然气深探井。测试证实，地层孔隙压力达１０４．７０ＭＰａ，井底温度为２０６℃，压力梯度为２２．７６ｋＰａ／ｍ，地温梯度达４．４２℃... 详细信息

南海西部石油公司自营钻探成功的崖城２１—１—３井，井深４６８８ｍ，是一口高温高压并存的天然气深探井。测试证实，地层孔隙压力达１０４．７０ＭＰａ，井底温度为２０６℃，压力梯度为２２．７６ｋＰａ／ｍ，地温梯度达４．４２℃／１００ｍ。崖城２１—１—３井是在对同构造上的１井和２井的认识基础上，应用成熟、实用的先进技术，克服了施工中出现的复杂情况钻成的。通过分析总结１井和２井的资料，在充分认识地层压力和地层破裂压力的基础上，共提出４套井身结构方案，经过充分比较，采用方案四，并针对该方案的不足之处，采取相应的技术措施；在施工过程中遇到了严重的套管磨损问题，通过修补回接更换部分套管和对套管进行保护，保证了２４４ｍｍ套管下到设计井深；通过评估，选择了Ｍｉｌｐａｒｋ公司的Ｐｙｒｏ—ｄｒｉｌ高温水基钻井液体系，在实际使用中，通过严格控制膨润土含量，钻井液显示出良好的高温热稳定性；在密度为１．３３ｇ／ｃｍ３的钻井液中固１７８ｍｍ尾管，技术难度较高，固井获得成功，为以后积累了经验。在回顾这口井从设计、作业准备到现场施工的基础上，总结了这口井使用的技术。

关键词：天然气海上油气田钻井技术

重庆涪陵页岩气开采区麻溪河流域水和沉积物多环芳烃分布、来源及风险评价

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环境科学学报 2024年第4期44卷 133-144页

作者：张超秦超杰范希周俊鹏钱喆杨秀雯易佳佩赵亚辉刘伟祁士华陈伟中国地质大学(武汉)环境学院武汉430078 中国地质大学(武汉)地质调查研究院武汉430074 中国地质大学(武汉)生物地质与环境地质国家重点实验室武汉430078 中国地质大学(武汉)长江水科学湖北省重点实验室武汉430078

页岩气开采过程中产生的多环芳烃(PAHs)可能通过多种途径对开采区流域水环境产生威胁.为探明页岩气开采活动对周边水环境中PAHs的影响,本研究选取重庆涪陵麻溪河流域为研究对象,分析了区域内地表水及沉积物中PAHs的含量、组成特征和空... 详细信息

页岩气开采过程中产生的多环芳烃(PAHs)可能通过多种途径对开采区流域水环境产生威胁.为探明页岩气开采活动对周边水环境中PAHs的影响,本研究选取重庆涪陵麻溪河流域为研究对象,分析了区域内地表水及沉积物中PAHs的含量、组成特征和空间分布,对其污染来源进行了解析及对其生态风险进行了评估.结果表明,地表水及沉积物中PAHs的浓度范围分别为0.19~119 ng·L^(-1)、12.1~418 ng·g^(-1),处于低至中等污染水平.全流域地表水中PAHs呈麻溪河上游>枧溪河>麻溪河下游>麻溪河中游的空间分布特点;地表沉积物主要受到页岩气开采的影响,PAHs空间分布主要呈现麻溪河中游>麻溪河上游>枧溪河>麻溪河下游的特点.地表水及沉积物中PAHs呈现以低分子量PAHs为主的组成特征.特征比值和主成分分析的结果表明,PAHs主要来自石油源和石油类产品燃烧源.生态风险评估表明流域内部分PAH单体处于中风险水平,高分子量PAHs对水体生态风险贡献较大,低分子量PAHs对沉积物生态风险贡献较大.总体上,麻溪河水体中总PAHs呈中等生态风险等级;地表沉积物中PAHs处于生态环境低风险毒性,对生物造成的有害影响不明显.本研究结果为涪陵页岩气开产区PAHs的污染控制和风险评价提供了理论指导和技术支撑.

关键词：多环芳烃页岩气开采区地表水环境污染特征来源解析生态风险

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秋水仙碱对胶质瘤细胞系化疗敏感性的影响

中国临床神经外科杂志 2024年第2期29卷 97-104页

作者：吴宇朱馨艺江洪祥陈谦学武汉大学人民医院神经外科武汉430060

目的探讨秋水仙碱对胶质瘤细胞系化疗敏感性的影响及其机制。方法采用不同浓度的替莫唑胺(TMZ)处理人脑胶质瘤细胞系U87和A172细胞,构建TMZ耐药细胞系U87/TR和A172/TR,再使用秋水仙碱(10、30 ng/ml)干预1、2、3 d,采用细胞计数法、BrdU... 详细信息

目的探讨秋水仙碱对胶质瘤细胞系化疗敏感性的影响及其机制。方法采用不同浓度的替莫唑胺(TMZ)处理人脑胶质瘤细胞系U87和A172细胞,构建TMZ耐药细胞系U87/TR和A172/TR,再使用秋水仙碱(10、30 ng/ml)干预1、2、3 d,采用细胞计数法、BrdU法和流式细胞术检测细胞活力、细胞增殖和细胞周期。生物信息学方法分析胶质瘤组织差异表达的微小RNA(miRNAs),并预测其靶基因;然后,采用qRT-PCR检测U-87/TR和A172/TR细胞中这些miRNAs的表达情况,调控miRNAs的表达以观察秋水仙碱效应的变化。结果秋水仙碱显著抑制U87/TR和A172/TR细胞的增殖活力(Png/ml秋水仙碱显著增加TMZ对U87/TR和A172/TR细胞增殖的抑制效果(P<0.05),明显降低TMZ的IC50值(P<0.05)。生信分析显示,胶质瘤组织miR-330-3p、miR-491-5p、miR-6782-5p、miR-31-5p、miR-330-5p、miR-137和miR-433-3p呈差异表达,秋水仙碱明显上调U87/TR和A172/TR细胞miR-330-3p的表达(P<0.05)、明显抑制miR-330-3p靶基因ErbB的表达(P<0.05)。抑制miR-330-3p表达明显逆转秋水仙碱的生物学效应(P<0.05)。结论秋水仙碱可以抑制TMZ耐药的胶质瘤细胞的增殖,其机制可能涉及到miR-330-3p/ErbB信号通路的调节。

关键词：胶质瘤 U87细胞 A172细胞替莫唑胺秋水仙碱化疗敏感性

SHERLOCK-HBA检测方法的建立及其在血液鉴别中的应用

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生物化学与生物物理进展 2024年第8期51卷 1971-1982页

作者：姚乾威何红霞胡胜赵一霞罗雨季安全孙启凡山西医科大学法医学院太原030001 公安部鉴定中心法医遗传学公安部重点实验室北京100038 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071

目的基于规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/CRISPR关联蛋白质系统(Cas)技术建立检测血液特异性血红蛋白α(HBA)mRNA的方法,以准确、快速地鉴定血液样本。方法本研究通过设计和筛选血液特异性HBA mRNA上的CRISPR RNA(crRNA)短片段,基于C... 详细信息

目的基于规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/CRISPR关联蛋白质系统(Cas)技术建立检测血液特异性血红蛋白α(HBA)mRNA的方法,以准确、快速地鉴定血液样本。方法本研究通过设计和筛选血液特异性HBA mRNA上的CRISPR RNA(crRNA)短片段,基于CRISPR/Cas技术原理建立了SHERLOCK-HBA检测方法,对5种体液(包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌液、精液)共79份样本进行检测以评价所建方法鉴别血液的能力,并通过种属特异性实验、灵敏度实验、模拟混合斑检测、模拟降解样本检测、实际案件样本检测等进一步验证实验体系的法医学应用能力。结果该方法检测人源血液的相对荧光单位(RFU)值显著高于非血液(Png,且可成功检测出混合斑迹以及陈旧降解斑迹中的微量血液成分。结论本研究成功建立了一种基于CRISPR/Cas技术的SHERLOCK-HBA检测体系,能准确、灵敏地鉴定血液,操作简单、快速,为快速识别血液类样本提供了新的思路和参考。

关键词：法医遗传学血液鉴定血红蛋白α CRISPR/Cas SHERLOCK

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牡丹江医学院学报 2024年第4期45卷 1-4,39页

作者：史嘉翊宋旭东邱羽菲潘宇曹志琴吴丹牡丹江医学院生命科学学院黑龙江牡丹江157011

目的转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)潜态相关肽(latent assotiated peptide,LAP)及其截短体抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞纤维化研究。方法LAP全长命名为LAP-F,LAP截短体命名为LAP-B。用TGF-β1对LX-2处理进行纤维化模型的建立。分组后分别加入LAP-F和LAP-B多肽。control组:在正常情况下进行培养;TGF-β组:加入终浓度10 ng/mL的TGF-β1;TGF-β+LAP-F组:造模后加入终浓度60μg/mL的LAP-F;TGF-β+LAP-B组:造模后加入终浓度60μg/mL的LAP-B多肽。通过Western blot进行纤维化指标FN和α-SMA的蛋白水平检测。细胞免疫荧光实验检测细胞中FN和α-SMA的蛋白水平。结果Western blot结果显示,与control组细胞相比,TGF-β组细胞中纤维化相关蛋白FN的蛋白表达水平明显升高(P<0.001),纤维化相关蛋白α-SMA的蛋白表达也明显升高(P<0.01)。与TGF-β组相比,TGF-β+LAP-B组细胞中FN的蛋白表达明显降低(P<0.01),α-SMA的蛋白表达也明显降低(P<0.01)。与TGF-β组相比,TGF-β+LAP-F组细胞中FN的蛋白表达水平明显降低(P<0.01),α-SMA的蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与TGF-β组相比,TGF-β+LAP-F组细胞中FN和α-SMA蛋白荧光强度更低。免疫荧光的结果显示与control组细胞相比,TGF-β组细胞中FN和α-SMA的蛋白荧光强度更高,这意味着纤维化相关蛋白表达增多。与TGF-β组相比,TGF-β+LAP-B组细胞中FN和α-SMA蛋白荧光强度更低。与TGF-β组相比,TGF-β+LAP-F组细胞中FN和α-SMA蛋白荧光强度更低。结论LAP-F和LAP-B两种多肽都具有抗LX-2细胞纤维化能力,为后续研究提供基础。

关键词：肝纤维化 TGF-β LAP LX-2