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小鼠miRNA-203慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定

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宁夏医科大学学报 2011年第7期33卷 605-608,F0002页

作者：黄学兰徐广贤贾伟王妍柏董辉魏军宁夏医科大学检验学院银川750004 宁夏医科大学附属医院医学实验中心银川750004 宁夏大学银川750021

目的构建microRNA-203(miR-203)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。方法利用化学合成miR-203发夹前体结构RNA(small hairpin RNAs,hRNA),并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组p... 详细信息

目的构建microRNA-203(miR-203)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。方法利用化学合成miR-203发夹前体结构RNA(small hairpin RNAs,hRNA),并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组pSicoR-miR-203表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三个质粒共转染到heK-293T细胞,分别在48h和72h收获上清,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒尾静脉注射Balb/c小鼠,检测miR-203在小鼠体内的表达与分布情况。结果酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-203重组质粒,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为5×107 ***-1。重组病毒在Balb/c小鼠肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有表达。结论成功构建miR-203慢病毒表达载体,获得高效表达miR-203的慢病毒颗粒,为miR-203靶基因筛选及其功能的研究奠定了基础。

关键词： microRNA-203 慢病毒绿色荧光蛋白

金黄色葡萄球菌肠毒素C3过表达慢病毒载体的构建及鉴定

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中国免疫学杂志 2016年第9期32卷 1323-1326,1332页

作者：谢益欣王敏李先平杨敏李碰玲张婷婷宋欢董智慧唐爱国中南大学湘雅二医院检验科长沙410011 中南大学湘雅医学院医学检验系长沙410013

目的：构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增SEC3基因片段;用Age I酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;... 详细信息

目的：构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增SEC3基因片段;用Age I酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;转染293T细胞包装慢病毒,观察细胞荧光及Western blot检测慢病毒载体表达,HIV-1 p24 ELISA法测定慢病毒载体滴度。结果：获得目的基因,并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体,通过PCR及DNA测序鉴定,证明GV365-SEC3质粒构建正确;转染293T细胞后可观察到大量荧光细胞,经蛋白电泳得到29 k D大小的蛋白条带,与目的基因蛋白相符合,ELISA检测病毒载体滴度为5×10~8tu/ml。结论：成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体,为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素C3 慢病毒载体构建过表达

卡介菌多糖核酸对尖锐湿疣患者外周血TCRγδ^＋T细胞的影响及临床疗效

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中国医师杂志 2008年第2期10卷 177-180页

作者：刘冬先谭凌玲江文陈兴平陈映玲华中科技大学同济医学院附属同济医院皮肤科湖北武汉430030 湖北省松滋市人民医院

目的研究卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对尖锐湿疣（CA）患者外周血T细胞受体（TCR）γδ^＋T细胞的影响及临床疗效。方法采用流式细胞仪检测了20例正常对照者和60例CA患者（BCG-PSN组40例和病例对照组20例）治疗前后外周血CD3^＋T、TCRγ... 详细信息

目的研究卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对尖锐湿疣（CA）患者外周血T细胞受体（TCR）γδ^＋T细胞的影响及临床疗效。方法采用流式细胞仪检测了20例正常对照者和60例CA患者（BCG-PSN组40例和病例对照组20例）治疗前后外周血CD3^＋T、TCRγδ^＋T和TCRαβ^＋T细胞进行了检测；并对BCG-PSN治疗CA的临床疗效进行了分析。结果治疗前CA患者外周血CD3^＋T、TCRγδ^＋T细胞百分率低于正常对照（47.64±7．19vs68．92±6.15，t=12．00；2.27±0．68vs4.65±0．99，t=12．17；P〈0，01）；TCRαβ^＋T细胞百分率与正常对照组相比差异无统计学意义（23．55±4.71vs25．09±5．30，t=1.24，P〉0．05）。治疗后BCG-PSN组患者外周血CD3^＋T、TCRγδ^＋T、TCRαβ^＋T细胞百分率明显升高（70．21±9．64vs47、62±7.91，35.55±4.77vs23，54±4．71，4．52±1．21vs2．25±0．68，P〈0．01）；病例对照组无显著变化（P〉0．05）；BCG-PSN组与病例对照组治疗前后CD3^＋T、TCRγδ^＋T、TCRαβ^＋T细胞百分率差值比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。临床观察证荚BCG—PSN能够显著提高CA临床治愈率，降低CA的复发率。结论CA患者存在TCRγδ^＋T细胞缺陷；BCG—PSN可提高CA患者的TCRγδ^＋T细胞百分率，从而加强患者的T细胞免疫功能，以提高其临床疗效、减少其复发。

关键词：分枝杆菌牛甘露聚糖类/治疗应用尖锐湿疣/药物疗法受体抗原 T细胞 γ-δ

初步探索miR-27b-3p在普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤过程中的作用

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现代口腔医学杂志 2023年第4期37卷 230-236,272页

作者：朱羿霏那思家崔浩谢林洋张舟梁想方思雅屠军波西安交通大学口腔医院陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室西安交通大学口腔医院颌面外科门诊710004 西安交通大学口腔医院陕西省颅颌面精准医学研究重点实验室

目的研究miR-27b-3p在普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)的作用机制。方法用0、15、30、45、60、90μM普萘洛尔处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),检测最佳浓度。采用实时PCR检测miR-27b-3p及凋亡因子mRNA表达,通过Western blot法检测凋亡相关蛋白表达,利用双荧光素酶报告检测miR-27b-3p与Apaf-1的靶向关系。结果30μM普萘洛尔的最佳浓度作用后,miR-27b-3p表达下调,而Apaf-1、PARP、Caspase-9和Caspase-3表达上调,与敲除miR-27b-3p后结果相一致。上调miR-27b-3p后,细胞凋亡水平和凋亡因子表达被抑制。***基因数据库分析发现miR-27b-3p与Apaf-1mRNA的3’UTR匹配,荧光素酶实验结果显示miR-27b-3p与Apaf-1具有靶向关系。结论miR-27b-3p靶向抑制Apaf-1降低细胞凋亡水平,干扰普萘洛尔疗效。

关键词：婴幼儿血管瘤普萘洛尔 miR-27b-3p 凋亡蛋白酶活化因子-1 细胞凋亡

***联合ADA和TB-DNA在诊断结核性胸膜炎中的应用价值

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东南国防医药 2016年第5期18卷 483-485,504页

作者：李锐成刘昕阳沈建军邹菊贤张惠中第四军医大学唐都医院检验科陕西西安710038

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(***)技术联合胸水腺苷脱氨酶(ADA)和痰液结核杆菌(TB-DNA)测定对结核性胸膜炎的定性诊断,以达到早期诊断的目的。方法选取唐都医院2014年7月-2015年12月收治的86例结核性胸膜炎患者作为试验组,80例非结... 详细信息

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(***)技术联合胸水腺苷脱氨酶(ADA)和痰液结核杆菌(TB-DNA)测定对结核性胸膜炎的定性诊断,以达到早期诊断的目的。方法选取唐都医院2014年7月-2015年12月收治的86例结核性胸膜炎患者作为试验组,80例非结核性胸膜炎患者作为对照组,均行***检测,同时联合检查患者胸水ADA和痰液TB-DNA,比较***、ADA和TB-DNA检测与三者联合检测的应用价值。结果 86例结核性胸膜炎患者,***阳性率为84.88%(73/86),ADA阳性率为53.48%(46/86),痰液TB-DNA阳性率为31.40%(27/86),三者联合检测阳性率为93.02%(80/86)。结论 ***检测联合ADA和痰液TB-DNA检测对结核性胸膜炎的诊断有较高的敏感性,对疑似结核性胸膜炎患者的快速、准确诊断具有重要的辅助诊断价值。

关键词：胸腔积液腺苷脱氨酶结核感染T细胞斑点试验结核性胸膜炎临床诊断

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水稻本田分蘖期受旱对其生育影响的研究

四川农业大学学报 2000年第1期18卷 28-30页

作者：徐富贤熊洪洪松冉茂林代清炳涂少权四川省农科院水稻高粱研究所泸州646100 泸县云锦镇农技站泸县云锦镇646101

以汕优 6 3为材料 ,研究了本田分蘖期不同干旱时间与水稻生长关系。结果表明 :①栽秧当日开始受旱 2 0d以上 ,显著地抑制了分蘖的发生 ,表现为最高苗和有效穗数不足而减产 ;栽后 2 0d开始受旱 10d以上 ,颖花严重退化 ,以致着粒数和结实... 详细信息

以汕优 6 3为材料 ,研究了本田分蘖期不同干旱时间与水稻生长关系。结果表明 :①栽秧当日开始受旱 2 0d以上 ,显著地抑制了分蘖的发生 ,表现为最高苗和有效穗数不足而减产 ;栽后 2 0d开始受旱 10d以上 ,颖花严重退化 ,以致着粒数和结实率降低而减产 ;②水稻分蘖期受旱影响产量的土壤水分临界值为相对含水量 36 %左右 ;③从稻田开始受旱到土壤含水量下降到影响水稻产量的临界值所需积温为 312 76℃。

关键词：水稻分蘖期干旱产量生长发育抗旱栽培

弓形虫可溶性抗原混合液延长小鼠移植心脏存活时间

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中华器官移植杂志 2011年第2期32卷 87-90页

作者：王升方正明黄霞蔡兰军余道武方泽民唐燕雷罗鲜樟宫念樵明长生华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所教育部/卫生部器官移植重点实验室武汉430030

目的探讨弓形虫可溶性抗原混合液（STAgs）延长小鼠移植心脏存活时间的作用及其作用机制。方法通过在冰浴中超声粉碎弓形虫速殖子制备弓形虫STAgs。实验分为3组，每组受者9只。STAgs组和急性排斥反应（AR）组：供者为Balb／c小鼠，受者... 详细信息

目的探讨弓形虫可溶性抗原混合液（STAgs）延长小鼠移植心脏存活时间的作用及其作用机制。方法通过在冰浴中超声粉碎弓形虫速殖子制备弓形虫STAgs。实验分为3组，每组受者9只。STAgs组和急性排斥反应（AR）组：供者为Balb／c小鼠，受者为C57BL／6小鼠，移植前4d两组受者分别皮下注射STAgs5μg和磷酸盐缓冲液100ul，同系对照组供、受者均为C57BL／6小鼠，术前未进行任何处理。分组后建立小鼠颈部异位心脏移植模型。术后观察移植心脏存活时间，术后第7天每组处死3只受者，获取移植心脏行病理学检查观察排斥反应，采用免疫组织化学检测移植心中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞。结果同系移植组在观察终点100d时均存活，AR组和STAgs组移植心脏存活时间分别为（6．7±0．5）和（70．8±3．5）d，3组间两两比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。术后第7天，同系移植组、AR组和STAgs组移植心排斥反应分级分别为0级、Ⅲ～Ⅳ级和0～I级；免疫组织化学检测显示STAgs组CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞比例明显少于AR组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论弓形虫STAgs能显著延长小鼠移植心脏的存活时间，减轻移植心脏的排斥反应，具体机制可能与弓形虫STAgs可影响TH1／Tst2比例相关，也可能通过刺激机体产生脂氧素A4抑制树突状细胞活化发挥作用。

关键词：弓形虫属可溶性抗原心脏移植小鼠排斥反应

临床分离CRKP生物膜形成与分子分型及药敏特点

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深圳中西医结合杂志 2018年第13期28卷 1-4页

作者：涂浩鹏陈俊文张波胥志超钟婉莹陈宪娣陈重马孝煜白冰邓向斌潘伟光徐广健余治健邓启文李多云深圳大学附属南山医院广东深圳518052

目的:探讨临床分离耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)生物膜形成特点和多位点序列分型(MLST)及药敏的关系。方法:收集深圳大学附属南山医院2011–2016年分离出的CRKP,美国BD公司Phoenix TM100全自动细菌药敏鉴定仪检测常规药敏,采用聚合酶... 详细信息

目的:探讨临床分离耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)生物膜形成特点和多位点序列分型(MLST)及药敏的关系。方法:收集深圳大学附属南山医院2011–2016年分离出的CRKP,美国BD公司Phoenix TM100全自动细菌药敏鉴定仪检测常规药敏,采用聚合酶链式反应(PCR)方法分析其MLST分型,使用96孔结晶紫染色法进行生物膜光密度A(OD)值检测。结果:36株菌中检出24株生物膜阳性,12株生物膜阴性,其中19株弱阳性,5株中阳性,未发现强阳性菌株。MLST分布不太集中,MLST数量由高到低为37、11、15、273,没有序列分型(NT)数量最多,其中ST37和273都集中于生物膜弱阳性。生物膜阳性阿米卡星、氨曲南、氨苄西林、环丙沙星、头孢他啶、头孢噻肟和左氧氟沙星耐药率(含中介药敏)为8.3%、58.3%、95.8%、45.8%、58.3%、75.0%和50.0%。结论:碳青霉烯肺炎克雷伯菌生物膜形成能力比较强,在MLST中分布不集中。

关键词：耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌生物膜多位点序列分型结晶紫染色法

创新驱动下研究生导师教导现状评价分析及建议

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西北医学教育 2016年第2期24卷 228-230页

作者：叶晓宪赵自明严艳赵金媛林钟宇潘华峰广州中医药大学经济与管理学院广东广州510006 广东省中医研究所广东广州510000 广州中医药大学广东广州510006

目的调查分析创新驱动下导师在研究生创新能力培养过程中的角色与作用。方法从导师指导现状、对培养环节的重视程度、导师影响及导师评价等方面自编问卷,以广州中医药大学研究生为研究对象,进行问卷调查以及数据处理,分析研究生导师的... 详细信息

目的调查分析创新驱动下导师在研究生创新能力培养过程中的角色与作用。方法从导师指导现状、对培养环节的重视程度、导师影响及导师评价等方面自编问卷,以广州中医药大学研究生为研究对象,进行问卷调查以及数据处理,分析研究生导师的教导及培育现状,探讨导师在研究生创新能力培养过程中的角色和影响。结果研究生导师的教导与培育对学生形成有为型或无为型研究生具有重要意义。结论创新驱动战略下,导师对学生的导学、导研、导行、导德行为影响关键,应从导师遴选、考核、评价等多方面加强研究生导师管理。

关键词：导师创新能力聚类分析研究生