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OGG1 inhibition suppresses African swine fever virus replication

Virologica Sinica 2023年第1期38卷 96-107页

作者： Jie Fan Xinqian Lv Saixia Yang shuxian geng Jifei Yang Yaru Zhao Zhonghui Zhang Zhijie Liu Guiquan Guan Jianxun Luo Qiaoying Zeng Hong Yin Qingli Niu College of Veterinary Medicine Gansu Agricultural UniversityLanzhou730070China African Swine Fever Regional Laboratory of China(Lanzhou) State Key Laboratory of Veterinary Etiological BiologyKey Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu ProvinceLanzhou Veterinary Research InstituteChinese Academy of Agricultural SciencesLanzhou730046China Jiangsu Co-Innovation Center for the Prevention and Control of Important Animal Infectious Disease and Zoonosis Yangzhou UniversityYangzhou225009China

African swine fever virus(ASFV)is an important pathogen that causes a highly contagious and lethal disease in swine,for which neither a vaccine nor treatment is available.The DNA repair enzyme 8-oxoguanine DNA glycosylase 1(OGG1),which excises the oxidative base lesion 8-oxo-7,8-dihydroguanine(8-oxoG),has been linked to the pathogenesis of different diseases associated with viral infections.However,the role of OGG1-base excision repair(BER)in ASFV infection has been poorly investigated.Our study aimed to characterize the alteration of host reactive oxygen species(ROS)and OGG1 and to analyse the role of OGG1 in ASFV infection.We found that ASFV infection induced high levels and dynamic changes in ROS and 8-oxoG and consistently increased the expression of OGG1.Viral yield,transcription level,and protein synthesis were reduced in ASFV-infected primary alveolar macrophages(PAMs)treated by TH5487 or SU0268 inhibiting OGG1.The expression of BER pathway associated proteins of ASFV was also suppressed in OGG1-inhibited PAMs.Furthermore,OGG1 was found to negatively regulate interferonβ(IFN-β)production during ASFV infection and IFN-βcould be activated by OGG1 inhibition with TH5487 and SU0268,which blocked OGG1 binding to 8-oxoG.Additionally,the interaction of OGG1 with viral MGF360-14-L protein could disturb IFN-βproduction to further affect ASFV replication.These results suggest that OGG1 plays the crucial role in successful viral infection and OGG1 inhibitors SU0268 or TH5487 could be used as antiviral agents for ASFV infection.

关键词： African swine fever virus(ASFV) 8-oxoguanine DNA glycosylase 1(OGG1) 8-oxo-7,8-dihydroguanine(8-oxoG) Inhibitors Antiviral effect

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抑制TLR4表达在雷公藤内酯醇增强胃癌BGC823细胞对5-FU敏感性中的作用

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中国中西医结合消化杂志 2022年第4期30卷 263-267页

作者：耿静张树贤孙运良连云港市第一人民医院消化内科江苏连云港222000

目的:观察雷公藤内酯醇(TPL)是否可通过抑制Toll样受体4(TLR4)表达以增强胃癌BGC823细胞对5-FU的敏感性,并分析其相关的下游分子机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度TPL以及TPL联合5-FU对BGC823细胞的增殖的影响。将BGC823细胞分为对照... 详细信息

目的:观察雷公藤内酯醇(TPL)是否可通过抑制Toll样受体4(TLR4)表达以增强胃癌BGC823细胞对5-FU的敏感性,并分析其相关的下游分子机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度TPL以及TPL联合5-FU对BGC823细胞的增殖的影响。将BGC823细胞分为对照组、5-FU组(仅予5-FU)、TPL+5-FU组以及脂多糖(LPS)+TPL+5-FU组;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR4、磷酸化AKT(p-AKT)、Survivin、活性Caspase-3蛋白表达。结果:TPL可呈浓度-时间依赖性的抑制BGC823细胞增殖。与5-FU组比较,TPL联合5-FU后对BGC823细胞的抑制率明显增加(P<0.01),其5-FU的半数抑制浓度(IC_(50))显著降低(P<0.01)。与5-FU组比较,TPL+5-FU组凋亡细胞数和细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);而LPS+TPL+5-FU组凋亡细胞数以及细胞凋亡率均较TPL+5-FU组显著下降(P<0.05)。TPL+5-FU组的TLR4、p-AKT、Survivin蛋白表达均较5-FU组下降,而活性Caspase-3蛋白表达增加;与TPL+5-FU组比较,LPS+TPL+5-FU组的p-AKT、Survivin蛋白表达增加,活性Caspase-3蛋白表达减少。结论:TPL具有增强BGC823细胞对5-FU敏感性的作用,其机制与抑制TLR4表达,进而阻断PI3K/AKT通路、下调Survivin表达并促进Caspase-3活化有关。

关键词：雷公藤内酯醇 Toll样受体4 胃癌磷酸化AKT 活性Caspase-3

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汉语耕元部语音关系初探

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民族语文 2006年第5期 4-11页

作者：黄树先武汉华中科技大学中国语言研究所湖北430074

上古汉语耕部和元部一些字读法的相通应是方言现象。大约是齐、楚等地古方言部分耕部字*-eη读作*-an。古缅语和汉越语中也有类似的音变。

关键词：上古汉语语音关系方言现象古方言音变越语缅语

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小西葫芦黄花叶病毒山东南瓜和丝瓜分离物全基因组序列分析

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园艺学报 2019年第4期46卷 784-796页

作者：王健冀树娴王莹耿超李向东田延平山东农业大学植物保护学院山东省农业微生物重点实验室山东泰安271018 临沂大学山东临沂276000

在山东泰安采集到两个表现黄花叶症状的丝瓜和南瓜样品中检测到小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV);通过RT-PCR和RACE方法获得了两个分离物的全基因组序列,分别命名为CN:Cm:17(丝瓜分离物)和CN:Lc:17(南瓜分离物)... 详细信息

在山东泰安采集到两个表现黄花叶症状的丝瓜和南瓜样品中检测到小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV);通过RT-PCR和RACE方法获得了两个分离物的全基因组序列,分别命名为CN:Cm:17(丝瓜分离物)和CN:Lc:17(南瓜分离物)。结果表明,CN:Cm:17和CN:Lc:17基因组除Poly(A)尾巴外,分别含有9 593和9 591个核苷酸(Nucleotides,nt),通过多聚蛋白策略编码一个含3080个氨基酸的多聚蛋白。CN:Cm:17和CN:Lc:17在氨基酸水平上一致率为96.7%;CN:Cm:17与韩国分离物KR:RDA:07的氨基酸一致率最高(97.8%); CN:Lc:17与CN:CJLX30535:14和CN:spider131932:13的一致率最高(98.4%)。重组分析发现,CN:Lc:17具有显著重组事件,为KR:KR-PA:05和CN:Cm:17的重组体。基于多聚蛋白编码序列的系统进化聚类结果显示分组与分离物的地理起源存在密切相关性,所有中国分离物分别聚集在A-Ⅴ和A-Ⅵ亚组。

关键词：小西葫芦黄花叶病毒分离物全基因组序列系统发育分析重组分析

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D3S1289、D5S406、D6S277微卫星不稳定性与子宫颈癌的相关性

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包头医学院学报 2006年第1期22卷 4-5页

作者：石淑贤耿力包头医学院第一附属医院妇产科内蒙古包头014010

目的:探讨微卫星不稳定性(m icrosatellite instab ility,M I)与子宫颈癌的相关性。方法:22例子宫颈浸润性鳞癌石蜡标本,选取3、5和6号染色体上的3个微卫星位点D3S1289、D5S406、D6S277进行M I分析。结果:在子宫颈癌标本中3个位点均未发... 详细信息

目的:探讨微卫星不稳定性(m icrosatellite instab ility,M I)与子宫颈癌的相关性。方法:22例子宫颈浸润性鳞癌石蜡标本,选取3、5和6号染色体上的3个微卫星位点D3S1289、D5S406、D6S277进行M I分析。结果:在子宫颈癌标本中3个位点均未发现M I和杂合性缺失(LOH)的改变。结论:3个微卫星位点未见M I和LOH的改变,可能与病例少、位点少、种族及取样有关。

关键词：子宫颈癌微卫星不稳定性

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非洲猪瘟病毒pH359L蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

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中国兽医学报 2022年第3期42卷 432-438页

作者：杨赛霞赵亚茹刘志杰杨吉飞张忠辉樊洁耿抒贤吕欣倩敬梦瑶殷宏牛庆丽国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)/中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为制备抗非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV) pH359L蛋白的多克隆抗体,本研究以GenBank登录的ASFV HLJ/18毒株基因序列设计H359L基因的特异性引物,扩增H359L基因并构建pET-28a-H359L原核表达质粒,将其转化至大肠杆菌BL21(D... 详细信息

为制备抗非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV) pH359L蛋白的多克隆抗体,本研究以GenBank登录的ASFV HLJ/18毒株基因序列设计H359L基因的特异性引物,扩增H359L基因并构建pET-28a-H359L原核表达质粒,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达和镍柱亲和层析纯化蛋白后,免疫新西兰大白兔制备抗pH359L蛋白的多克隆抗体,通过Western blot和IFA试验对制备的抗体反应性进行测定。结果表明,构建的pET-28a-H359L重组质粒无点突变;重组蛋白pH359L在37℃以0.1 mmol/L的IPTG诱导表达量最高,其相对分子质量约为43.0 kDa,与预期大小一致;蛋白以包涵体形式表达;抗pH359L多克隆抗体效价达到1∶512 000;Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能够特异性识别ASFV感染猪肺泡巨噬细胞表达的天然pH359L蛋白。本研究为揭示ASFV pH359L蛋白的功能及ASFV相关的转录机制奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pH359L 原核表达多克隆抗体

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非洲猪瘟病毒RNA聚合酶亚基D205R基因生物信息学分析及多克隆抗体制备

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2042-2049页

作者：王国超赵亚茹张忠辉张玉龙白鸽耿抒贤樊洁杨吉飞关贵全殷宏罗建勋牛庆丽中国农业科学院兰州兽医研究所国家非洲猪瘟区域实验室(兰州)家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046 渭南市动物疫病预防控制中心渭南715400 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pD205R蛋白参与病毒基因的转录,属于ASFV RNA聚合酶,且与真核生物RNA聚合酶II RPB5亚基相似,为深入了解pD205R结构,功能及病毒与宿主之间的作用机制。利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公... 详细信息

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pD205R蛋白参与病毒基因的转录,属于ASFV RNA聚合酶,且与真核生物RNA聚合酶II RPB5亚基相似,为深入了解pD205R结构,功能及病毒与宿主之间的作用机制。利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公布的不同毒株的ASFV D205R基因序列进行分析,利用ExPASy、GOR4、AlphaFold软件对该蛋白的理化性质及结构预测进行分析,并对其原核表达和制备抗pD205R蛋白多克隆抗体。结果显示:在不同基因型间D205R基因高度保守;利用ExPASy在线软件预测pD205R蛋白理化性质其分子式为C_(1088)H_(1712)N_(278)O_(295)S_(8),属亲水性蛋白,稳定性差;二级结构及三级结构预测显示,α螺旋是其主要结构形式,占比为35.12%;同时以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板,构建原核表达质粒pET-28a-D205R并转入Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导重组蛋白成功表达,大小为23.3 ku。获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化,Western blot鉴定可与ASFV阳性血清发生特异性反应。免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体效价达到1∶51200,Western blot和IFA结果显示制备的多克隆抗体够特异性的识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的天然pD205R蛋白,为进一步研究D205R基因的功能及其在宿主与病毒互作中的作用奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pD205R蛋白原核表达多克隆抗体

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汾河上游人行悬索桥概念设计

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山西建筑 2016年第20期42卷 155-156页

作者：张东昕耿少波高安琪李淑贤刘遂健贾文文中北大学理学院山西太原030051

通过调研太原市新兰路漫水河桥的破损情况与通行情况,提出采用人车分流的方法进行此地区人行悬索桥的设计,并阐述了悬索桥的选址原则,从而达到人员安全通行的目的。

关键词：人行悬索桥漫水桥概念设计安全性

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疏肝滋肾汤治疗女性腰椎骨性关节炎40例

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西部中医药 2017年第2期30卷 79-81页

作者：薄云赵丽艳李淑贤王振宏王春英李红耿海霞唐山市丰润区第二人民医院中医科河北丰润064000 唐山市丰润区人民医院唐山市中医院唐山市丰南区中医院

目的:观察疏肝滋肾汤内服、外敷治疗女性腰椎骨性关节炎(LOA)的临床疗效。方法:将80例患者随机均分为观察组和对照组各40例。观察组采用疏肝滋肾汤口服、外敷治疗,对照组采用壮骨关节丸口服治疗,2组均连续治疗1个月。观察2组临床疗效及... 详细信息

目的:观察疏肝滋肾汤内服、外敷治疗女性腰椎骨性关节炎(LOA)的临床疗效。方法:将80例患者随机均分为观察组和对照组各40例。观察组采用疏肝滋肾汤口服、外敷治疗,对照组采用壮骨关节丸口服治疗,2组均连续治疗1个月。观察2组临床疗效及症状积分的变化情况和不良反应发生情况。结果:总有效率观察组为90.0%,对照组为77.5%,2组比较差异有统计学意义。腰痛、僵硬感、下肢痛及麻木、步行能力、直腿抬高试验、腰椎活动角度等症状积分治疗前后2组组内比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组未出现明显不良反应。结论:疏肝滋肾汤内服、外敷治疗LOA临床疗效显著,可改善腰椎功能,且安全可靠。

关键词：骨关节炎,腰椎疏肝滋肾汤临床疗效

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