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China Petroleum Processing & Petrochemical Technology 2016年第4期18卷 51-60页

作者： Li Zhilin shang weilong Liu Wei Li Hesheng College of Materials Science and Engineering Beijing University of Chemical Technology Beijing Key Laboratory of Membrane Science and Technology College of Chemical Engineering Beijing University of Chemical Technology Research Institute of Yanshan Petrochemical Co. SINOPEC

Laccase was immobilized on the ceramic-chitosan composite support by using glutaraldehyde as the cross-linking reagent. The immobilization conditions and characterization of the immobilized enzyme were investigated. The immobilization of laccase was successfully realized when 3.0 mL of 1.25 mg/mL of laccase at a pH value of 4.0 reacted with 0.15 g of ceramic-chitosan composite support(CCCS) at 4 ℃ for 24 h. The immobilized enzyme exhibited a maximum activity at pH 3.0. The optimal temperatures for immobilized enzyme were 25 ℃ and 50 ℃. The K_m value of immobilized laccase for ABTS was 66.64 μmol/L at a pH value of 3.0 at 25 ℃. Compared with free laccase, the thermal, operating and storage stability of immobilized laccase was improved after the immobilization.

关键词： ceramic-chitosan composite support immobilization laccase enzyme activity

Optimizing a high-sensitivity NanoLuc-based bioluminescence system for in vivo evaluation of antimicrobial treatment

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mLife 2023年第4期2卷 462-478页

作者： weilong shang Zhen Hu Mengyang Li Yuting Wang Yifan Rao Li Tan Juan Chen Xiaonan Huang Lu Liu He Liu Zuwen Guo Huagang Peng Yi Yang Qiwen Hu Shu Li Xiaomei Hu Jiao Zou Xiancai Rao Department of Microbiology College of Basic Medical SciencesKey Laboratory of Microbial Engineering Under the Educational Committee in ChongqingArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina Department of Microbiology School of MedicineChongqing UniversityChongqingChina Department of Emergency Medicine Xinqiao HospitalArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina Department of Pharmacy Xinqiao HospitalArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina Department of Military Cognitive Psychology School of PsychologyArmy Medical University(Third Military Medical University)ChongqingChina.

Focal and systemic infections are serious threats to human *** models enable the development of new drugs and therapeutic *** vivo,animal bioluminescence(BL)imaging has been used with bacterial reporter strains to evaluate antimicrobial treatment ***,high-sensitivity bioluminescent systems are required because of the limited tissue penetration and low brightness of the BL signals of existing ***,we report that NanoLuc(Nluc)showed better performance than LuxCDABE in ***,the retention rate of plasmid constructs in bacteria was *** construct stable Staphylococcus aureus reporter strains,a partner protein enolase(Eno)was identified by screening of *** strain USA300 for fusion expression of Nluc-based luciferases,including Nluc,Teluc,and *** substrates,such as hydrofurimazine(HFZ),furimazine(FUR),and diphenylterazine(DTZ),were used to optimize a stable reporter strain/substrate pair for BL *** USA300/Eno-Antares2/HFZ produced the highest number of photons of orange-red light in vitro and enabled sensitive BL tracking of *** in vivo,with sensitivities of approximately 10 CFU from mouse skin and 750 CFU from mouse ***300/Eno-Antares2/HFZ was a powerful combination based on the longitudinal evaluation of the therapeutic efficacy of *** optimized *** Eno-Antares2/HFZ pair provides a technological advancement for the in vivo evaluation of antimicrobial treatment.

关键词： antimicrobial evaluation bioluminescence imaging Nluc-based luciferases Staphylococcus aureus therapeutic efficacy

基于Antares2的金黄色葡萄球菌生物发光示踪系统的构建

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陆军军医大学学报 2023年第5期45卷 393-399页

作者：胡珍尚伟龙饶贤才陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038

目的构建融合型荧光素酶标记的金黄色葡萄球菌示踪菌株,建立金葡菌示踪系统。方法采用同源重组技术将融合型荧光素酶Antares2编码基因敲入到金葡菌USA300基因组中,与金葡菌烯醇酶编码基因eno融合,构建稳定表达的示踪菌株。将示踪菌株与... 详细信息

目的构建融合型荧光素酶标记的金黄色葡萄球菌示踪菌株,建立金葡菌示踪系统。方法采用同源重组技术将融合型荧光素酶Antares2编码基因敲入到金葡菌USA300基因组中,与金葡菌烯醇酶编码基因eno融合,构建稳定表达的示踪菌株。将示踪菌株与不同的底物混合,检测生物发光强度差异,筛选合适的菌株/底物示踪系统,并探究其在体外和体内的敏感性。结果通过构建基因敲入质粒pBT2-eno-antares2,转化金葡菌USA300菌株中进行基因敲入菌株筛选,经DNA测序和Western blot鉴定示踪菌株USA300/Eno-Antares2构建成功。细菌生长曲线和溶血实验表明所构建的示踪菌株与野生型USA300无明显差异。将示踪菌与DTZ、FUR和HFZ底物混合,肉眼均可观察到发光。不同浓度不同底物分析显示,USA300/Eno-Antares2/HFZ组成的系统发光性能最优,体外发光示踪的敏感性为50 CFU(菌落形成单位),小鼠体内示踪敏感性为100 CFU。结论金葡菌USA300/Eno-Antares2/HFZ示踪系统性能佳,可用于金葡菌感染、定植、播散等研究。

关键词：金黄色葡萄球菌生物发光示踪系统荧光素酶

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Web2.0环境下的信息素养问题研究

情报杂志 2010年第9期29卷 195-199页

作者：尚伟龙王丽娜南开大学商学院天津300191

研究目的是通过解决Web2.0环境下的用户信息素养问题,推动Web2.0的更好发展。采用文献调查法进行归纳演绎并结合Web2.0重新定义了信息素养的组成部分和指标等,然后结合这些基本内容,为增强社会成员的信息素养提供了一些参考性意见等。

关键词： Web2.0 信息素养互联网

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陶瓷-壳聚糖复合材料固定真菌漆酶

北京化工大学学报（自然科学版） 2009年第4期36卷 84-88页

作者：尚伟龙刘伟王龙波北京化工大学化学工程学院北京100029

以陶瓷为第一载体,壳聚糖为二次载体,戊二醛为交联剂,采用共价结合和吸附联用法制备固定化漆酶。考察了漆酶固定化的影响因素,并对固定化漆酶的性质进行了研究。结果表明,漆酶固定化的适宜条件为0.15g壳聚糖-陶瓷复合载体,加入3mL1.25mg... 详细信息

以陶瓷为第一载体,壳聚糖为二次载体,戊二醛为交联剂,采用共价结合和吸附联用法制备固定化漆酶。考察了漆酶固定化的影响因素,并对固定化漆酶的性质进行了研究。结果表明,漆酶固定化的适宜条件为0.15g壳聚糖-陶瓷复合载体,加入3mL1.25mg/mL漆酶磷酸盐缓冲溶液(0.1mol/L,pH4.0),在4℃固定24h。酶的固定化效率是51.0%,固定化酶的酶活是55.87U/g,最适pH为3.0,最适温度分别为25℃和50℃。该固定化酶具有良好的贮存和操作稳定性。在pH3.0,温度25℃时,固定化酶对2,2-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐的表观米氏常数为66.64μmol/L。

关键词：陶瓷-壳聚糖固定化漆酶酶活力

WalK(S221P)突变影响万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌毒力的作用

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第三军医大学学报 2020年第3期42卷 219-228页

作者：饶一凡毛旭虎彭华刚尚伟龙饶贤才西南大学生命科学学院现代生物医药研究所三峡库区生态环境与生物资源省部共建国家重点实验室培育基地重庆400715 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院临床微生物学与免疫学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038

目的探讨WalK(S221P)突变对万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus, VISA)毒力的影响及其机制。方法采用转录组测序比较VISA菌株XN108及其WalK(S221P)回复菌株K65的毒力基因表达差异,利用RT-qPCR检测菌株毒力基因的表达变化,溶血实验比较菌株的溶血能力。采用同源重组技术在金葡菌中引入WalK(S221P)突变,E-test检测菌株的耐药性。凝胶阻滞实验(EMSA)检测WalKR对靶基因调控区的结合能力。结果转录组测序结果显示,K65中多种重要毒力因子基因的表达上调(P<0.01),调控系统Agr的活性增强,溶血能力恢复。将WalK(S221P)突变引入USA300菌株后,其耐药性升高,毒力因子表达水平及溶血活性降低;EMSA证实WalKR对金葡菌Agr有直接调控作用;敲除agrA基因后,引入WalK(S221P)突变仍可使USA300agrA对万古霉素的耐药性升高,但毒力基因的表达水平及溶血活性改变不显著。结论 WalK(S221P)突变影响VISA毒力是通过Agr实现的,该突变导致WalKR的活性降低,激活Agr的能力下降,最终影响VISA菌株的毒力。

关键词：万古霉素中等耐药金黄色葡萄球菌二元调控系统 WalKR WalK(S221P)突变毒力

登革病毒感染人原代树突状细胞(CD209,-139A/-336A)模型的建立

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第三军医大学学报 2017年第4期39卷 323-327页

作者：杨裔方昕胡珍杨杰袁吉振尚伟龙饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的建立以人原代树突状细胞(dendritic cells,DCs)为宿主的登革病毒(dengue virus,DENV)感染模型。方法采集基因型为CD209,-139A/-336A的人抗凝血标本,分离获得DCs前体细胞,利用rh GM-CSF及rh IL-4诱导,获得未成熟DCs。瑞氏染色鉴定DC... 详细信息

目的建立以人原代树突状细胞(dendritic cells,DCs)为宿主的登革病毒(dengue virus,DENV)感染模型。方法采集基因型为CD209,-139A/-336A的人抗凝血标本,分离获得DCs前体细胞,利用rh GM-CSF及rh IL-4诱导,获得未成熟DCs。瑞氏染色鉴定DCs的形态,流式细胞术鉴定DCs的分化效率,淋巴细胞增殖实验鉴定DCs的生物学功能。以I型登革病毒GZ2002株为模式病毒进行病毒感染实验,建立并评估以人原代DCs为宿主的登革病毒感染模型。结果分离获得的DCs前体细胞经细胞因子刺激后成功分化为未成熟DCs,分化效率高达90%。获得的DCs具有典型的细胞形态及生物学功能,可有效刺激淋巴细胞增殖。登革病毒GZ2002株能成功感染诱导获得的原代DCs,促进DCs成熟,并复制产生感染性子代病毒,证明细胞感染模型成功建立。结论成功建立以DCs为宿主的登革病毒感染模型。

关键词：登革病毒树突状细胞细胞模型 CD209

SigB(Q225P)突变促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成

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第三军医大学学报 2017年第8期39卷 711-717页

作者：刘慧尚伟龙彭华刚周坤胡珍周人杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆430037

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌Sig B(Q225P)突变对其生物被膜形成能力的影响。方法比较临床分离金葡菌(XQ株)与实验室传代获得菌落颜色变白之XQW株的生物学特性,通过结晶紫染色法以及激光共聚焦检测菌株的生物被膜形成。进行XQ及XQW全基因组测序,比较相关基因,寻找突变位点。分别扩增sigB(Q225P)基因及其上游片段,经酶切后连接穿梭载体p BT2,构建同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P),电转化至金葡菌RN4220,再将经RN4220修饰后的质粒电转入Newman。利用p BT2质粒对温度敏感的特点筛选Newman-sigB(Q225P)。利用同样的方法构建sigB敲除菌株Newman-△sigB,并构建回补菌株Newman-△sigB/sigB以及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。比较这些菌株的生物被膜形成差异。结果 XQW株在液体培养基中呈絮状生长,结晶紫法以及激光共聚焦检测结果显示其生物被膜形成能力显著强于野生株,全基因组测序和比较发现XQW的sigB基因发生(Q225P)突变。构建的同源重组质粒p BT2-sigB(Q225P)及p BT2-△sigB转化金葡菌Newman后,经筛选,获得Newman-sigB(Q225P)及Newman-△sigB菌株;回补质粒p LI50-sigB及p LI50-sigB(Q225P)转化Newman-△sigB,筛选获得回补菌株Newman-△sigB/sigB及Newman-△sigB/sigB(Q225P)。经过结晶紫染色法及激光共聚焦测定生物被膜,发现Newman-sigB(Q225P)较野生株的生物被膜形成能力显著升高,与XQW的生物被膜形成能力强于XQ野生型的表型相一致;Newman-△sigB/sigB(Q225P)的生物被膜形成能力明显高于Newman-△sigB/sigB。结论 Sig B(Q225P)具有促进金葡菌生物被膜形成的能力。

关键词：金黄色葡萄球菌生物被膜同源重组 sigB

脂蛋白SA2275抗体治疗金黄色葡萄球菌脑脓肿的实验初探

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第三军医大学学报 2020年第16期42卷 1655-1662页

作者：郑颖杨裔彭华刚饶一凡胡珍胡启文钟莲梅饶贤才尚伟龙周人杰昆明医科大学第一附属医院神经内科昆明650032 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 西南大学生命科学学院现代生物医药研究所三峡库区生态环境与生物资源省部共建国家重点实验室培育基地重庆400715 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院急诊部重庆400037

目的探讨脂蛋白特异性抗体通过血脑屏障及其在抑制金黄色葡萄球菌脑脓肿形成中的作用。方法利用大肠埃希菌表达并纯化重组金葡菌脂蛋白SA2275,制备特异性小鼠多克隆抗体(anti-SA2275)。制作金葡菌感染脑脓肿模型,利用ELISA法检测经腹腔... 详细信息

目的探讨脂蛋白特异性抗体通过血脑屏障及其在抑制金黄色葡萄球菌脑脓肿形成中的作用。方法利用大肠埃希菌表达并纯化重组金葡菌脂蛋白SA2275,制备特异性小鼠多克隆抗体(anti-SA2275)。制作金葡菌感染脑脓肿模型,利用ELISA法检测经腹腔注射的anti-SA2275在小鼠脑组织中的滴度,评估抗体通过血脑屏障的能力;再利用梯度稀释细菌计数法检测脑脓肿中的细菌载量,对脑脓肿进行连续病理切片检测脑脓肿的大小,评价抗体anti-SA2275治疗金葡菌脑脓肿的效果。结果成功获得高纯度SA2275重组蛋白;免疫小鼠获得anti-SA2275,效价为1:51200;anti-SA2275注射金葡菌脑脓肿模型小鼠后,在动物脑组织中检测到抗体的存在;治疗组小鼠脑脓肿大小和菌载量显著低于阴性对照组。结论在金葡菌感染小鼠所致的脑脓肿形成过程中,脂蛋白SA2275特异性抗体可以通过血脑屏障分布至脑组织,显著抑制脑脓肿的形成及细菌的定植,具有治疗金葡菌脑脓肿的应用前景。

关键词：金黄色葡萄球菌脑脓肿抗体血脑屏障

The first extra-large helium-rich gas field identified in a tight sandstone of the Dongsheng Gas Field,Ordos Basin,China

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Science China Earth Sciences 2022年第5期65卷 874-881页

作者： weilong PENG Quanyou LIU Ying ZHANG Huichong JIA Dongya ZHU Qingqiang MENG Xiaoqi WU shang DENG Yongsheng MA State Key Laboratory of Shale Oil and Gas Enrichment Mechanisms and Effective Development Beijing 100083China Petroleum Exploration and Production Research Institute SINOPECBeijing 100083China Exploration and Production Research Institute SINOPEC North China BranchZhengzhou 450006China Ma Yongsheng’s Laboratory Beijing 100083China SINOPEC Company Limited Beijing 100728China

Helium gas is a scarce but important strategic resource,which is usually associated with natural ***,only one extra-large helium-rich gas field has been found in China:the Hetianhe Gas Field in the Tarim *** paper reports a new example,the Dongsheng Gas Field(DGF)in the Ordos *** this study,92 natural gas samples from the DGF were analyzed for helium content and isotope composition using isotope mass *** natural gas samples were found to have an average helium content of 0.133%,with 65(70.7%)of the samples having a helium content of 0.1%or *** on the proven natural gas reserves of the DGF,the proven geological helium reserves were calculated to be 1.96×10^(8)m^(3),suggesting that it represents the first extra-large helium-rich natural gas reservoir to be hosted in tight sandstone in *** ^(3)He/^(4)He ratios of 5 natural gas samples from the DGF are within the range of 3.03×10^(−8)–3.44×10^(−8).Therefore,the helium in the gas field is thought to be of typical crustal origin and to have formed in the granitic basement that is rich in uranium and *** accumulation of helium-rich natural gas was controlled by regional tectonic *** along the fault connecting the reservoir with the basement caused release of the helium gas,which entered the overlying strata along the fault and accumulated with conventional hydrocarbon *** on the structural background and the distribution of helium source rocks in the Ordos Basin,the main helium source rocks with high exploration potential are located in deep strata within the north and middle parts of the basin.

关键词： Helium gas Granitic basement Radiogenesis Dongsheng Gas Field Ordos Basin

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