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Effect of topotecan on retinocytoma cell apoptosis and expression of Livin and PTen

Chinese Medical Journal 2013年第2期126卷 340-344页

作者： ZHANG Meng shan bao-en YUAN Nai-fen LIU Wei HebeiMedical University Fourth Hospital Department of Ophthalmology Hebei 05001 lChina HebeiMedical University Fourth Hospital ResearchCenter Hebei 05001 lChina HebeiMedical'University Fourth Hospital Department of Oncology Hebei 050011China

Background Retinocytoma （RB） is a very common intraocular malignant tumor during infancy. Chemotherapy has gradually been used as the first-line treatment for intraocular RB in recent years. In this study, Livin and PTen expressions were observed in the RB tissue, along with the growth-inhibiting and apoptosis-induced effects of topotecan （TPT） on RB HXO-Rb44 cell strain. This study aimed to investigate the antigrowth effects of TPT on RB cell strain HXO-Rb44. Methods Max-VisionTM rapid immunohistochemistry was adopted to detect Livin and PTen expressions in the normal retina and in RB, and their relationship with RB clinicopathologic features was analyzed. Human RB cell strain HXO-Rb44 was cultivated and passaged. MTT method was used to measure the survival rates of HXO-Rb44 cell strains under various TPT concentrations. IC50 values were calculated. Flow cytometry was used to detect the effects of various TPT concentrations on HXO-Rb44 cell apoptosis. Western blotting was used to detect the differences of Livin and PTen protein expressions during cell apoptosis. Results The positive expressions of Livin and PTen in the RB group were obviously different from those in the normal control group. In RB tissue, Livin expression was relevant to PTen expression. TPT could significantly induce the occurrence of cell apoptosis and had a dependent relationship with drug concentration. Livin and PTen expression levels varied with the extension of the effect time of TPT based on Western blotting analysis. Conclusions Livin and PTen have high and low expression levels in the RB tissue, respectively. Both of them have key roles in RB occurrence and development. TPT could induce human RB cell strain HXO-Rb44 cell apoptosis, and its mechanism is associated with the inhibition of Livin and PTen expressions.

关键词： retinocytoma Livin PTen immunohistochemistry flow cytometry, Western blotting

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Despite shared susceptibility loci, esophageal squamous cell carcinoma embraces more familial cancer than gastric cardia adenocarcinoma in the Taihang Mountains high-risk region of northern central China

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Chinese Medical Journal 2013年第1期126卷 55-60页

作者： Wen Deng-gui YANG Yi Wen Xiao-duo shan bao-en Department of Oncology Hebei Tumor Hospital and the Fourth Hospital of Hebei Medical University Shijiazhuang Hebei 050011 China Department of Tumor Image Hebei Tumor Hospital and the Fourth Hospital of Hebei Medical University Shijiazhuang Hebei 050011 China

Background In China, esophageal squamous cell carcinoma （ESCC） and gastric cardia adenocarcinoma （GCA） share susceptibility loci, but different rates of multiple primary cancer and male/female ratio suggest the proportion of familial cancer is not equal. Methods The percent of cases with a positive family history, median onset age, rate of multiple primary cancer, and male/female ratio associated with upper, middle, lower third ESCC and GCA were compared to reveal the proportion of familial cancer. The 7267 subjects analyzed constituted all ESCC and GCA cases in whom the cancer was resected with cure intention between 1970 and 1994 at the 4th Hospital of Hebei Medical University. Results A positive family history for cancer was most often associated with the multiple primary ESCC and/or GCA cases, e.g. with 42% of the males and 59% of the females. For upper, middle, lower third ESCC and GCA, the percent of cases with a positive family history decreased by 38.5%, 26.3%, 26.5%, and 11.2% in males （P 〈0.000） and 25.0%, 22.3%, 23.9%, and 9.8% in females （P 〈0.0001）. Median onset age increased from 49, 52, 55, to 56 years old in males and from 50, 53, 55, to 56 years old in females （ both P 〈0.0001） for upper, middle, lower third ESCC and GCA. Male/female ratio increased from 2.2, 2.1, 2.2, to 6.2：1 for upper, middle, lower third ESCC and GCA （P〈0.0001）. For upper, middle, lower third ESCC and GCA, the percent of multiple primary cancers decreased from 21.2%, 2.3%, 2.2%, to 1.5% in males and from 14.3%, 2.4%, 3.4%, to 3.1% in females. The preponderance of males, smoking, drinking, or onset-age 〉50 years was significantly higher in GCA than in ESCC, and the difference in the rates of multiple primary cancers between the preponderant and the non-preponderant cases was significant in GCA, but not in ESCC, suggesting non-equal requirement for genetic susceptibility when environmental hazards did not exist. Conclusions The proportion of familial cancer in upper gastrointestin

关键词： esophageal squamous cell carcinoma gastric cardia adenocarcinoma multiple primary cancer onset age family history male/female ratio

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IL-12家族细胞因子:肿瘤免疫治疗研究的热点分子

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中国肿瘤生物治疗杂志 2011年第3期18卷 239-243页

作者：单保恩河北医科大学第四医院科研中心暨河北省肿瘤研究所石家庄050011

利用细胞因子提高宿主免疫能力、破坏肿瘤细胞的免疫逃逸功能是肿瘤生物治疗的重要策略。IL-12细胞因子家族是具有高度同源性的一类异源二聚体细胞因子,包括IL-12、IL-23、IL-27和IL-35,它们均由活化的抗原提呈细胞如巨噬细胞和树突状... 详细信息

利用细胞因子提高宿主免疫能力、破坏肿瘤细胞的免疫逃逸功能是肿瘤生物治疗的重要策略。IL-12细胞因子家族是具有高度同源性的一类异源二聚体细胞因子,包括IL-12、IL-23、IL-27和IL-35,它们均由活化的抗原提呈细胞如巨噬细胞和树突状细胞产生,在辅助性T细胞分化过程中起重要作用。IL-12通过活化ATAT4信号转导途径产生IFNγ-促进细胞免疫反应;IL-27主要活化STAT1途径增强细胞和体液免疫反应;外源性IL-23可以产生抗肿瘤效应,而内源性IL-23通过活化STAT3诱导产生IL-17,从而促进肿瘤的发生和发展;IL-35可能是潜在的免疫抑制性细胞因子。总之,IL-12细胞因子家族成员在肿瘤免疫反应中各自发挥不同的作用,已成为肿瘤免疫治疗和研究的热点分子。

关键词：细胞因子 IL-12细胞因子家族肿瘤生物治疗白细胞介素肿瘤免疫

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斑蝥酸钠注射液治疗癌性胸腔积液的临床观察

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中国中西医结合杂志 2005年第5期25卷 451-453页

作者：史健魏素菊单保恩河北医科大学第四医院石家庄050011

目的探讨斑蝥酸钠注射液治疗癌性胸腔积液的疗效、对患者生存质量的影响及其细胞免疫功能变化。方法60例合并胸腔积液的晚期癌症患者,随机分为试验组和对照组,每组30例。对所有患者行胸腔穿刺引流胸腔积液后,试验组患者胸腔给予斑蝥酸... 详细信息

目的探讨斑蝥酸钠注射液治疗癌性胸腔积液的疗效、对患者生存质量的影响及其细胞免疫功能变化。方法60例合并胸腔积液的晚期癌症患者,随机分为试验组和对照组,每组30例。对所有患者行胸腔穿刺引流胸腔积液后,试验组患者胸腔给予斑蝥酸钠注射液50ml治疗,并同时静脉注射斑蝥酸钠50ml,每天1次,连续15天。对照组患者胸腔应用化疗药物或白介素2治疗。3天后,均再次行穿刺给药治疗1次;4周后,应用B超定量测定两组患者的胸腔积液量,评价胸腔积液治疗的疗效;并对两组患者的生存质量、体重及其治疗前后T淋巴细胞亚群等进行比较。结果试验组患者的胸腔积液疗效明显提高(P <0 . 0 1) ,生存质量明显提高(P <0 . 0 5)。试验组患者外周血CD3 +、CD4+、CD4+/CD8+较治疗前提高(P <0. 0 1)。两组比较CD3 +、CD4+明显升高,CD8+明显降低及CD4+/CD8+比值明显升高,差异均有显著性(P<0 . 0 5或P <0 . 0 1)。结论斑蝥酸钠注射液是一种治疗癌症患者胸腔积液,改善患者生存质量,提高机体细胞免疫功能的良好中草药制剂。且胸腔与静脉同时使用比单独胸腔注射效果为好。

关键词：斑蝥酸钠注射液癌性胸腔积液 CD4^+/CD8^+比值临床观察机体细胞免疫功能 T淋巴细胞亚群 CD3^+ 生存质量免疫功能变化晚期癌症患者胸腔穿刺引流白介素-2 中草药制剂静脉注射化疗药物定量测定治疗前后 0.05

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syk真核表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第1期24卷 3-5页

作者：单保恩宋小天齐义新河北医科大学第四医院科研中心河北石家庄050011

目的:构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在细胞中稳定表达,以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响。方法:以RT-PCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表... 详细信息

目的:构建非受体蛋白酪氨酸激酶Syk的真核表达载体,转染人乳腺癌细胞,使其在细胞中稳定表达,以研究Syk对人乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子表达的影响。方法:以RT-PCR法从人乳腺癌细胞株MDA-MB-468扩增出syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO中。对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后,以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,经G418筛选,构建syk基因稳定表达的细胞株,通过Western blot、RT-PCR和流式细胞术检测转染乳腺癌细胞Syk、MHC-Ⅰ及ICAM-Ⅰ的表达。结果:构建了hsyk真核表达载体pcDNA3.1D/V5-His-TOPO/hsyk,并在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得稳定表达。表达Syk的MDA-MB-231细胞同时可以高表达MHC-Ⅰ和ICAM-Ⅰ。结论:成功地构建了syk真核表达载体并在真核细胞中表达,为进一步的肿瘤免疫研究奠定了实验基础。

关键词： Syk真核表达乳腺癌细胞 MHC—Ⅰ

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芳香化酶基因表达调控与乳腺癌关系的研究进展

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中国肿瘤临床 2005年第8期32卷 478-480页

作者：季艳霞姜达单保恩河北医科大学第四医院肿瘤内科石家庄市050011

芳香化酶是绝经后乳腺局部雌激素生成的限速酶,其编码基因CYP19的结构、功能和表达具有组织特异性。在多种调控因素影响下,该基因通过选择性利用不同的启动子及相应的外显子Ⅰ进行组织特异性调节,影响芳香化酶表达。CYP19基因表达在正... 详细信息

芳香化酶是绝经后乳腺局部雌激素生成的限速酶,其编码基因CYP19的结构、功能和表达具有组织特异性。在多种调控因素影响下,该基因通过选择性利用不同的启动子及相应的外显子Ⅰ进行组织特异性调节,影响芳香化酶表达。CYP19基因表达在正常的乳腺组织中主要是通过启动子PⅠ.4,起决定作用的外显子Ⅰ是1b;在癌变组织则主要是启动子PⅡ、PⅠ.3,变为外显子1c占主导地位。CYP19基因的特异性表达为从基因水平治疗乳腺癌提供了理论基础。

关键词：乳腺癌芳香化酶CYP19基因基因治疗

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雷氏大疣蛛毒液对人肝癌HepG2细胞p21基因表达的影响(英文)

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生理学报 2007年第1期59卷 58-62页

作者：高莉沈金宝孙捷单保恩河北师范大学生命科学学院石家庄050016 河北师范大学汇华学院石家庄050091 河北医科大学科技总公司石家庄050017 河北医科大学第四医院科研中心石家庄050011

本文研究了雷氏大疣蛛毒液对人肝癌细胞株HepG2增殖抑制作用及其分子机制。采用XTT法观察到雷氏大疣蛛毒液剂量依赖抑制HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测发现,经过雷氏大疣蛛毒液作用的HepG2细胞周期发生明显的选择性改变;RT-PCR方法检测到... 详细信息

本文研究了雷氏大疣蛛毒液对人肝癌细胞株HepG2增殖抑制作用及其分子机制。采用XTT法观察到雷氏大疣蛛毒液剂量依赖抑制HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测发现,经过雷氏大疣蛛毒液作用的HepG2细胞周期发生明显的选择性改变;RT-PCR方法检测到p21基因表达增强;Western blot检测发现,p21蛋白表达增加。结果提示,雷氏大疣蛛毒液抑制人肝癌细胞HepG2增殖的可能机制之一是使p21基因和蛋白表达增加,G2／M细胞周期被阻滞,从而诱导细胞凋亡。

关键词：雷氏大疣蛛毒液 HepG2细胞细胞周期 p21基因 p21蛋白

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MDR逆转因子筛选技术P-gp细胞系的建立及其生物学特性评价

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肿瘤防治研究 2005年第7期32卷 389-391,455页

作者：单保恩张静河北医科大学第四医院科研中心暨河北省肿瘤基因诊断预防和治疗重点实验室石家庄050011

目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达Pgp的细胞系,用于筛选特异性逆转Pgp的药物。方法经RTPCR反应得到小鼠肿瘤细胞PgpDNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染BMDC1细胞。采用Northern印迹法和流式细胞技... 详细信息

目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达Pgp的细胞系,用于筛选特异性逆转Pgp的药物。方法经RTPCR反应得到小鼠肿瘤细胞PgpDNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染BMDC1细胞。采用Northern印迹法和流式细胞技术检测细胞PgpmRNA和Pgp分子的表达;以MTT法分析细胞的增殖活性;应用药物聚集和排放实验检测其生物学活性。结果成功构建了稳定表达特异性Pgp基因和Pgp分子的BMDC1(ADR+/+)细胞系。经阿霉素诱导,BMDC1(ADR+/+)细胞Pgp的表达明显增高,在阿霉素增加至12000ng/mL时,仍有80%的细胞保持良好增殖状态,而BMDC1(wt)细胞在1000ng/mL时100%细胞死亡。BMDC1(ADR+/+)较(wt)细胞对MD123有较低的聚集量和较高的排放量,加入Pgp逆转剂Verapamil后,BMDC1(ADR+/+)细胞MD123聚集量增加,药物外排作用消失。结论BMDC1(ADR+/+)细胞系具有较强的药物耐受性,可用于筛选特异性逆转Pgp的药物,Verapamil可逆转Pgp耐药性,具有Verapamil特性者可视为具有逆转Pgp耐药性。

关键词：多药耐药 P-糖蛋白基因转导 P—gp细胞系

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骨髓间充质干细胞对大鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响

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中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 49-53页

作者：单保恩杨从容河北医科大学第四附属医院科研中心石家庄050011

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）对异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法：从大鼠骨髓中分离培养问充质干细胞，通过形态学观察及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度。... 详细信息

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）对异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法：从大鼠骨髓中分离培养问充质干细胞，通过形态学观察及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度。通过混合淋巴细胞培养（MLR）检测MSCs体外对T细胞增殖的影响。建立大鼠GVHD模型（SD—Wistar），对其进行allo—BMT的同时，共移植不同数量供者源性的MSCs，观察受体大鼠的临床表现、绘制Kaplan—Meier生存曲线，并通过病理分析，综合评价MSCs，对allo-BMT后GVHD的影响。结果：在混合淋巴细胞培养体系中加入与反应淋巴细胞同源的MSCs，能够抑制T细胞的增殖，不同MSCs浓度组之问存在显著性差异（P〈0．01）。异基因骨髓移植时，供鼠MSC与T细胞比例为1：5、2：5共输注时，能推迟受鼠GVHD的发生时间，延长生存期，但并未避免GVHD的发生；当比例为1：1时，只有20％的受鼠发生了慢性GVHD反应，1—2周后逐渐缓解，并得到了长期生存，其余80％大鼠均未出现GVHD反应而长期生存。结论：大鼠MSCs不仅在体外能够抑制T细胞的增殖，体内共移植骨髓和高数量的MSCs也可以降低GVHD的发生率和严重程度，并延长受鼠的生存时间。本研究结果为临床GVHD的防治提供了新的思路。

关键词：骨髓间充质干细胞异基因骨髓移植移植物抗宿主病

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LPA_1介导溶血磷脂酸对卵巢癌细胞系基质金属蛋白酶2和9释放与活化的调控作用

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吉林大学学报（医学版） 2012年第4期38卷 709-712页

作者：汪萍吴小华单保恩河北医科大学第四医院妇产科河北石家庄050011 河北省唐山市人民医院肿瘤内科白求恩国际和平医院妇产科河北医科大学第四医院科研中心河北石家庄050011

目的:将溶血磷脂酸(LPA)受体LPA1基因的质粒载体导入卵巢癌细胞系SKOV3和3AO,建立高表达LPA1的卵巢癌细胞株,观察转染细胞株的生物学特性,探讨LPA对稳定表达LPA1的人卵巢癌细胞株基质金属蛋白酶2和9(MMP-2和MMP-9)表达及活性的影响。方... 详细信息

目的:将溶血磷脂酸(LPA)受体LPA1基因的质粒载体导入卵巢癌细胞系SKOV3和3AO,建立高表达LPA1的卵巢癌细胞株,观察转染细胞株的生物学特性,探讨LPA对稳定表达LPA1的人卵巢癌细胞株基质金属蛋白酶2和9(MMP-2和MMP-9)表达及活性的影响。方法:用脂质体介导法将pcDNA3.1flag-LPA1转入人卵巢癌细胞系(SKOV3和3AO),同时设细胞对照组及空载体组。利用RT-PCR鉴定转染细胞株表达水平,并通过检测细胞株生长、增殖变化观察转染细胞株的生物学特性。明胶酶谱检测LPA对稳定表达LPA1的卵巢癌细胞株。MMP-2和MMP-9表达及活性的影响。结果:LPA1基因的质粒载体成功导入卵巢癌细胞系SKOV3和3AO,建立高表达LPA1的卵巢癌细胞株,转染前后细胞生物学特性无明显变化。利用RT-PCR半定量检测转染细胞LPA1mRNA表达水平,经转染后的SKOV3-LPA1和3AO-LPA1细胞LPA1mRNA表达水平明显高于对照组SKOV3、3AO细胞及空载体组SKOV3-Vector、3AO-Vector细胞LPA1mRNA的表达水平,差异有统计学意义(P0.5)。明胶酶谱法检测结果表明,实验组SKOV3-LPA1和3AO-LPA1细胞MMP-9、MMP-2释放和活化量与对照组SKOV3、3AO和空载体组SKOV3-Vector比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:经鉴定获得了生物学特性稳定的LPA1高表达的卵巢癌细胞株。在LPA诱导的MMPs的活化过程中,LPA1可能作为一个负性调节因子。

关键词：溶血磷脂酸受体基质金属蛋白酶卵巢肿瘤

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