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石上柏双黄酮类和酚酸类成分体外抗氧化和抗肿瘤活性研究

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辽宁中医药大学学报 2018年第7期20卷 5-8页

作者：王刚才谦李三华何群蒋奉秦遵义医学院贵州遵义563000 辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的：研究石上柏双黄酮类和酚酸类成分体外抗氧化和抗肿瘤活性。方法：从石上柏中分离出的穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、银杏双黄酮、莽草酸、丁香酸及咖啡酸取适量,配置成不同浓度的溶液（20、40、60、80、100、120μg/m L）。以维生素... 详细信息

目的：研究石上柏双黄酮类和酚酸类成分体外抗氧化和抗肿瘤活性。方法：从石上柏中分离出的穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、银杏双黄酮、莽草酸、丁香酸及咖啡酸取适量,配置成不同浓度的溶液（20、40、60、80、100、120μg/m L）。以维生素C、槲皮素为对照品;采用1,1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）、2,2＇-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐（ABTS）自由基清除法和铁离子还原能力（FRAP）实验,分别考察每个化合物的抗氧化活性。通过MTT实验,以鼻咽癌CNE-1细胞株和CNE-2细胞株为对象,以顺铂为对照品,考察每个化合物的抗肿瘤活性。结果：抗氧化活性顺序：扁柏双黄酮〉银杏双黄酮〉穗花杉双黄酮〉丁香酸〉咖啡酸〉莽草酸;抗肿瘤活性顺序：扁柏双黄酮〉银杏双黄酮〉穗花杉双黄酮〉丁香酸〉咖啡酸〉莽草酸。结论：石上柏双黄酮类的抗氧化活性和抗肿瘤活性均强于酚酸类。

关键词：石上柏双黄酮类酚酸类抗氧化活性抗肿瘤活性

知母皂苷AⅢ促进曲美替尼对肺癌A549细胞抑制活性的研究

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中国民族民间医药 2020年第14期29卷 8-12页

作者：肖毅朱欣婷徐卫刘云李三华遵义医科大学医学与生物学研究中心贵州遵义563099 贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治重点实验室贵州遵义563099 遵义医科大学基础医学院贵州遵义563099 遵义医科大学药学院贵州遵义563099

目的:观察曲美替尼与知母皂苷AⅢ联合作用时对肺癌A549细胞的抑制效应。方法:曲美替尼单独或与知母皂苷AⅢ联合作用于肺癌A549细胞;利用CCK8试剂盒检测细胞生长,单细胞集落形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞... 详细信息

目的:观察曲美替尼与知母皂苷AⅢ联合作用时对肺癌A549细胞的抑制效应。方法:曲美替尼单独或与知母皂苷AⅢ联合作用于肺癌A549细胞;利用CCK8试剂盒检测细胞生长,单细胞集落形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:曲美替尼与知母皂苷AⅢ联合使用时对A549细胞生长和迁移的抑制效果明显高于曲美替尼单独使用时的抑制效果(P0.05)。结论:知母皂苷AⅢ显著提高了曲美替尼对肺癌A549细胞生长、增殖和迁移能力的抑制。

关键词：知母皂苷AⅢ 曲美替尼肺癌

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对P57^(kip2)调控JEC细胞生长干扰的研究

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遵义医科大学学报 2021年第3期44卷 277-284页

作者：周俊张春英李三华钟栎周正平遵义医科大学病理学教研室贵州遵义563099 遵义医科大学电镜室贵州遵义563099 遵义医科大学医学与生物学研究中心贵州遵义563099 怀化市第一人民医院病理科湖南怀化418000

目的使用5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干扰人子宫内膜样癌(Endometrial carcinoma,EC)JEC细胞,探讨不同甲基化水平的p57^(kip2)对细胞生长的影响。方法5-Aza-CdR干扰JEC细胞作为实验组(A组:12.5μmol/L;B组:15μmol/L组;A^(+)、B^(+)组:分别为A、B组于48 h追加一次等量5-Aza-CdR),分别使用亚硫酸氢盐测序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)法、MTT法、蛋白质印迹(WB)法、流式细胞术(FCM)等方法进行相关指标检测。结果和对照组比较,p57^(kip2)基因启动子区总体甲基化率在24、48h以A、A^(+)组下降明显,在72 h则以A^(+)、B^(+)组下降明显;细胞生长水平在24 h以A、A^(+)组下降最为明显(P<0.05),在48 h各实验组均有明显下降(P<0.05),在72 h则以A^(+)、B^(+)组下降更明显(P<0.05);P57^(kip2)蛋白表达在24 h以A、A^(+)组上调明显,在72 h以A^(+)、B^(+)组上调明显(P<0.05);G 1期细胞比例在24 h各实验组中均有显著上调(P<0.05),在72 h以A^(+)、B^(+)组上调更明显(P<0.05);干扰72 h后,A^(+)、B^(+)组细胞密度明显减小,细胞表面微绒毛、分泌泡更加丰富。结论5-Aza-CdR对JEC细胞中p57^(kip2)启动子区的去甲基化作用存在时间依赖性,追加5-Aza-CdR能更好维持p57^(kip2)启动子区的低甲基化水平,持续上调P57^(kip2)蛋白的表达,使更多细胞被阻滞于G 1期,发挥其负向调控细胞周期、抑制JEC细胞生长的作用,并有促进细胞向更好分化方向发展的趋势。

关键词：子宫内膜癌 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 JEC细胞甲基化 p57^(kip2)

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不同产地石上柏抗氧化和抗肿瘤活性比较

中国民族民间医药 2017年第22期26卷 11-14页

作者：李三华黎丹蒋永梅袁仕梦魏玮王刚遵义医学院医学与生物学研究中心贵州遵义563099 遵义医学院药学院贵州遵义563099

目的:比较不同产地的石上柏抗氧化和抗肿瘤活性的差异。方法:将采集于广西、贵州、重庆和四川的十批石上柏样品用乙醇提取后再以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。采用DHHP自由基清除、ABTS自由基清除和FRAP法测定三种萃取物的抗氧化活性... 详细信息

目的:比较不同产地的石上柏抗氧化和抗肿瘤活性的差异。方法:将采集于广西、贵州、重庆和四川的十批石上柏样品用乙醇提取后再以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。采用DHHP自由基清除、ABTS自由基清除和FRAP法测定三种萃取物的抗氧化活性;以肺癌A549和肝癌SMMC-7721细胞的增殖活性测定三种萃取物的抗肿瘤活性。结果:10批样品中,贵州产地的石上柏的抗氧化活性最高,广西产地的石上柏抗肿瘤活性最高;乙酸乙酯萃取物的2种生物活性均高于其他2种萃取物(P<0.05)。结论:石上柏的乙酸乙酯萃取物具有良好的抗氧化和抗肿瘤活性,不同产地的石上柏生物活性有一定差异。

关键词：石上柏双黄酮抗氧化抗肿瘤

hHT/GFP融合基因表达载体的构建及在小鼠成纤维细胞中的表达

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西北农业学报 2010年第9期19卷 25-28页

作者：郭战军马毅张钥李三华王广友杨慧祥孙光乔宝民天津市泌尿外科研究所天津300211 天津市奶牛发展中心天津300384 遵义医学院中心实验室贵州遵义563003

为探讨超急排斥反应(hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(delayed xenograft rejec-tion,DXR)分子调控机制,进行-α1,2岩藻糖苷转移酶基因(hHT)与绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein,GFP)融合表达载体pEGFP-C1-hHT的构建及在小鼠成纤维细胞表达的研究。采用脂质体法转染小鼠成纤维细胞48 h后观察到GFP阳性细胞。同时对GFP阳性小鼠成纤维细胞进行PCR及Western blot,检测hHT基因的整合及表达情况。PCR结果表明hHT基因整合入小鼠基因组,Western blot检测到hHT基因的表达。研究结果表明,成功克隆hHT基因并构建了融合表达载体pEGFP-C1-hHT,可应用于进一步转基因研究。

关键词： hHT基因 GFP基因融合表达小鼠成纤维细胞

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HP-20大孔吸附树脂纯化白薇粗多糖

食品工业 2022年第3期43卷 83-87页

作者：潘峰罗安桂李三华朱欣婷刘云遵义医科大学生命科学研究院遵义563000 贵州百灵健康科技有限公司贵阳550000 遵义医科大学基础医学院遵义563000

研究大孔吸附树脂对白薇粗多糖同时脱色素和脱蛋白质的最佳条件及其对多糖结构特征的影响。以色素清除率、蛋白质清除率和多糖保留率为基本指标,从7种树脂中筛选到最佳树脂类型,为HP-20。对吸附条件进行优化,结果表明多糖初始浓度5 mg/m... 详细信息

研究大孔吸附树脂对白薇粗多糖同时脱色素和脱蛋白质的最佳条件及其对多糖结构特征的影响。以色素清除率、蛋白质清除率和多糖保留率为基本指标,从7种树脂中筛选到最佳树脂类型,为HP-20。对吸附条件进行优化,结果表明多糖初始浓度5 mg/mL、初始pH 5、温度35℃、流速2.5 BV/h时,具有较好的脱色(清除率约67%)和脱蛋白质(清除率约73%)效果,且多糖损失较少(约27%)。UV、HPLC-ELSD、PMP-HPLC-DAD、1H NMR分析结果显示,吸附前后,多糖在分子量分布、单糖组成、1H NMR特征等都未发生明显改变,表明HP-20的吸附作用不会引起白薇多糖链的降解和结构改变。所获得的方法可用于白薇根粗多糖的精制和工业化生产,且为白薇根粗多糖后续分离纯化和药理活性研究奠定良好基础。

关键词：大孔吸附树脂HP-20 白薇多糖纯化

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不同稀释液对混合酶标抗体稳定性的影响

中国生物制品学杂志 2023年第10期36卷 1179-1184页

作者：牛银银陈鹏崔红米杨潇燕米贯勋李三华刘文弟齐华河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心河南郑州450001

目的探讨不同稀释液对混合酶标抗体稳定性的影响,筛选出一种适用于混合酶标抗体的稀释液,可同时保护辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)偶联二抗和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)偶联二抗鸡尾酒混合物的稳定性。方法以... 详细信息

目的探讨不同稀释液对混合酶标抗体稳定性的影响,筛选出一种适用于混合酶标抗体的稀释液,可同时保护辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)偶联二抗和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)偶联二抗鸡尾酒混合物的稳定性。方法以Tris-HCl缓冲盐溶液为基础溶液,设置4种不同的稀释液配方(A、B、C、D),每种配方包含不同类型的稳定剂,如蛋白、金属离子、表面活性剂、抑菌剂等,采用不同的稀释液配置混合酶标抗体,在冷藏(2~8℃)和37℃条件下存储,通过EliSA、酶活测定及免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色法检测其稳定性。结果 D液配方[Tris(50 mmol/L)+牛血清白蛋白(1.5%,g/100mL)+Tween-20(0.3%)+Proclin-950(0.1%,g/100 mL)+氯化钠(150 mmol/L)+L-Ascorbic Acid(1 mmol/L)+L-methionine(5 mmol/L)+L-histidine(5 mmol/L)+酪蛋白酸钠(1%,g/100 mL)+氯化锌(0.1 mmol/L)+海藻糖(8%,g/100 mL)]保存试剂的稳定性最好,在37℃条件下保存10周,HRP偶联二抗和AP偶联二抗的工作液效价最高,HRP和AP的活性剩余比率分别为93.46%和96.07%,IHC结果无明显差异。结论该配方稀释液可用于混合酶标抗体工作液的配置。

关键词：稀释液混合酶标抗体稳定性稳定剂免疫组织化学

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微波辅助萃取石上柏穗花杉双黄酮工艺研究

遵义医学院学报 2017年第6期40卷 678-681,685页

作者：王刚何群李三华甘天清梁俪之遵义医学院药学院贵州遵义563099 遵义医学院医学与生物学研究中心贵州遵义563099

目的探讨微波辅助萃取石上柏穗花杉双黄酮的工艺优化。方法采用微波辅助萃取,以穗花杉双黄酮的提取率为指标,考察提取溶剂、固液比、微波功率、提取时间、提取温度对提取工艺的影响。结果最佳工艺条件为采用95%乙醇提取溶剂,固液比为1∶... 详细信息

目的探讨微波辅助萃取石上柏穗花杉双黄酮的工艺优化。方法采用微波辅助萃取,以穗花杉双黄酮的提取率为指标,考察提取溶剂、固液比、微波功率、提取时间、提取温度对提取工艺的影响。结果最佳工艺条件为采用95%乙醇提取溶剂,固液比为1∶15(g/m L),微波功率500 w,提取时间为40 min,提取温度为50℃。结论该方法节省时间、节约能量、提取效率高、控制方便。

关键词：石上柏穗花杉双黄酮微波辅助萃取

全电脑三臂凿岩台车在铁路隧道开挖施工中的应用

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建设机械技术与管理 2020年第4期33卷 48-51页

作者：彭仁军李三华刘爱兵张晓寿李中华中铁五局集团有限公司物资设备部湖南长沙410007 中铁五局集团有限公司湖南长沙410007

根据国家相关部委提出的“机械化换人、自动化减人”工程施工指导思想和重点工程施工需要,近年来凿岩台车在铁路隧道施工应用越来越广泛。现对我公司购置的全电脑三臂凿岩台车在各铁路隧道开挖施工中的应用情况进行阶段性总结,对应用效... 详细信息

根据国家相关部委提出的“机械化换人、自动化减人”工程施工指导思想和重点工程施工需要,近年来凿岩台车在铁路隧道施工应用越来越广泛。现对我公司购置的全电脑三臂凿岩台车在各铁路隧道开挖施工中的应用情况进行阶段性总结,对应用效果进行分析,提出凿岩台车应用需要继续探讨和深入研究的问题,为凿岩台车后续应用提供参考。

关键词：全电脑三臂凿岩台车铁路隧道开挖成本利用率机械化施工