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农杆菌介导霞多丽葡萄胚性细胞系遗传转化条件的优化

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果树学报 2008年第2期25卷 236-239页

作者：邓杰曹银生刘彩玉刘新薛仁镐青岛农业大学生命科学学院山东青岛266109

为建立葡萄(Vitis vinifera)遗传转化技术体系,以霞多丽葡萄(Chardonnay)胚性细胞系为靶组织,采用gus检测法,对影响农杆菌介导葡萄遗传转化效率的主要因素进行了研究。结果表明,超声波处理时间长短对转化效率有较大影响,在所试的0.5、1... 详细信息

为建立葡萄(Vitis vinifera)遗传转化技术体系,以霞多丽葡萄(Chardonnay)胚性细胞系为靶组织,采用gus检测法,对影响农杆菌介导葡萄遗传转化效率的主要因素进行了研究。结果表明,超声波处理时间长短对转化效率有较大影响,在所试的0.5、1、5、10 min 4种不同时间的超声波处理中,以5 min时转化效率较好,平均达到9.11个蓝色斑点;As浓度对转化效率有明显差异,当浓度为50μmol/L时,平均蓝色斑点数为8.89个,100μmol/L时,达到12.44个;DTT质量浓度对转化效率也有较大影响,在所试的3种质量浓度(1,2,3 mg/L)中,以3 mg/L为最佳,有16.67个蓝色斑点。通过gus瞬时表达检测,确立了农杆菌介导葡萄胚性细胞系遗传转化的几个最适影响因素,从而为葡萄遗传转化技术体系的建立奠定了基础。

关键词：葡萄农杆菌胚性细胞系超声波遗传转化

陆地棉转录因子GhNAC7的克隆及功能分析

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中国农业科学 2017年第3期50卷 426-436页

作者：郑学伟 sHAH syed Tariq 范术丽魏恒玲庞朝友李鸿彬喻树迅石河子大学生命科学学院中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室

【目的】从陆地棉中克隆GhNAC7,分析其结构和功能,研究其在棉花不同组织中以及叶片不同发育时期的表达量。并转入拟南芥进一步探究其在棉花叶片衰老过程中的作用。【方法】利用中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室建立的... 详细信息

【目的】从陆地棉中克隆GhNAC7,分析其结构和功能,研究其在棉花不同组织中以及叶片不同发育时期的表达量。并转入拟南芥进一步探究其在棉花叶片衰老过程中的作用。【方法】利用中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室建立的棉花衰老叶片cDNA文库中的序列,获得1个含有NAM结构域的EsT,使用Oligo6.71设计引物,重新在陆地棉叶片cDNA中进行克隆。使用Gene structure Display server软件分析GhNAC7结构,使用在线工具Plant CARE分析启动子序列,利用在线工具Gen scan进行氨基酸序列翻译。同时,利用拟南芥基因组数据库（TAIR）进行序列比对,选取得分较高的NAC家族基因,使用MEGA 6.06软件和Gene Doc软件进行进化树分析和氨基酸比对。以XbaⅠ和sacⅠ为酶切位点构建35s::GhNAC7-GFP融合表达载体,分析其在洋葱表皮细胞中的瞬时表达,进行亚细胞定位。利用实时荧光定量PCR技术分析GhNAC7在棉花不同组织、不同叶片发育时期以及在200μmol·L;ABA调控下的表达量。通过构建p GhNAC7-gus融合表达载体并转拟南芥,分析其启动子特异性。以Eco RⅠ和salⅠ为酶切位点,利用p BI101和p BI121载体,分别构建融合表达载体并转拟南芥进行过表达分析。【结果】从陆地棉中成功克隆GhNAC7,其全长为1 064 bp,包含3个外显子,2个内含子。生物信息学分析结果表明,GhNAC7开放阅读框为834 bp,可编码277个氨基酸,其蛋白质分子量为31.35 k D,等电点为9.22。结构域分析表明其属于NAC转录因子的NAM亚家族,进化树分析显示GhNAC7与ANAC041、ANAC083同源性最高,其中,GhNAC7与ANAC083结构域位置均为17—58 aa。其启动子核心元件包含一系列与衰老、激素、胁迫相关的顺式作用元件。亚细胞定位表明其蛋白为核蛋白。组织特异性表明GhNAC7在真叶、子叶、花、花药和衰老真叶中均明显表达,其中在衰老的真叶中表达量最高。启动子特异性分析表明,其gus活性在衰老的叶片中最强。在拟南芥中过表达该基因,转基因植株比野生型表现出明显的衰老症状。荧光定量PCR分析表明,ABA处理后6 h GhNAC7明显上调表达,并在48 h表达量达到最高,这表明ABA可调控GhNAC7表达从而调节棉花叶片衰老。【结论】GhNAC7可以促进棉花叶片衰老并受ABA的调控。

关键词：陆地棉 NAM结构域叶片衰老 GhNAC7 过表达

非生物胁迫因子对大豆sali3-2基因的调控作用

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深圳大学学报（理工版） 2012年第1期29卷 73-79页

作者：唐玉林曹雁欧忠华杨悉妮胡恋苹郑易之深圳大学生命科学学院深圳518060 深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060

通过生物信息学方法对sali3-2基因上游非编码区序列(-1 945/+1)中的顺式作用元件进行预测.发现该序列中存在铜响应元件、干旱胁迫响应元件及与低温等非生物胁迫相关元件等.在不同非生物胁迫条件下,分别对转基因烟草悬浮细胞和转基因拟... 详细信息

通过生物信息学方法对sali3-2基因上游非编码区序列(-1 945/+1)中的顺式作用元件进行预测.发现该序列中存在铜响应元件、干旱胁迫响应元件及与低温等非生物胁迫相关元件等.在不同非生物胁迫条件下,分别对转基因烟草悬浮细胞和转基因拟南芥幼苗中sali3-2启动子片段驱动报告基因β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,gus)的表达进行分析.结果表明,在转基因烟草细胞和拟南芥幼苗中,gus基因的表达明显受Al3+胁迫的诱导和Cu2+过多的抑制;在转基因烟草细胞中,该基因的表达一定程度上受脱落酸、渗透胁迫和盐胁迫的诱导,研究结果为了解sali3-2基因的功能及调控作用奠定了基础.

关键词：生物信息学基因调控启动子 sali3-2基因铜响应元件非生物胁迫 gus染色

水稻rbcs启动子控制的外源基因在转基因水稻中的特异性表达

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植物生理与分子生物学学报 2005年第3期31卷 247-253页

作者：刘巧泉于恒秀张文娟王红梅顾铭洪扬州大学江苏省植物功能基因组学重点实验室生物科学与技术学院扬州225009 扬州大学生物科学与技术学院扬州225009

为将不同启动子用于转基因水稻的研究,从武运粳8号水稻中克隆了Rubisco小亚基基因(rbcs)的5'上游调控区,构建了由rbcs启动子引导的gus融合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中gus活性的定性与定量测定结果表明,rbcs启... 详细信息

为将不同启动子用于转基因水稻的研究,从武运粳8号水稻中克隆了Rubisco小亚基基因(rbcs)的5'上游调控区,构建了由rbcs启动子引导的gus融合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中gus活性的定性与定量测定结果表明,rbcs启动子可驱动gus报告基因在转基因水稻植株叶片和叶鞘内的叶肉细胞中特异性高效表达,而在茎、根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出明显的组织与细胞特异性。结果还表明,光诱导处理可明显提高rbcs启动子启动的外源基因的表达量。

关键词：水稻rbcs启动子转基因水稻基因表达 gus活性光诱导

大豆gma-miR169c启动子的克隆及植物表达载体构建

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分子植物育种 2015年第2期13卷 287-293页

作者：倪志勇于月华任燕萍陈全家张桦曲延英新疆农业大学农学院新疆农业大学农业生物技术重点实验室乌鲁木齐830052

本研究以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-mi R169c启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆得到gma-mi R169c上游一段长度为1 935 bp的启动子序列。采用Plant CARE启动子在线预测工具分析表明,gma-mi R169c启动子序列具有TAT... 详细信息

本研究以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-mi R169c启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆得到gma-mi R169c上游一段长度为1 935 bp的启动子序列。采用Plant CARE启动子在线预测工具分析表明,gma-mi R169c启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫和植物激素应答相关的顺式作用元件。将gma-mi R169c启动子部分缺失序列替代p BI121载体中的Ca MV35s启动子,构建了与gus融合的启动子元件缺失表达载体。研究结果为进一步分析gma-mi R169c启动子元件的功能和调控机制奠定了基础。

关键词：大豆 gma-mi R169c 启动子植物表达载体

基因枪转化法在棉纤维细胞中瞬时表达外源基因的研究

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棉花学报 2007年第6期19卷 419-423页

作者：于晓玲崔百明卫海滨赵平娟彭明中国热带农业科学院热带生物技术研究所

试验运用了0 d,1 d的棉胚珠为受体,gus基因为报告基因,用基因枪直接对胚珠表皮细胞进行轰击。整个表达载体包括两个部分,第一部分是由CaMV35s调控的gus基因,第二部分是由棉纤维特异表达启动子(RDL1)调控的目标基因,因此目标基因与gus报... 详细信息

试验运用了0 d,1 d的棉胚珠为受体,gus基因为报告基因,用基因枪直接对胚珠表皮细胞进行轰击。整个表达载体包括两个部分,第一部分是由CaMV35s调控的gus基因,第二部分是由棉纤维特异表达启动子(RDL1)调控的目标基因,因此目标基因与gus报告基因能在同一个单纤维细胞中同时表达,从而提供了一个直观的在单纤维细胞中验证目标基因的表达与纤维发育关系的方法。研究中对受体棉花胚珠的发育时间、基因枪的轰击压力、轰击距离及轰击次数等影响转化效率的因素进行了分析优化。结果表明,最佳的转化组合条件是:以开花一天的棉花胚珠为受体,当轰击压力为1100 psi,轰击距离为9cm,轰击次数为2次时可达到最高的转化率,并能观察到稳定的gus表达。

关键词：棉纤维基因枪瞬时表达 gus

白桦BpsPL2基因启动子的克隆及表达分析

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植物研究 2019年第1期39卷 96-103页

作者：王晟宇张淇张正一胡晓晴田晶张勇刘雪梅东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

sPL(sQUAMOsA promoter-binding protein-like)是植物特有的转录因子,研究表明其在参与发育阶段转变、花和果实发育等方面起着重要作用。利用PCR技术从白桦基因组DNA中扩增获得BpsPL2基因上游1 960 bp启动子序列,使用PLACE和Plant CARE... 详细信息

sPL(sQUAMOsA promoter-binding protein-like)是植物特有的转录因子,研究表明其在参与发育阶段转变、花和果实发育等方面起着重要作用。利用PCR技术从白桦基因组DNA中扩增获得BpsPL2基因上游1 960 bp启动子序列,使用PLACE和Plant CARE在线软件分析序列,发现BpsPL2基因启动子序列中含有与开花、非生物胁迫及激素响应等相关的顺式作用元件,暗示其在植物的生长发育和胁迫应答中起重要作用。进而构建了BpsPL2基因启动子驱动gus报告基因的植物表达载体,并利用农杆菌介导将其瞬时转化至白桦和拟南芥,通过gus组织化学染色检测BpsPL2基因启动子的组织表达特性,结果表明BpsPL2基因启动子具有启动子活性,能够驱动gus基因在白桦和拟南芥中表达;而其表达活性在白桦的叶片、芽及根部中较强,在拟南芥的花药、雌蕊和叶片较强,为进一步研究白桦BpsPL2基因的表达调控及其功能分析提供参考。

关键词：白桦 BpsPL2启动子顺式作用元件克隆表达分析

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香蕉凝集素基因双启动子表达

果树学报 2008年第3期25卷 422-425页

作者：张建斌赵静黎耀平金志强徐碧玉中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

为了获得香蕉果实特异表达的强启动子,利用PCR方法将2个凝集素(BanLec)基因启动子串联在一起,置换植物表达载体pBI121上的35s启动子,构建BanLec基因双启动子携带gus植物表达载体pBIL3,用基因枪转化香蕉叶片、根系和果实薄片,瞬时表达结... 详细信息

为了获得香蕉果实特异表达的强启动子,利用PCR方法将2个凝集素(BanLec)基因启动子串联在一起,置换植物表达载体pBI121上的35s启动子,构建BanLec基因双启动子携带gus植物表达载体pBIL3,用基因枪转化香蕉叶片、根系和果实薄片,瞬时表达结果显示BanLec基因串连的双启动子依然表现为果实特异性表达,而且表达量明显高于BanLec基因单启动子及35s启动子,证明该串连的双启动子是一个在香蕉果实中特异表达且表达量较高的强启动子。

关键词：香蕉凝集素基因双启动子果实特异表达

大豆Glyma08g11030启动子在拟南芥中的表达分析

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分子植物育种 2022年第13期20卷 4372-4376页

作者：张承琪鹿瑞昭王怡倪志勇于月华新疆农业大学农学院乌鲁木齐830052

F-box蛋白在调控植物对逆境胁迫应答过程中具有重要功能。为研究大豆F-box蛋白Glyma08g11030基因启动子的表达特性,利用冻融法将Glyma08g11030植物表达载体质粒Glyma08g11030-pro-pCAMBIA3301转入农杆菌GV3101菌株。通过农杆菌介导的浸... 详细信息

F-box蛋白在调控植物对逆境胁迫应答过程中具有重要功能。为研究大豆F-box蛋白Glyma08g11030基因启动子的表达特性,利用冻融法将Glyma08g11030植物表达载体质粒Glyma08g11030-pro-pCAMBIA3301转入农杆菌GV3101菌株。通过农杆菌介导的浸花法将Glyma08g11030启动子转化野生型拟南芥,经过含10%草甘膦(Basta)除草剂筛选获得转Glyma08g11030启动子阳性植株。对纯合的T代转基因拟南芥进行gus组织化学染色,结果表明Glyma08g11030启动子驱动的gus基因在转基因拟南芥发育5和7 d的幼苗、莲座叶、茎生叶、茎和花序中均表达。研究结果为进一步利用Glyma08g11030启动子驱动目的基因表达提供参考。

关键词：大豆 Glyma08g11030 启动子