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笋瓜韧皮部蛋白基因启动子的克隆及其功能初探

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农业生物技术学报 1999年第1期7卷 63-68页

作者：蒋浩秦红敏虞红梅田颖川中科院微生物研究所!北京 100080

笋瓜韧皮部蛋白（phloemprotein）PP2是一种独特的结合几丁质的凝集素，具有韧皮部组织特异性。为了研究该基因启动子在转基因植物中的表达特性，探索其在植物基因工程中潜在的应用价值，根据发表的序列，用PCR方法从笋瓜基因组中扩增... 详细信息

笋瓜韧皮部蛋白（phloemprotein）PP2是一种独特的结合几丁质的凝集素，具有韧皮部组织特异性。为了研究该基因启动子在转基因植物中的表达特性，探索其在植物基因工程中潜在的应用价值，根据发表的序列，用PCR方法从笋瓜基因组中扩增得到了PP2基因启动子片段。经序列分析证明无误后，与gus基因融合构建了植物表达载体。通过农杆菌介导转化烟草，经PCR分析初步表明嵌合基因已经整合到烟草基因组中。gus组织化学检测显示转基因烟草的茎、叶柄和根韧皮部以及叶脉都为gus染色阳性，这是首次用转基因植物证明笋瓜PP2基因启动子可驱动外源基回在异源植物韧皮部及分生组织中特异性表达。

关键词：笋瓜韧皮部特异性启动子 gus嵌合基因转基因烟草

拟南芥甲基结合蛋白基因AtMBP11启动子在种子形成和萌发中的功能鉴定

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生物技术通报 2012年第4期28卷 74-79页

作者：冀芦沙于守超赵燕肖庆振王曰文聊城大学植物分子生物学重点实验室聊城252059

为研究拟南芥甲基结合蛋白基因AtMBP11在种子形成和萌发过程中的调控模式,克隆拟南芥AtMBP11启动子,将其替换植物表达载体pBI121的35s启动子序列,转入拟南芥基因组中。转基因拟南芥后代卡那霉素抗性发生分离,选取具有3 1分离比的后代自... 详细信息

为研究拟南芥甲基结合蛋白基因AtMBP11在种子形成和萌发过程中的调控模式,克隆拟南芥AtMBP11启动子,将其替换植物表达载体pBI121的35s启动子序列,转入拟南芥基因组中。转基因拟南芥后代卡那霉素抗性发生分离,选取具有3 1分离比的后代自交,产生纯合的具有单拷贝插入的后代。转基因后代gus染色结果表明,新克隆的MBP启动子控制基因在种子、花药和花粉中高效表达。通过对AtMBP11核心启动子缺失分析表明,G-box元件是主要功能元件。

关键词：拟南芥启动子甲基结合蛋白(MBP)

苹果6-磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子逆境诱导表达特性研究

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中国生物工程杂志 2017年第6期37卷 50-55页

作者：夏惠刘磊王秀沈妍秋郭雨伦梁东四川农业大学园艺学院成都611130 四川农业大学果蔬研究所成都611130 成都市农林科学院成都611130

为研究6-磷酸山梨醇脱氢酶(sorbitol-6-phosphate dehydrogenase,s6PDH)基因启动子(s6PDHp)的逆境诱导表达特性,利用Gateway技术构建了s6PDH基因启动子区5'端系列缺失体与gus基因的融合表达载体,并通过农杆菌介导法转化拟南芥。对转基... 详细信息

为研究6-磷酸山梨醇脱氢酶(sorbitol-6-phosphate dehydrogenase,s6PDH)基因启动子(s6PDHp)的逆境诱导表达特性,利用Gateway技术构建了s6PDH基因启动子区5'端系列缺失体与gus基因的融合表达载体,并通过农杆菌介导法转化拟南芥。对转基因拟南芥进行低温和外源ABA处理,通过gus蛋白活性变化分析s6PDHp的逆境诱导表达特性。研究结果发现,通过Gateway技术构建了4个s6PDHp 5'端系列缺失体与β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因的融合表达载体(pGWB433-s6PDHp1、pGWB433-s6PDHp2、pGWB433-s6PDHp3和p GWB433-s6PDHp4)并获得了相应的转基因拟南芥。对转基因植株进行低温处理后发现,p GWB433-s6PDHp3转基因植株中的gus活性增幅最大,达到显著水平,而其他转基因植株中的gus活性基本保持不变。外源ABA处理后发现,除p GWB433-s6PDHp4外,其余启动子缺失体转基因拟南芥中gus活性显著升高。以上结果表明,低温和外源ABA能够诱导s6PDHp的表达,但不同的缺失体响应程度不同,意味着在s6PDHp序列(-2 396bp至-236bp)中可能存在着响应逆境胁迫的正负调控顺式作用元件。

关键词： 6-磷酸山梨醇脱氢酶启动子报告基因遗传转化苹果

花生磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的克隆及反义表达载体的构建

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华北农学报 2009年第5期24卷 69-72页

作者：潘昱名刘风珍万勇善山东农业大学农学院山东泰安271018 作物生物学国家重点实验室山东泰安271018

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)是控制植物籽粒中蛋白质/油脂含量比例的关键酶。本研究利用RT-PCR技术,克隆PEPCase基因的片段,并将克隆的PEPCase基因片段反向连接替代植物表达载体PBI121的gus基因。从花生栽培品种荔蒲大花生基因组... 详细信息

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)是控制植物籽粒中蛋白质/油脂含量比例的关键酶。本研究利用RT-PCR技术,克隆PEPCase基因的片段,并将克隆的PEPCase基因片段反向连接替代植物表达载体PBI121的gus基因。从花生栽培品种荔蒲大花生基因组中克隆获得编码PEPCase的基因片段(886 bp),其核苷酸序列与已报道的花生(EU391629)、棉花(AY008939)、大豆(D10717)、拟南芥(AY210895)、豌豆(D64037)PEPCase基因对应部分的同源性分别为99.77%,84.37%,81.54%,81.25%,78.71%,说明我们得到PEPCase基因片段较准确。构建的反义表达载体中PEPCase基因由35s启动子所控制,将构建的反义表达载体命名为pBGPEP。为通过反义抑制技术提高花生含油量提供了基因及表达载体。

关键词：花生 PEP羧化酶 RT-PCR 反义表达载体

根瘤农杆菌介导的喜树叶片瞬时转化体系的建立

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分子植物育种 2018年第17期16卷 5624-5630页

作者：王碧莹谷金芸霍春红常纯皓于放大连工业大学生物工程学院大连116034

喜树是中国传统的珍贵药用植物,因其含有抗癌、抗病毒药物喜树碱而被广泛关注。然而喜树碱在喜树中的低积累量限制了其在市场上的应用,因此喜树碱生物合成途径关键酶基因功能的鉴定及其代谢途径的解析变得尤为重要。稳定遗传转化因其周... 详细信息

喜树是中国传统的珍贵药用植物,因其含有抗癌、抗病毒药物喜树碱而被广泛关注。然而喜树碱在喜树中的低积累量限制了其在市场上的应用,因此喜树碱生物合成途径关键酶基因功能的鉴定及其代谢途径的解析变得尤为重要。稳定遗传转化因其周期长、效率低而无法快速鉴定相关基因,瞬时转化则具有高效、方便、易操作等特点。利用瞬时转化可望更快速地解析未知代谢途径,进而调控喜树碱的合成、提高喜树碱的含量。目前喜树中瞬时转化研究较少,并且在前期实验中发现,选取同时期不同个体的喜树叶片进行瞬时转化,会因生理生化差异导致实验数据误差较大,进而增加实验结果分析的难度。所以,建立一种降低个体差异的喜树叶片瞬时转化方法具有重要的理论价值和现实意义。本研究以转化p BI121GD(gus DELETED)和p BI121(35s::gus)的根瘤农杆菌GV3101分别侵染喜树同一叶片左右部分,在侵染后不同时期进行gus染色以检测同一叶片的左右部分gus蛋白的表达差异,并利用半定量RT-PCR来检测gus基因的转录水平。结果表明:与对照组比较,在侵染后的第7天实验组中的gus基因和gus蛋白均有较高的表达。上述结果表明,成功的在喜树中建立了一种降低个体差异的喜树叶片瞬时转化方法。

关键词：喜树农杆菌介导瞬时转化 gus染色个体差异

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虎杖PcPKs1基因RNAi载体的构建

湖北农业科学 2015年第9期54卷 2255-2259页

作者：柳忠玉赵树进长江大学生命科学学院湖北荆州434025 广州军区广州总医院广州510010

虎杖(Polygonum cuspidatum *** Zucc.)是富含芳香族聚酮化合物的药用植物,Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthase,PKs)对芳香族聚酮化合物的合成起重要作用。为了研究虎杖Ⅲ型聚酮合酶基因Pc PKs1的功能,分别选取Pc PKs1基因的编码区保守序... 详细信息

虎杖(Polygonum cuspidatum *** Zucc.)是富含芳香族聚酮化合物的药用植物,Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthase,PKs)对芳香族聚酮化合物的合成起重要作用。为了研究虎杖Ⅲ型聚酮合酶基因Pc PKs1的功能,分别选取Pc PKs1基因的编码区保守序列(574 bp)和3′端非编码区特异序列(209 bp)作为干扰片段。将选定的干扰片段,分别以正向和反向插入到p YLRNAi载体中gus基因内含子的两侧,以形成hp RNA表达盒,成功构建了以组成型Ca MV35s为启动子,以潮霉素抗性为筛选标记的RNA干扰表达载体p YLRNAi-CDs和p YLRNAi-UTR,并将载体导入农杆菌LBA4404中。

关键词：虎杖(Polygonum cuspidatum sieb.et Zucc.) III型聚酮合酶查尔酮合酶 RNA干扰转基因

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葡萄花粉介导转基因超声波处理参数的选择

华北农学报 2006年第1期21卷 10-13页

作者：岳新丽曹秋芬季兰孟玉平陈俊山西省农业生物技术研究中心山西太原030031 山西农业大学园艺学院山西太谷030801 山西省农业科学院果树研究所山西太谷030815

利用花粉介导附加超声波对葡萄花粉进行处理，结果表明，超声波处理各参数对葡萄花粉有极显著影响，而且参数间存在交互作用。因此，用超声波处理花粉选择处理参数时，应考虑其交互作用。考察显著性检验结果，在试验花粉破碎率和萌发率... 详细信息

利用花粉介导附加超声波对葡萄花粉进行处理，结果表明，超声波处理各参数对葡萄花粉有极显著影响，而且参数间存在交互作用。因此，用超声波处理花粉选择处理参数时，应考虑其交互作用。考察显著性检验结果，在试验花粉破碎率和萌发率的稳定性和不破坏DNA的基础上，超声波处理参数以功率100～120W，处理时间4～5s，间隙时间2～68，处理次数6为最佳组合选择范围。gus活性检测结果，花粉有4‰的转化率。

关键词：葡萄花粉介导转基因

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农杆菌介导的菜心遗传转化体系的建立

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2006年第9期34卷 60-64页

作者：张国裕王岩程智慧王晓武西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100 中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081

以建立的菜心高频再生体系为基础,利用GU s染色组织分析法研究了根癌农杆菌菌株、乙酰丁香酮(A s)、预培养时间、浸染时间和共培养时间等因素对菜心((B rassica camp estris ***.p arach inesis)子叶遗传转化的影响,探讨了适宜菜心转化... 详细信息

以建立的菜心高频再生体系为基础,利用GU s染色组织分析法研究了根癌农杆菌菌株、乙酰丁香酮(A s)、预培养时间、浸染时间和共培养时间等因素对菜心((B rassica camp estris ***.p arach inesis)子叶遗传转化的影响,探讨了适宜菜心转化的卡那霉素与抑菌抗生素使用浓度。结果表明,农杆菌菌株AGL 0对菜心的浸染能力最强,添加100μm o l/L的乙酰丁香酮有利于菜心转化;子叶外植体预培养2 d后浸染(菌液浓度OD600值为0.8)15m in,共培养2 d,然后转移到含15 m g/L卡那霉素和100 m g/L T icarc illin的筛选培养基上,进行转化植株的再生,植株再生率及外植体GU s阳性率均较高,是较优的转化条件;本试验共获得8株转化植株,转化率达2.44%,经PCR分析和sou thern杂交检测表明,GU s基因已整合进入菜心基因组。

关键词：菜心根癌农杆菌遗传转化子叶转基因植株

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人β-防御素-2植物表达载体的构建

四川大学学报（自然科学版） 2002年第S1期39卷 55-58页

作者：杨晓娟陈静马欣荣余懋群蔡绍晖王伯瑶中国科学院成都生物研究所成都610041 四川大学基础医学院感染免疫研究室成都610041

用重组基因 (hBD 2 )替换双元载体 pCAMBIA130 4中的gus GFP基因 ,构建成植物表达载体pCAMBIA130 4 hBD2 ,并经过了酶切、PCR和序列分析验证 .该载体的构建可为培育转基因抗病植物和利用生物反应器生产防御素奠定基础 .

关键词： β-防御素-2 植物表达载体构建