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葡萄E3泛素酶HOS1基因克隆、表达及抗血清制备

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园艺学报 2021年第6期48卷 1173-1182页

作者：俞沁含焦淑珍吴楠张宁波徐伟荣宁夏大学农学院银川750021 宁夏大学食品与葡萄酒学院银川750021

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码1个具有E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确。以欧洲酿酒葡萄品... 详细信息

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码1个具有E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确。以欧洲酿酒葡萄品种‘霞多丽’的叶片为供试材料,克隆了VvHOS1基因,其全长2931bp,编码976个氨基酸,在第74~106个氨基酸处存在RING类型的锌指结构域(zf-C3H43)。系统发育分析表明,葡萄属植物的HOS1蛋白与番茄、烟草、茶树的亲缘关系最近。将VvHOS1抗原表位丰富肽段(1~320 aa)构建至原核表达载体pET28a-SUMO的BamHⅠ与HindⅢ位点,转化大肠杆菌。经IPTG诱导发现,pET28a-VvHOS11-320在大肠杆菌Rosetta(DE3)中高表达,融合蛋白主要以包涵体形式存在。将纯化后的重组蛋白作为抗原免疫大耳白兔,获得anti-VvHOS1多克隆抗体,ELISA检测效价为1︰51200,具有较强的Western特异性。该抗血清能够特异性检测‘霞多丽’葡萄叶片中的VvHOS1蛋白。(4℃)低温胁迫6、36与48 h时VvHOS1上调表达显著。

关键词：葡萄 HOS1 原核表达多克隆抗体低温胁迫表达模式分析

‘赤霞珠’葡萄未成熟合子胚的体细胞胚发生研究

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植物生理学报 2023年第1期59卷 67-77页

作者：王佳慧徐伟荣郑巧玲李俊铎俞沁含宁夏大学农学院银川750021 宁夏大学食品与葡萄酒学院银川750021 葡萄与葡萄酒教育部工程研究中心银川750021 宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室银川750021

为建立‘赤霞珠’葡萄(Vitis vinifera ‘Cabernet Sauvignon’)体细胞胚再生体系,以花后80 d未成熟合子胚为外植体,探究了促进初生胚萌发的最佳处理方式以及激素组合对次生体细胞胚直接与间接发生的影响。采用不同浓度(1.0、1.5、2.0、... 详细信息

为建立‘赤霞珠’葡萄(Vitis vinifera ‘Cabernet Sauvignon’)体细胞胚再生体系,以花后80 d未成熟合子胚为外植体,探究了促进初生胚萌发的最佳处理方式以及激素组合对次生体细胞胚直接与间接发生的影响。采用不同浓度(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 g·L^(-1))赤霉素处理、不同时长(2、5、10、15、30 min)超声处理、不同破皮方式(切割种背、切喙+切割种背、磨砂)处理诱导初生胚,进而将已获取初生胚的子叶、胚轴、胚根分别切段放置于添加4种不同浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D;0.5、1.0、1.5、2.0 mg·L^(-1))和6-苄氨基嘌呤(6-BA;1.0、2.0、3.0、4.0 mg·L^(-1))组合的MS培养基中循环诱导次生胚。结果表明:在初生胚诱导中, 2.5 g·L^(-1)赤霉素、超声2 min、切喙+切割种背三种处理可大幅提高初生胚的诱导率, 11 d时诱导率分别为97.28%、98.64%与92.47%,对照组仅68.42%;在次生胚诱导中,添加0.5、1.0、1.5 mg·L^(-1)2,4-D和1.0、2.0、3.0 mg·L^(-1)6-BA的MS培养基有利于愈伤组织增殖并可通过间接途径产生体胚, 90 d时诱导率在6.45%~17.15%之间。在添加4种不同浓度2,4-D和6-BA组合的MS培养基中, 2.0 mg·L^(-1)2,4-D和4.0 mg·L^(-1)6-BA组合的体细胞胚诱导率最高, 90 d成胚率达到21.33%,次生胚在子叶褐化处直接形成。94%的正常次生胚可萌发并再生植株,生根率达100%。本研究所建立的‘赤霞珠’未成熟合子胚体细胞胚诱导方法为葡萄属植物再生体系优化完善和遗传转化应用研究提供参考依据。

关键词： ‘赤霞珠’葡萄未成熟合子胚体细胞胚超声处理直接发生

黄龙病菌感染对长春花SOD和POD活性的影响

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广东农业科学 2019年第1期46卷 71-78页

作者：李亚余沁涵鲍敏丽陈燕玲邓晓玲广东海洋大学农学院广东湛江524088 华南农业大学柑橘黄龙病研究室广东广州510642

【目的】比较黄龙病菌感染对长春花叶、茎、根3个组织中超氧化物岐化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的影响。【方法】采用分光光度计法测定黄龙病菌感染后长春花叶、茎、根3个组织中SOD和POD的活性。【结果】染病长春花中SOD活性随感染... 详细信息

【目的】比较黄龙病菌感染对长春花叶、茎、根3个组织中超氧化物岐化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的影响。【方法】采用分光光度计法测定黄龙病菌感染后长春花叶、茎、根3个组织中SOD和POD的活性。【结果】染病长春花中SOD活性随感染时间的增加,逐渐下降,活性最低时,叶、茎和根SOD活性分别只有健康对照的61%、55%和47%。3个组织间SOD活性总体表现为叶>茎>根。染病长春花中POD活性随感染时间的增加呈现先上升后下降的趋势,叶、茎和根POD活性最高出现在嫁接后30、35、35 d,活性分别为健康对照的205%、254%和194%,根中POD活性总体较叶、茎部高。【结论】黄龙病菌感染对长春花各组织中SOD和POD酶的活性均有较大影响,SOD和POD活性的增加对长春花抵抗CaLas侵染起重要作用。

关键词：长春花黄龙病菌超氧化物岐化酶(SOD) 过氧化物酶(POD) 酶活力

山葡萄转录因子VaMYB4a互作蛋白的筛选与鉴定

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园艺学报 2023年第3期50卷 508-522页

作者：俞沁含李俊铎崔莹王佳慧郑巧玲徐伟荣宁夏大学农学院银川750021 宁夏大学食品与葡萄酒学院银川750021 葡萄与葡萄酒教育部工程研究中心银川750021 宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室银川750021

以抗寒种质山葡萄(Vitis amurensis Rupr.)‘左山-1’叶片组织为试材,通过Gateway技术构建酵母均一化cDNA文库,库容量为1.36×10^(7)cfu∙mL^(-1),外源基因插入片段均大于1 kb,重组率为100%,符合后续试验要求。以VaMYB4a^(113-252)C端调... 详细信息

以抗寒种质山葡萄(Vitis amurensis Rupr.)‘左山-1’叶片组织为试材,通过Gateway技术构建酵母均一化cDNA文库,库容量为1.36×10^(7)cfu∙mL^(-1),外源基因插入片段均大于1 kb,重组率为100%,符合后续试验要求。以VaMYB4a^(113-252)C端调控区段为诱饵,经酵母双杂交筛选获得17个候选互作蛋白,选取2个与非生物胁迫应答密切相关的候选互作蛋白分别在酵母、拟南芥原生质体中进行互作验证,发现锌指类转录因子VaCOL4、VaCOL5均与VaMYB4a全长及VaMYB4a113-252存在互作关系。经系统进化与蛋白保守结构域分析,推测葡萄COL基因家族中VaCOL2与VaMYB4a具有潜在互作关系,进而通过BiFC验证表明,VaCOL2与VaMYB4发生蛋白互作;顺式作用元件预测表明VvCOL2、VvCOL4与VvCOL5启动子区包含多个激素及逆境应答相关元件,其中VvCOL2包括多个低温响应元件(LTRE);低温胁迫下,VaMYB4a、VaCOL4与VaCOL5具有相同的表达模式,但VaCOL2表达模式不同。综上,VaMYB4a可与VaCOL2、VaCOL4及VaCOL5互作形成蛋白复合体以协同或拮抗的方式调控植物低温胁迫应答。

关键词：山葡萄低温胁迫 Gateway酵母双杂交文库 VaMYB4a VaCOL 互作分析

Electromagnetic Properties of a New Microwave Plasma Torch with Double Resonance Configuration

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Chemical Research in Chinese Universities 2016年第4期32卷 549-555页

作者： yu Bingwen JIN Wei ZHU Dan YING Yangwei yu Haixiang SHAN Jin XU Chen LIU Wenlong JIN qinhan Research Center for Analytical Instrumentation Institute of Cyber-systems and ControlCollege of Control Science and Engineering Zhejiang University Hangzhou 310058 P. R. China Zhejiang Supcon Research Co. Ltd. Hangzhou 310058 P. R. China

In order to obtain a stable plasma and improve the performance of the torch for atomic emission spectroscopy（AES）, the structure of microwave plasma torch（MPT） was analyzed. The transmission and distribution characteristics of the electromagnetic field of the torch configuration with two or three concentric tubes, as well as the metal spacer between inner and intermediate tubes with different depths were simulated with electromagnetic simula- tion software and verified by experiments. The results indicate that the inner tube of MPT plays an important role in strengthening the electric field intensity at the opening end of the MPT and redistributing the electromagnetic field in the whole torch by forming a double resonance configuration, and contributes to enhancing the macroscopic stability and the self-sustainment of the plasma. The stability of the plasma is proved to be excellent when the metal spacer between the inner and intermediate tubes is located at a place 20-30 mm away from the top opening of the torch. A proper location of the spacer can also avoid the formation of a static filament plasma or a rotating plasma rooted from the outer wall of the inner tube. With the help of morphological analysis, the underlying reason why MPT possesses a great tolerance to wet aerosols and air introduction was clearly made, that is, the formation region of the plasma formed with MPT is apparently separated from the reaction zone of it.

关键词： Microwave plasma torch(MPT) Double resonance configuration Electromagnetic simulation

柠檬叶片溃疡病菌的分离鉴定及室内防治药剂筛选

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中国农学通报 2021年第24期37卷 146-153页

作者：李亚蔡永军余沁涵孔少连周晓晴张颖荷广东海洋大学滨海农业学院广东湛江524088

为了明确湛江地区柑橘溃疡病的病原类型并筛选出高效的防治药剂。以柠檬病叶为材料,用组织分离法对病样进行病原菌分离鉴定后,通过抑菌圈法测定了5种常用药剂对该病原菌的室内毒力。典型菌株zlm1908在NA培养基上菌落呈蜡黄色,圆形,全缘... 详细信息

为了明确湛江地区柑橘溃疡病的病原类型并筛选出高效的防治药剂。以柠檬病叶为材料,用组织分离法对病样进行病原菌分离鉴定后,通过抑菌圈法测定了5种常用药剂对该病原菌的室内毒力。典型菌株zlm1908在NA培养基上菌落呈蜡黄色,圆形,全缘,有光泽,微隆起,黏稠,回接健康柠檬叶片后能产生明显的溃疡病斑,结合生理生化反应特点和特异性引物扩增序列分析确定菌株zlm1908为柑橘黄单胞柑橘亚种(Xanthomonas citri ***,Xcc)。5种药剂对菌株zlm1908的EC50值分别为18.45 g/L、14.99 g/L、5.28 g/L、14.60 g/L和32.81 g/L。从EC50的大小可以看出5种杀菌剂中枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,其次为中生菌素,碱式硫酸铜和氢氧化铜,氯溴异氰尿酸抑制作用最弱。

关键词：柑橘溃疡病菌病原鉴定杀菌剂毒力测定

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一种新型的等离子体光源

吉林大学自然科学学报 1985年第1期 90-92页

作者：金钦汉杨广德于爱民刘军张寒琦贲跃芝化学系分析化学教研室化学系分析化学教研室

以ICP为代表的等离子体光源是60年代才发展起来的发射光谱分析的新光源。但是,常用于ICP光源的气体为氩气,不适于卤素等非金属元素的测定,且氩气用量大,耗电量也高,使用受到了一定限制。 MIP可以氩、氦或氮为工作气体在常压下工作。在... 详细信息

以ICP为代表的等离子体光源是60年代才发展起来的发射光谱分析的新光源。但是,常用于ICP光源的气体为氩气,不适于卤素等非金属元素的测定,且氩气用量大,耗电量也高,使用受到了一定限制。 MIP可以氩、氦或氮为工作气体在常压下工作。在以氦气工作时,能够激发包括卤素在内的所有元素。但是,由于放电是在谐振腔内的石英管中形成,功率又小,所以样品承受能力很小,不适于溶液样品的分析。

关键词：谐振腔发射光谱分析工作气体石英管初步实验电极头管结构实物照片检测下限升/分

Development of a Novel Kilowatt Microwave Plasma Torch Source for Atomic Emission Spectrometry

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Chemical Research in Chinese Universities 2017年第5期33卷 709-713页

作者： ZHU Dan JIN Wei yu Bingwen YING Yangwei yu Haixiang SHAN Jin YAN yuwei XU Chen WANG Baolai JIN qinhan Research Center for AnalyticaI Instrumentation Institute of Cyber-systems and ControlCollege of Control and Engineering Zhejiang University Hangzhou 310058 P. R. China Zhejiang Tracetech Technology Co. Ltd. Hangzhou 310053 P. R. China Hangzhou Steam Turbine Co. Ltd. Hangzhou 310022 P R. China

Traditional low power-microwave plasma torch（MPT） excitation source of atomic emission spectrometry was shown to be good for the introduction of dry aerosols, but poor for wet sample aerosols. In this work, some significant modifications have been made to traditional MPT. A new MPT excitation source working at kilowatt microwave power has been developed. The kilowatt MPT source can sustain stable plasmas with double or even more filaments, presenting a ＂bell＂ form, where the region around the converging point is the optimum region for analysis. The tolerance to aqueous aerosol of the torch is enhanced significantly compared to the traditional one. Therefore, the desolvation system that the low power MPT source has to be relied on can be gotten rid of. A set of favorable detection results have been obtained with direct wet sample aerosol introduction. The kilowatt MPT source is expected to become a practical excitation source for atomic emission spectrometry that will be widely used.

关键词： Kilowatt microwave plasma torch Coupling structure Direct sample aerosol introduction Atomic emis- sion spectrometry

A Study on the Determination of Copper by Microwave Induced Plasma Atomic Emission Spectrometry (MIP-AES)

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Chemical Research in Chinese Universities 1990年第3期6卷 177-182页

作者： Zhang Hanqi, yu Shirong, Zhang Xiaohui, Lu Hui and Jin qinhan (Department of Chemistry, Jilin University, Changchun)

The determination of copper by MIP-AES was investigated in detail. Aqueous samples were introduced from an ultrasonic nebulizer and the solvent was removed by a desolvation device before introduction of the aerosol into the MIP. The desolvation system consisted of a condenser associated with a concentrated H2SO4 absorption cell. Various experimental conditions and interferences from easily ionised elements (EIEs) were also studied and some practical samples were analyzed.

关键词： Copper Microwave induced plasma atomic emission spectroscopy Easly ionised elements