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Clay nanosheet-mediated delivery of recombinant plasmids expressing artificial miRNAs via leaf spray to prevent infection by plant DNA viruses

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Horticulture Research 2020年第1期7卷 515-526页

作者： Qili Liu Yanpeng Li Kedong Xu Dongxiao Li Haiyan Hu Feng Zhou puwen song Yongang Yu Qichao Wei Qian Liu Weipeng Wang Ruifang Bu Haili Sun Xiaohui Wang Jianjun Hao Honglian Li Chengwei Li Postdoctoral Research Base Henan Institute of Science and TechnologyXinxiangChina College of Plant Protection Henan Agricultural UniversityZhengzhouHenanChina Henan Engineering Research Center of Crop Genome Editing Henan Institute of Science and TechnologyXinxiangChina State Key Laboratory of Pulp&Paper Engineering South China University of TechnologyGuangzhouChina Key Laboratory of Plant Genetics and Molecular Breeding Zhoukou Normal UniversityZhoukouChina School of Food and Agriculture The University of MaineOronoME 04469USA

Whitefly-transmitted begomoviruses are economically important plant pathogens that cause severe problems in many crop plants,such as tomato,papaya,cotton,and *** yellow leaf curl virus(TYLCV)is a typical monopartite begomovirus that has been extensively studied,but methods that can efficiently control begomoviruses are still *** this study,we combined artificial microRNA(amiRNA)-mediated silencing technology and clay nanosheetmediated delivery by spraying and developed a method for efficiently preventing TYLCV infection in tomato *** designed three amiRNAs that target different regions of TYLCV to silence virus-produced *** plant expression vectors expressing pre-amiRNAs were constructed,and recombinant plasmid DNAs(pDNAs)were loaded onto nontoxic and degradable layered double hydroxide(LDH)clay *** nanosheets containing multiple pDNAs were sprayed onto plant *** found that the designed amiRNAs were significantly accumulated in leaves 7 days after spraying,while the pDNAs were sustainably detected for 35 days after the spray,suggesting that the LDH nanosheets released pDNAs in a sustained manner,protected pDNAs from degradation and efficiently delivered pDNAs into plant ***,when the LDH nanosheets coated with pDNAs were sprayed onto plants infected by TYLCV,both the disease severity and TYLCV viral concentration in sprayed plants were significantly decreased during the 35 days,while the levels of H_(2)O_(2) were significantly increased in those *** together,these results indicate that LDH nanosheets loaded with pDNAs expressing amiRNAs can be a sustainable and promising tool for begomovirus control.

关键词： expressing artificial sustained

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小麦果糖激酶基因TaFRK与TaPFT的互作分析

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麦类作物学报 2021年第11期41卷 1339-1346页

作者：张露凡宋普文毋柳柳胡海燕李成伟河南科技学院生命科技学院/河南省植物遗传改良与土壤修复国际联合实验室河南新乡453000

小麦赤霉病是全球性病害,严重威胁着中国的小麦粮食安全。目前已经明确的抗赤霉病位点有7个(Fhb1~Fhb7)。其中Fhb1位点是3BS染色体上稳定性和效应最大的抗扩展位点。TaPFT是Fhb1位点上的抗性基因之一,但其抗性机理并不清楚。本研究以Ta... 详细信息

小麦赤霉病是全球性病害,严重威胁着中国的小麦粮食安全。目前已经明确的抗赤霉病位点有7个(Fhb1~Fhb7)。其中Fhb1位点是3BS染色体上稳定性和效应最大的抗扩展位点。TaPFT是Fhb1位点上的抗性基因之一,但其抗性机理并不清楚。本研究以TaFRK为诱饵蛋白通过酵母双杂交技术筛选小麦酵母双杂交文库,从而得到互作基因TaFRK,其编码蛋白为果糖激酶。进一步通过构建酵母双杂交载体和双分子荧光互补载体分析TaFRK与TaPFT之间的互作关系,并通过qPCR分析TaFRK受到禾谷镰刀菌孢子诱导后的表达模式。通过酵母双杂交试验发现,共转pGBKT7-TaPFT和pGADT7-TaFRK的酵母菌株Y2HGlod在含有X-α-Gal和金担子素A(Aureobasidin A,AbA)的四缺培养基SD/-His-Leu-Trp-Ade上长出蓝色菌落,证明TaFRK与TaPFT在酵母中互作。通过双分子荧光互补试验发现,在共转YN-TaPFT和YC-TaFRK表达载体的烟草叶片中可观察到强烈的黄色荧光信号,表明TaFRK与TaPFT在植物细胞中能够发生相互作用。实时荧光定量PCR分析发现,禾谷镰刀菌孢子侵染抗性小麦后,TaFRK基因表达量升高,说明TaFRK基因的表达受禾谷镰刀菌侵染诱导。本研究结果对进一步研究TaPFT的赤霉病抗性机制具有一定的参考价值。

关键词：小麦赤霉病酵母双杂交双分子荧光互补 TaPFT RT-qPCR TaFRK

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2个大豆RNA依赖的RNA聚合酶基因GmRDR6a和GmRDR6b的克隆与分析

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南京农业大学学报 2014年第3期37卷 27-34页

作者：吴冰月宋普文陈华涛崔瑾许晓明陈新南京农业大学生命科学学院江苏南京210095 江苏省农业科学院蔬菜研究所江苏南京210014 南京农业大学农学院江苏南京210095

利用同源克隆的方法从大豆品种‘科丰一号’中分离出2个RDR6基因,分别将其命名为GmRDR6a和GmRDR6b基因,并对其进行序列分析、植物组织表达以及抗逆境胁迫表达分析。结果表明:GmRDR6a基因位于大豆基因组的6号染色体上,基因全长为4 389 bp... 详细信息

利用同源克隆的方法从大豆品种‘科丰一号’中分离出2个RDR6基因,分别将其命名为GmRDR6a和GmRDR6b基因,并对其进行序列分析、植物组织表达以及抗逆境胁迫表达分析。结果表明:GmRDR6a基因位于大豆基因组的6号染色体上,基因全长为4 389 bp,包含一个长度为744 bp的内含子,其ORF长度为3 615 bp,编码1 204个氨基酸,相对分子质量和等电点分别为297.5×103和4.86;GmRDR6b基因位于大豆基因组的4号染色体上,基因全长为4 002 bp,包含一个长度为387 bp的内含子,其ORF长度为3 615 bp,编码1 204个氨基酸,相对分子质量和等电点分别为296.89×103和4.86;GmRDR6a和GmRDR6b都含有RDRs家族的保守序列DLDGD;2个基因在所有被检测组织中均表达,并且在花中的表达量最高;荧光定量结果表明:在大豆花叶病毒(SMV)处理下,2个基因在抗病材料‘科丰一号’中的表达量均显著高于感病材料‘南农1138-2’,在非生物胁迫下,GmRDR6a基因在盐和干旱处理下根、茎、叶组织中的表达量均提高,其中盐处理下根中的表达量最高,ABA诱导条件下出现早期响应,但是在冷害处理下该基因的表达量没有明显变化;GmRDR6b基因在盐、ABA处理下,表达量很高,冷害处理下出现早期响应,但是在干旱条件下,该基因表达趋势不明显。

关键词：大豆基因克隆组织表达荧光定量PCR 生物胁迫非生物胁迫

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小麦mRNA剪接因子TaSR与TaHis的互作鉴定及其基因表达分析

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华北农学报 2024年第3期39卷 166-172页

作者：宋普文邓佳乐杜玉新陈家美敬月婷刘俊彤李澳胡海燕河南科技学院农学院河南省粮食作物基因组编辑工程技术研究中心河南省植物遗传改良与土壤修复国际联合实验室河南新乡453000

为研究TaHis基因对小麦赤霉病的抗性机制,首先克隆了TaHis基因全长编码序列,构建了pGBKT7-TaHis诱饵载体,通过酵母双杂交技术对赤霉病诱导的小麦穗部酵母双杂交文库进行筛选,获得互作蛋白后利用酵母双杂交技术和双分子荧光互补技术验证... 详细信息

为研究TaHis基因对小麦赤霉病的抗性机制,首先克隆了TaHis基因全长编码序列,构建了pGBKT7-TaHis诱饵载体,通过酵母双杂交技术对赤霉病诱导的小麦穗部酵母双杂交文库进行筛选,获得互作蛋白后利用酵母双杂交技术和双分子荧光互补技术验证蛋白质之间的互作,并利用RT-qPCR技术对抗感小麦材料中TaHis互作蛋白的赤霉病诱导表达模式进行分析。结果表明,成功构建了pGBKT7-TaHis诱饵载体,经过酵母双杂交文库筛选后,在四缺选择培养基(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)上获得了18个酵母单克隆。测序后Blast分析发现,共获得5个可能与TaHis互作的蛋白质,其中在6个酵母单克隆中均鉴定到富含丝氨酸/精氨酸的mRNA剪接因子SR45a类蛋白(TaSR)编码序列。以百农4299为材料,克隆了TaSR基因全长编码区,并构建了pGADT7-TaSR载体,酵母双杂交试验表明,pGADT7-TaSR和pGBKT7-TaHis共转化的酵母细胞在四缺培养基(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal/AbA)上可以生长且显蓝色,表明TaSR和TaHis在酵母细胞中直接互作;构建了YC-TaHis、YN-TaSR载体,双分子荧光互补试验表明,共转化YC-TaHis和YN-TaSR的烟草细胞中产生强烈荧光信号,进一步验证了TaSR与TaHis的互作。RT-qPCR分析显示,TaSR在抗性材料百农4299中受赤霉病诱导后上调表达,在感病材料百农607中受赤霉病诱导后下调表达,表明TaSR基因表达量与小麦赤霉病抗性呈正相关。综上,小麦TaSR与TaHis存在相互作用,且TaSR基因表达量与小麦赤霉病抗性呈正相关。

关键词：小麦赤霉病 TaHis TaSR 酵母双杂交双分子荧光互补 RT-qPCR

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干燥综合征鼻部表现

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2020年第9期34卷 850-852页

作者：张普文宋瑞彪巴云鹏杨双双郑州大学第一附属医院鼻科郑州450052

1病例资料患者,女,43岁,2018年12月11日以"鼻部干燥、刺痛5个月"为主诉入院。患者2018年7月无明显诱因出现鼻腔干燥、鼻部持续刺痛,未特殊治疗;2018年8月鼻腔干燥、刺痛症状较前加重,伴随眼干、口干症状,并相继出现发热、进食需饮水辅... 详细信息

1病例资料患者,女,43岁,2018年12月11日以"鼻部干燥、刺痛5个月"为主诉入院。患者2018年7月无明显诱因出现鼻腔干燥、鼻部持续刺痛,未特殊治疗;2018年8月鼻腔干燥、刺痛症状较前加重,伴随眼干、口干症状,并相继出现发热、进食需饮水辅助等症状,体温波动在37~39℃;2018年9月除上述症状外又出现呼吸困难、张口呼吸症状。入院查体:双侧鼻腔狭窄,鼻中隔前端黏膜肿胀,口腔黏膜干燥、草莓舌,既往无特殊。

关键词：干燥综合征鼻临床表现

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合并心血管疾病患者鼻内镜围手术期的治疗

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2020年第3期34卷 235-239页

作者：张普文巴云鹏周明辉宋瑞彪杨双双郑州大学第一附属医院鼻科郑州450052

目的:探讨合并心血管疾病的鼻科患者鼻内镜手术围手术期的处理措施。方法:对62例合并心血管疾病的鼻科患者进行鼻内镜手术治疗,根据患者围手术期病情采用个体化内科处理措施,然后行功能性鼻内镜手术。结果:2例患者鼻内镜术后出现心血管... 详细信息

目的:探讨合并心血管疾病的鼻科患者鼻内镜手术围手术期的处理措施。方法:对62例合并心血管疾病的鼻科患者进行鼻内镜手术治疗,根据患者围手术期病情采用个体化内科处理措施,然后行功能性鼻内镜手术。结果:2例患者鼻内镜术后出现心血管并发症,转内科治疗;1例患者术后大出血,再次全身麻醉鼻内镜下手术止血;余59例患者术后未见不良心血管事件,且无大出血、视力损伤、脑脊液鼻漏等并发症。所有患者术后均随访半年以上,鼻腔鼻窦病情完全控制39例(62.90%),部分控制18例(29.03%),有效率达91.94%。结论:合理的围手术期处理措施可以降低合并心血管疾病患者鼻腔鼻窦手术风险、确保手术顺利实施并取得良好的预后。

关键词：内镜外科手术心血管疾病围手术期

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创造传统：新院体中国画邀请展

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艺术探索 2003年第2期17卷 6-16页

作者：李普文

前言以皇家画院宫廷画家的创作为标志,10～13世纪的两宋院体绘画确立了中国古典绘画的经典图式和形象语言,代表了中国画的高峰和典范,是中国艺术最宝贵的传统.元代以后,以对立的姿态兴起的文人画,依然时时浮现院体的精魂.院体,已不再只... 详细信息

前言以皇家画院宫廷画家的创作为标志,10～13世纪的两宋院体绘画确立了中国古典绘画的经典图式和形象语言,代表了中国画的高峰和典范,是中国艺术最宝贵的传统.元代以后,以对立的姿态兴起的文人画,依然时时浮现院体的精魂.院体,已不再只是一种风格或者流派,它以自己的创造有力地促进了中国画视觉语言和画种体系的形成.

关键词： “创造传统——新院体中国画邀请展” 深圳市关山美术馆参展画家赵绪成周觊黄格胜朱道平董小明阮荣春宋玉明范扬艺术风格绘画技法

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云南热区西南桦人工纯林林地土壤的有机碳含量研究

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西部林业科学 2007年第1期36卷 57-60页

作者：倪金碧王卫斌田昆宋洪涛梁妮西南林学院云南昆明650224 云南省林业科学院云南昆明650204

在云南西双版纳的普文试验林场,通过对不同龄期西南桦人工纯林林地土壤有机碳含量的比较,并以当地的山地雨林、林龄较为接近的西南桦次生林和黄水(黄牛水+水锦树)次生林林地的土壤有机碳含量为参照,作了对比分析;还对西南桦人工纯林林... 详细信息

在云南西双版纳的普文试验林场,通过对不同龄期西南桦人工纯林林地土壤有机碳含量的比较,并以当地的山地雨林、林龄较为接近的西南桦次生林和黄水(黄牛水+水锦树)次生林林地的土壤有机碳含量为参照,作了对比分析;还对西南桦人工纯林林地土壤的有机碳含量与其土壤肥力状况及物理性状的相关性进行了研究。结果表明:西南桦人工纯林随着林龄的增长,其林地土壤有机碳含量呈现出先维持再积累上升的趋势;15年生的西南桦人工纯林林地土壤的有机碳含量水平与黄水(黄牛水+水锦树)次生林相近,随其林龄的增长,预计会超过黄水(黄牛水+水锦树)次生林而接近于山地雨林。西南桦人工纯林林地土壤有机碳含量与其土壤全N、水解N、速效K含量、总孔隙度和毛管孔隙度等指标呈显著正相关,与土壤容重呈显著负相关,因此,西南桦人工纯林林地土壤的有机碳水平可用以指示其土壤的肥力状况。

关键词：云南热区西南桦人工纯林林地土壤有机碳含量

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黑老虎实生容器苗苗木分级标准研究

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西部林业科学 2015年第3期44卷 138-142页

作者：尹艾萍付玉嫔包松莲祁荣频毛云玲郝佳波司马永康张荣贵刘冬芬云南省林业科学院云南昆明650201 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室国家林业局开放性重点实验室云南珍稀濒特森林植物保护和繁育实验室云南昆明650201 中国林业科学研究院资源昆虫研究所云南昆明650224 云南省森林植物培育与开发利用重点实验室国家林业局开放性重点实验室云南珍稀濒特森林植物保护和繁育实验室云南昆明650201 红河州林业科学研究所云南蒙自661199

为解决人工培育藤本植物黑老虎的苗木质量问题,采用相同培育措施下不同种源8月龄的黑老虎实生容器苗的藤高和地径作为其苗木质量的数量评价指标。利用藤高、地径标准化值总和的一维图和SPSS聚类树状图互为参考,对黑老虎苗木进行逐步分... 详细信息

为解决人工培育藤本植物黑老虎的苗木质量问题,采用相同培育措施下不同种源8月龄的黑老虎实生容器苗的藤高和地径作为其苗木质量的数量评价指标。利用藤高、地径标准化值总和的一维图和SPSS聚类树状图互为参考,对黑老虎苗木进行逐步分级、修正达到最终分级,提出黑老虎不同种源的实生容器苗合格苗木标准为:屏边种源,H≥44.4 cm,D≥0.39 cm;河口种源,H≥22.2 cm,D≥0.40 cm;普文种源,H≥24.1 cm,D≥0.48 cm;景东种源,H>14.7 cm,D≥0.38 cm;勐海种源,H>21.2 cm,D≥0.41 cm;大渡岗种源,H>19.0cm,D≥0.47 cm。不同黑老虎种源苗木在相同培育条件下藤高、地径差异极显著,出圃苗木应区别对待。

关键词：黑老虎木质藤本 SPSS聚类分析苗木质量

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