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Macroscale fluorescence imaging against autofluorescence under ambient light

Light(Science & Applications) 2018年第1期7卷 151-162页

作者： Ruikang Zhang Raja Chouket marie-aude plamont Zsolt Kelemen Agathe Espagne Alison G.Tebo Arnaud Gautier Lionel Gissot Jean-Denis Faure Ludovic Jullien Vincent Croquette Thomas Le Saux PASTEUR Département de ChimieÉcole Normale SupérieurePSL UniversitySorbonne UniversitéCNRS75005 ParisFrance Institut Jean-Pierre Bourgin INRAAgroParisTechCNRSSaclay Plant Science(SPS)UniversitéParis-SaclayVersaillesFrance Laboratoire de Physique Statistique École Normale SupérieurePSL Research UniversityUniversitéParis Diderot Sorbonne Paris-CitéSorbonne UniversitéCNRS75005 ParisFrance Institut de biologie de l’École normale supérieure(IBENS) École Normale SupérieureCNRSINSERMPSL Research University75005 ParisFrance

Macroscale fluorescence imaging is increasingly used to observe biological ***,it may suffer from spectral interferences that originate from ambient light or autofluorescence of the sample or its *** this manuscript,we built a simple and inexpensive fluorescence macroscope,which has been used to evaluate the performance of Speed OPIOM(Out of Phase Imaging after Optical Modulation),which is a reference-free dynamic contrast protocol,to selectively image reversibly photoswitchable fluorophores as labels against detrimental autofluorescence and ambient *** tuning the intensity and radial frequency of the modulated illumination to the Speed OPIOM resonance and adopting a phase-sensitive detection scheme that ensures noise rejection,we enhanced the sensitivity and the signal-to-noise ratio for fluorescence detection in blot assays by factors of 50 and 10,respectively,over direct fluorescence observation under constant ***,we overcame the strong autofluorescence of growth media that are currently used in microbiology and realized multiplexed fluorescence observation of colonies of spectrally similar fluorescent bacteria with a unique configuration of excitation and emission ***,we easily discriminated fluorescent labels from the autofluorescent and reflective background in labeled leaves,even under the interference of incident light at intensities that are comparable to *** proposed approach is expected to find multiple applications,from biological assays to outdoor observations,in fluorescence macroimaging.

关键词： ambient illumination light

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