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Expression of reconstructive hF Ⅷ in the hrDNA by using hrDNA targeting vector

Chinese Science Bulletin 2005年第19期50卷 2187-2192页

作者： liu xionghao liu mujun she hua wen lu xue zhigang liang desheng cai fang pan qian long zhigao wu lingqian dai heping xia kun xla jiahui National Lab of Medical Genetics of China Central South UniversityChangsha 410078 China

Our lab has constructed a new nonviral vec-tor—hrDNA targeting vector(pHrneo). pHrneo is a human derived vector that can target gene into human ribosomal DNA(hrDNA) locus. In this study, we inserted expression cassette of reconstructive hF Ⅷ (hFVIII-BDDAK39) to pHrneo to construct targeting vector: pHrneo-BDDAK39. Through electroporation of pHrneo-BDDAK39 into HT1080 cells, we identified the homologous recombinants by PCR and Southen blotting, and tested the expression of hFVIII- BDDAK39 in the hrDNA locus. The hFⅧ-BDDAK39 was successfully targeted into hrDNA locus of HT-1080 by pHrneo-BDDAK39, and the efficiency of site-specific inte-gration was 2.0×10?5. hFⅧ-BDDAK39 in hrDNA locus of HT-1080 is found to be able to express efficiently (32±5 ng·106 cells?1·24 h?1). Targeting vector pHrneo-BDDAK39 can find use in gene therapy for hemophilia.

关键词： hrDNA 目标向量人类起源遗传表达核糖体器官重组

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