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Programmable endonuclease combined with isothermal polymerase amplification to selectively enrich for rare mutant allele fractions

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Chinese Chemical Letters 2022年第8期33卷 4126-4132页

作者： junman chen Tian Qiu Michael G.Mauk Zheng Su Yaguang Fan Dennis J.Yuan Qinghua Zhou Youlin Qiao Haim H.Bau Jianming Ying Jinzhao Song Key Laboratory of Clinical Laboratory Diagnostics(Ministry of Education) College of Laboratory MedicineChongqing Medical UniversityChongqing 400016China The Cancer Hospital of the University of Chinese Academy of Sciences(Zhejiang Cancer Hospital) Institute of Basic Medicine and Cancer(IBMC)Chinese Academy of SciencesHangzhou 310022China Department of Mechanical Engineering and Applied Mechanics University of PennsylvaniaPhiladelphiaPA 19104United States Department of Pathology National Cancer Center/National Clinical Research Center for Cancer/Cancer HospitalChinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical CollegeBeijing 100021China Center for Global Health School of Population Medicine and Public HealthChinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical CollegeBeijing 100730China Tianjin Key Laboratory of Lung Cancer Metastasis and Tumor Microenvironment Tianjin Lung Cancer InstituteTianjin Medical University General HospitalTianjin 300052China Sichuan Lung Cancer Institute Sichuan Lung Cancer CenterWest China HospitalSichuan UniversityChengdu 610041China

Liquid biopsy is a highly promising method for non-invasive detection of tumor-associated nucleic acid fragments in body fluids but is challenged by the low abundance of nucleic acids of clinical interest and their sequence homology with the vast background of nucleic acids from healthy ***,programmable endonucleases such as clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)associated protein(Cas)and prokaryotic Argonautes have been successfully used to remove background nucleic acids and enrich mutant allele fractions,enabling their detection with deep next generation sequencing(NGS).However,the enrichment level achievable with these assays is limited by futile binding events and off-target *** overcome these shortcomings,we conceived a new assay(Programmable Enzyme-Assisted Selective Exponential Amplification,PASEA)that combines the cleavage of wild type alleles with concurrent polymerase *** PASEA increases the numbers of both wild type and mutant alleles,the numbers of mutant alleles increase at much greater rates,allowing PASEA to achieve an unprecedented level of selective enrichment of targeted *** combining CRISPR-Cas9 based cleavage with recombinase polymerase amplification,we converted samples with0.01%somatic mutant allele fractions(MAFs)to products with 70%MAFs in a single step within 20 min,enabling inexpensive,rapid genotyping with such as Sanger ***,PASEA's extraordinary efficiency facilitates sensitive real-time detection of somatic mutant alleles at the point of care with custom designed Exo-RPA ***-time PASEA'performance was proved equivalent to clinical amplification refractory mutation system(ARMS)-PCR and NGS when testing over hundred cancer patients'*** strategy has the potential to reduce the cost and time of cancer screening and genotyping,and to enable targeted therapies in resource-limited settings.

关键词： Mutant allele enrichment Programmable endonuclease Liquid biopsy Mutation detection Point-of-care testing CRISPR-Cas9 Recombinase polymerase amplification Nucleic acid diagnostics

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自体骨-异种骨混合的钛网支撑的引导骨再生伴角化龈增量的美学区连续牙列缺损种植修复一例

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中国口腔种植学杂志 2024年第3期29卷 272-276页

作者：蒋娟娜李俊满陈琳谢亮焜昆明医科大学附属口腔医院口腔种植科云南650000 保山市人民医院口腔医学中心云南678000

本病例报告了一例自体骨-异种骨混合的钛网支撑的引导骨再生(guided bone regeneration,GBR)伴角化龈增量的美学区连续牙列缺损种植修复。患者因外伤致上颌前牙区骨折、水平向骨丧失,连续多颗天然牙缺失。临床治疗取自体骨混合去蛋白牛... 详细信息

本病例报告了一例自体骨-异种骨混合的钛网支撑的引导骨再生(guided bone regeneration,GBR)伴角化龈增量的美学区连续牙列缺损种植修复。患者因外伤致上颌前牙区骨折、水平向骨丧失,连续多颗天然牙缺失。临床治疗取自体骨混合去蛋白牛骨矿物质(deproteinized bovine bone mineral,DBBM)异种骨填入骨缺损区,在唇侧放置钛网和生物可吸收性胶原膜。半年后行简易修复导板引导下种植体植入,二期术前行角化龈增量,临时修复体佩戴6个月后完成最终美学修复。结果可见,自体骨-异种骨混合的钛网支撑的GBR获得了理想的骨增量效果,为种植体植入提供了理想的位点,同时角化龈增量手术为最终美学修复提供了令医患满意的临床效果。因此,自体骨-异种骨混合用于钛网支撑的GBR是一种增加前牙区水平骨量的有效方法。

关键词：美学区种植引导骨再生自体骨钛网角化龈增量

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酒精对乙型肝炎病毒复制和基因表达的影响

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临床医学 2007年第4期27卷 75-77页

作者：赵卫东朱建友陈建孙建王敏刘福国李君曼山东省淄博市临淄区人民医院消化内科淄博255400 山东大学齐鲁医院

目的研究酒精对乙肝病毒复制和基因表达的影响,并探讨其发生机制。方法通过灌胃途径对实验组HBV转基因小鼠予以酒精干预,并在实验第6周末处死。同期设生理盐水组作为对照。定量测定血清HBV-DNA、HBsAg、HBeAg水平,肝组织切片行HBcAg免... 详细信息

目的研究酒精对乙肝病毒复制和基因表达的影响,并探讨其发生机制。方法通过灌胃途径对实验组HBV转基因小鼠予以酒精干预,并在实验第6周末处死。同期设生理盐水组作为对照。定量测定血清HBV-DNA、HBsAg、HBeAg水平,肝组织切片行HBcAg免疫组化。检测血清HBV-DNA阳性查体者戒酒前后血清病毒载量水平。结果HBV转基因小鼠酒精组血清HBV-DNA载量、HBsAg水平、HBeAg阳性率高于对照组;转基因小鼠酒精组肝细胞HB-cAg免疫组化阳性率较对照组明显升高;轻度饮酒组戒酒前后病毒载量差异无统计学意义,中度饮酒组与重度饮酒组戒酒前后病毒载量差异均有统计学意义。结论酒精能促进体内HBV-DNA复制和基因表达。

关键词：酒精乙型肝炎病毒转基因小鼠基因表达

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饲粮能量和蛋白质水平对21~56日龄青铜火鸡生长性能和血清生化指标的影响

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安徽农业大学学报 2022年第1期49卷 92-97页

作者：徐晨杨芷杨海明王莹鲁曼杨永磊廖正军扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 扬州大学农业科技发展研究院扬州225009 江苏军曼农业科技有限公司盐城224700

为研究饲粮能量和蛋白质水平对21~56日龄青铜火鸡雏鸡生长性能和血清生化指标的影响,试验采用2×3双因子试验设计,分别为2个能量水平(12.13和12.53 MJ·kg^(-1))和3个蛋白质水平(22%、24%和26%);选体重相近的青铜火鸡雏鸡180只,随机分为... 详细信息

为研究饲粮能量和蛋白质水平对21~56日龄青铜火鸡雏鸡生长性能和血清生化指标的影响,试验采用2×3双因子试验设计,分别为2个能量水平(12.13和12.53 MJ·kg^(-1))和3个蛋白质水平(22%、24%和26%);选体重相近的青铜火鸡雏鸡180只,随机分为6组,每组5个重复,每个重复6只;常规饲养至20日龄,21日龄正式开始试验,为期35 d。结果表明:(1)饲粮蛋白质水平显著影响56 d火鸡体重、平均日增重(ADG)和料重比(F/G),蛋白质水平为26%组56 d火鸡体重和ADG显著高于22%组(P<0.05),蛋白质水平为26%组火鸡F/G显著低于22%组(P<0.05);饲粮能量和蛋白质水平对56 d火鸡体重和ADG有显著的交互作用(P<0.05)。(2)饲粮蛋白质水平对血清尿素(UA)和总胆固醇(TC)含量有显著性影响,26%组雏火鸡血清中UA含量显著高于22%和24%组(P<0.05),蛋白质水平为22%组血清TC含量显著高于26%组(P<0.05)。饲粮能量和蛋白质水平对血清中球蛋白(GLB)含量有显著的交互作用(P<0.05)。(3)饲粮能量水平对血清中类胰岛素生长因子1(IGF-1)的含量有显著性影响(P<0.01),能量水平为12.53 MJ·kg^(-1)组血清中IGF-1的含量显著高于12.13 MJ·kg^(-1)组;饲粮蛋白质水平极显著地影响血清中生长激素(GH)含量,蛋白质水平为22%组血清中GH含量显著高于24%和26%组(P<0.01);饲粮能量和蛋白质水平对血清中GH含量有显著的交互作用(P<0.05)。(4)饲粮能量水平为12.13 MJ·kg^(-1),蛋白质水平为26%时,火鸡的经济效益最好。综上所述,本试验条件下,21~56日龄青铜火鸡最适宜的饲粮能量水平为12.13 MJ·kg^(-1),蛋白质水平为26%。

关键词：青铜火鸡能量蛋白质生长性能血清生化指标

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不同料型对21~56日龄火鸡生长性能、血清生化指标和经济效益的影响

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中国家禽 2021年第11期43卷 46-50页

作者：杨永磊胥蕾徐晨廖正军王莹鲁曼杨海明扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏军曼农业科技有限公司江苏盐城224752

为研究不同料型对21~56日龄火鸡生长性能、血清生化指标和经济效益的影响,试验选取128只21日龄贝蒂娜雏火鸡,并将其随机分为两组,每组8个重复,每个重复8只火鸡。对照组饲喂粉料,试验组饲喂颗粒料。试验期为35 d。结果表明:与对照组相比... 详细信息

为研究不同料型对21~56日龄火鸡生长性能、血清生化指标和经济效益的影响,试验选取128只21日龄贝蒂娜雏火鸡,并将其随机分为两组,每组8个重复,每个重复8只火鸡。对照组饲喂粉料,试验组饲喂颗粒料。试验期为35 d。结果表明:与对照组相比,试验组火鸡56日龄体重和平均日增重显著增加,料重比显著降低(P0.05);与对照组相比,试验组21~56日龄火鸡的产肉成本显著降低(P<0.05),试验组56日龄每只火鸡比对照组经济效益提高37.5%。综上所述,饲喂颗粒料能提高21~56日龄火鸡生长性能、血清生化指标及经济效益。

关键词：育雏火鸡颗粒料粉料生长性能血清生化指标经济效益

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