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Efficient Gene Targeting in Maize Using Inducible CRISPR-Cas9 and Marker-free Donor Template

Molecular Plant 2020年第8期13卷 1219-1227页

作者： Pierluigi Barone Emily Wu brian lenderts Ajith Anand William Gordon-Kamm Sergei Svitashev Sandeep Kumar Corteva AgriscienceTM JohnstonIA 50131USA

CRISPR-Cas9 is a powerful tool for generating targeted mutations and genomic ***,precise gene insertion or sequence replacement remains a major hurdle before application of CRISPR-Cas9 technology is fully realized in plant ***,we report high-frequency,selectable marker-free intra-genomic gene targeting(GT)in *** shock-inducible Cas9 was used for generating targeted double-strand breaks and simultaneous mobilization of the donor template from pre-integratad *** construct was designed such that release of the donor template and subsequent DNA repair activated expression of the selectable marker gene within the donor *** approach generated up to 4.7%targeted insertion of the donor sequence into the target locus in TO plants,with up to 86%detected donor template release and 99%mutation rate being observed at the donor loci and the genomic target site,*** previous in planta or intra-genomic homologous recombination reports in which the original chimeric GT plants required extensive progeny screening in the next generation to identify non-chimeric GT individuals,our method provides non-chimeric heritable GT in one generation.

关键词： donor template insertion

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