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Removal of Antibiotic Resistance of Live Vaccine Strain Escherichia coli MM-3 and Evaluation of the Immunogenicity of the New Strain

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2006年第12期38卷 844-856页

作者： Sheng-Ling YUAN Peng WANG Hao-Xia TAO Xiang-Xin LIU Yan-Chun WANG De-Wen ZHAN Chun-Jie LIU Zhao-Shan ZHANG* beijing institute of biotechnology,beijing 100071,china beijinginstituteofbiotechnology Beijing100071China

MM-3 was a live vaccine strain candidate for protecting neonatal piglets from *** in the 1980s,a high degree of protection from colibacillosis was afforded to piglets in a challengestudy and field *** MM-3 had a drawback of carrying the antibiotic resistance gene (chloramphenicolacetyltransferase gene,cat).The introduction of a host-plasmid balanced lethal system into the vaccine wasa good idea to solve the *** λ-Red recombination system was adopted in this study to realize thereplacement of cat by aspartate-semialdehyde dehydrogenase gene (asd) in the plasmid *** newplasmid named pMMASD was introduced into an Escherichia coli strain χ6097 and Salmonella typhimuriumχ4072 where the asd gene had been knocked out in their *** in an Erlenmeyer flask,expression levels of two antigens K88ac fimbriae and heat-labile enterotoxin B subunit (LTB) in cell lysatewere similar among MM-3,χ4072(pMMASD) and χ6097(pMMASD).However,χ4072(pMMASD) possessedthe more effective secretion mechanism to transport LTB enterotoxin into culture *** relatively higherstability of pMMASD in Salmonella typhimurium χ4072 than that of pMM085 in MM-3 was determined bothin vitro in the absence of selective pressure,and in vivo following oral *** immunization ofBALB/c mice with χ4072(pMMASD) or χ6097(pMMASD) was sufficient to elicit IgA responses in mucosaltissues as well as systemic IgG antibody responses to the K88 fimbriae,while MM-3 failed to elicit specificantibody responses to K88 fimbriae in mucosal *** three live strains,only χ4072(pMMASD)could develop strong humoral responses against LTB *** results suggest that χ4072(pMMASD)is expected to be a promising live vaccine strain.

关键词： λ-Red recombination system host-plasmid balanced lethal system K88ac fimbriae LTB enterotoxin ETEC live vaccine strain Salmonella

CTB/CS3融合蛋白与GM1结合能力和免疫原性的分析

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生物化学与生物物理进展 2003年第2期30卷 278-284页

作者：米凯霞李勣张兆山方荣祥中国科学院微生物研究所北京生物工程研究所北京100071

免疫霍乱毒素B亚单位 (CTB)或肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子CS3可使人体对ETEC的侵染有保护作用 .为探索研制ETEC双组分亚单位疫苗的可行性 ,利用大肠杆菌诱导表达系统表达了CTB与CS3的融合蛋白 (CTB/CS3) .蛋白质印迹结果表明 ,诱导... 详细信息

免疫霍乱毒素B亚单位 (CTB)或肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子CS3可使人体对ETEC的侵染有保护作用 .为探索研制ETEC双组分亚单位疫苗的可行性 ,利用大肠杆菌诱导表达系统表达了CTB与CS3的融合蛋白 (CTB/CS3) .蛋白质印迹结果表明 ,诱导表达的 2 9ku蛋白具有CTB和CS3蛋白双重抗原性 .经Ni NTA亲和层析纯化获得重组蛋白CTB/CS3,复性的重组蛋白可以部分形成五聚体并保留了与神经节苷脂GM1的结合能力 .动物实验表明 ,融合蛋白CTB/CS3具有CTB和CS3蛋白的双重免疫原性 ,同时。

关键词： CTB/CS3融合蛋白 GMl 结合能力免疫原性免疫霍乱毒素B亚单位肠毒素大肠杆菌疫苗婴幼儿急性腹泻

Inhibition of HER-2 expression by siRNA

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Inhibition of HER-2 expression by siRNA

Efficient production of omega-3 fatty acid desaturase (sFat-1)-transgenic pigs by somatic cell nuclear transfer

第四届全国RNA进展研讨会

作者： WU Feng, WANG Qing-ming, FAN Guo-cai, CHEN Ji-zhong, CHEN Hui-peng Department of Genomics and Proteomics, beijing institute of Radiation Medicine, beijing 100850, china beijing institute of biotechnology, beijing 100071, china

RNA interference (RNAi) is a kind of gene-inactivating technology that can induce specific mRNA degradation by double-stranded RNA (dsRNA). It is the process of post-transcriptional gene silencing (PTGS) in animals and plants. RNAi has been demonstrated great prospect in gene functional research, gene therapy and new drug exploitation areas. Overexpression of HER-2 occurs in about 30% of breast

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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Science china(Life Sciences) 2010年第4期53卷 517-523页

作者： PAN DengKe1, ZHANG Li1, ZHOU YanRong2, FENG Chong1, LONG Chuan1, LIU Xiao1, WAN Rong3, ZHANG Jian3, LIN AiXing3, DONG EnQiu4, WANG ShuChen4, XU HouGang4 & CHEN HongXing2 1 institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, beijing 100193, china 2 beijing institute of biotechnology, beijing 100071, china 3 china Agricultural University, beijing 100193, china 4 Yutian Breeding Swine Farms, Yutian 064104, china institute of Animal Sciences Chinese Academy of Agricultural Sciences Beijing 100193 Chin

Omega-3(ω-3) fatty acid desaturase transgenic pigs may improve carcass fatty acid composition. The use of transgenic pigs is also an excellent large animal model for studying the role of ω-3 fatty acids in the prevention and treatment of coronary heart disease and cancer. Transgenic pigs carrying synthesized fatty acid desaturase-1 gene (sFat-1) from Caenorhabditis briggsae by somatic cell nuclear transfer (SCNT) were produced for the first time in china. Porcine fetal fibroblast cells were transfected with a sFat-1 expression cassette by the liposome-mediated method. Transgenic embryos were reconstructed by nuclear transfer of positive cells into enucleated in vitro matured oocytes. A total of 1889 reconstructed embryos were transferred into 10 naturally cycling gilts. Nine early pregnancies were established, 7 of which went to term. Twenty-one piglets were born. The cloning efficiency was 1.1% (born piglets/transferred embryos). The integration of the sFat-1 gene was confirmed in 15 live cloned piglets by PCR and Southern blot except for 2 piglets. Expression of the sFat-1 gene in 12 of 13 piglets was detected with RT-PCR. The data demonstrates that an efficient system for sFat-1 transgenic cloned pigs was developed, which led to the successful production of piglets expressing the sFat-1 gene.

关键词： sFat-1 nuclear transfer ovulation status transgenic pig

利用大肠杆菌鞭毛展示的随机肽库筛选TNF-α拮抗肽

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生物工程学报 2002年第5期18卷 556-560页

作者：李朝周艳荣程度胜黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071

TNF α是一种在机体抗感染、抗肿瘤过程中发挥重要作用的细胞因子 ,其对机体具有保护和损伤两方面的作用 ,为了探讨新的抑制TNF α所致炎症损伤等反应的手段 ,构建了细菌鞭毛递呈的随机肽库 ,利用构建得到的肽库 ,进行TNF α特异性结合... 详细信息

TNF α是一种在机体抗感染、抗肿瘤过程中发挥重要作用的细胞因子 ,其对机体具有保护和损伤两方面的作用 ,为了探讨新的抑制TNF α所致炎症损伤等反应的手段 ,构建了细菌鞭毛递呈的随机肽库 ,利用构建得到的肽库 ,进行TNF α特异性结合肽的筛选工作。经过 5轮筛选及DNA测序 ,共得到 6条小肽编码序列。其中 2条序列中含有一V N WG的相同序列框架。进行 6条序列与TNF α结合力的确证后 ,选择了其中的 4条肽序列进行人工化学合成、纯化及鉴定。利用L92 9细胞及MTT法对 4条小肽进行活性测定 ,检测其对TNF α的抑制活性。结果表明 ,在TNF α对L92 9细胞毒性为 30 %左右时 ,含同源序列框架的 2条肽可抑制 90 %左右的TNF

关键词：大肠杆菌鞭毛随机肽库筛选 TNF-α拮抗肽

幽门螺杆菌重组腺病毒双价疫苗的构建及免疫学评价

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生物化学与生物物理进展 2004年第8期31卷 716-721页

作者：刘秀丽刘纯杰陶好霞李淑琴李勣张兆山北京生物工程研究所北京100071

幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表... 详细信息

幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表达目标抗原 .以血清中IgG和新鲜粪便中sIgA ,评价其免疫效果 ,结果显示。

关键词：幽门螺杆菌重组腺病毒尿素酶B 热休克蛋白A 体液免疫黏膜免疫反应

蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体基因的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

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生物工程学报 2004年第3期20卷 394-397页

作者：赵洪亮薛冲熊向华张伟朱厚础刘志敏军事医学科学院生物工程研究所北京100071

AX15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hCNTF突变体。在巴斯德毕赤酵母中表达时AX15易发生降解。氨基酸序列分析表明降解位于由 12和 13位氨基酸残基组成的双碱性氨基酸之后。根据KEX2蛋白酶... 详细信息

AX15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hCNTF突变体。在巴斯德毕赤酵母中表达时AX15易发生降解。氨基酸序列分析表明降解位于由 12和 13位氨基酸残基组成的双碱性氨基酸之后。根据KEX2蛋白酶的底物专一性把双碱性氨基酸从RR变为RK ,构建了KEX2抗性的AX15突变体AX15 (R13K)。AX15 (R13K)的稳定性得到了显著的提高 ,在诱导 10 0h后也未发生降解。利用超滤浓缩和凝胶过滤得到了纯度 >90 %的AX15 (R13K)。TF 1细胞存活实验表明AX15 (R13K)具有与AX15相同的生物学活性。蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体可能具有更好的体内稳定性 ,在临床应用上具有潜在的优势。

关键词：睫状神经营养因子巴斯德毕赤酵母蛋白酶抗性

一种特异识别SV40启动子的人工转录因子的构建

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生物工程学报 2003年第5期19卷 608-612页

作者：赵兴卉朱旭东刘娟饶相君黄培堂北京生物工程研究所北京100071

转录因子是真核表达调控中非常重要的一类反式作用因子 ,通常由DNA结合域与效应域两部分组成 ,而锌指结构是DNA结合域的常见组成单元。人工转录因子就是基于转录因子的这种结构特点 ,人为地选择针对特定序列的DNA结合域与具有特定作用... 详细信息

转录因子是真核表达调控中非常重要的一类反式作用因子 ,通常由DNA结合域与效应域两部分组成 ,而锌指结构是DNA结合域的常见组成单元。人工转录因子就是基于转录因子的这种结构特点 ,人为地选择针对特定序列的DNA结合域与具有特定作用的效应域组合而成。利用噬菌体展示技术 ,筛选到与SV4 0启动子上 9bp序列特异结合的锌指结构 ,再连接KOX1的KRAB域构建了一种人工转录因子。转染实验表明它对SV4 0下游的报告基因的表达有很显著的抑制作用。

关键词： SV40启动子人工转录因子锌指真核表达调控

脊髓灰质炎病毒C3表位和C-myc十肽表位在细菌表面的表达

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生物工程学报 2001年第5期17卷 539-542页

作者：高荣凯张兆山李淑琴黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所

为了进一步验证载体pCSB136和pCSX72作为表面呈现载体的可行性 ,化学合成脊髓灰质炎病毒C3表位和C myc十肽表位的基因片段 ,并插入到上述载体的相应位点间 ,采用全菌PCR筛选到正向插入的重组子 ,全细胞ELISA和电镜观察显示 ,重组蛋白以... 详细信息

为了进一步验证载体pCSB136和pCSX72作为表面呈现载体的可行性 ,化学合成脊髓灰质炎病毒C3表位和C myc十肽表位的基因片段 ,并插入到上述载体的相应位点间 ,采用全菌PCR筛选到正向插入的重组子 ,全细胞ELISA和电镜观察显示 ,重组蛋白以杂和菌毛的形式得到了表达 ,并保持CS3和外源表位的抗原性 ,表明脊髓灰质炎病毒C3表位和C myc十肽表位在细菌表面得到了表达 ,证实载体pCSB136和pCSX72可用于外源表位的呈现。

关键词：肽表位表面呈现 CS3菌毛脊髓灰质炎病毒细菌表达表现呈现