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Notch1对人脐带间充质干细胞增殖、黏附及迁移影响的体外研究

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解放军医药杂志 2013年第10期25卷 16-21页

作者：王晓辉罗芸贾庆华杨霄鹏王鲲哈小琴兰州军区兰州总医院医学实验中心甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050 兰州军区兰州总医院干部病房三科兰州730050

目的探讨Notch1基因的重组腺病毒转染对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染hUCMSCs分为实验组(AdNotch1)、阴性对照组(Ad-GFP)与空白对照组... 详细信息

目的探讨Notch1基因的重组腺病毒转染对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染hUCMSCs分为实验组(AdNotch1)、阴性对照组(Ad-GFP)与空白对照组。以最佳moi转染hUCMSCs,观察细胞形态变化以及GFP蛋白的表达。比较3组细胞增殖能力、细胞周期、黏附能力及迁移能力。Western Bolt检测3组细胞Notch1蛋白的表达水平。结果荧光下观察腺病毒成功感染细胞,阴性对照组和实验组均出现了GFP的表达,且随培养时间的延长表达量增高,可见光下观察实验组细胞增殖速度较快。实验组细胞的增殖能力(48、72、96 h)、黏附能力(12、16、20 h)及迁移能力均较阴性对照组及空白对照组增强(P<0.05)。Western Bolt检测实验组细胞Notch1蛋白的表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 Notch1能明显促进hUCMSCs的增殖、黏附和迁移。

关键词：间质干细胞脐带 Notch1 细胞增殖细胞黏附细胞运动

一株分离自医院污水的宽裂解谱铜绿假单胞菌噬菌体的生物学特性及基因分析

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中国病原生物学杂志 2021年第12期16卷 1404-1408页

作者：张旭华李琴任海燕周静茹杨芳倪萍哈晓丹董娟娟田婷婷陈邬锦新疆医科大学基础医学院形态中心新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学中心实验室新疆医科大学第六附属医院楚雄医药高等专科学校检验系

目的分析1株从医院污水中分离的宽裂解谱铜绿假单胞菌噬菌体的基因组信息,了解其生物学特性,为铜绿假单胞菌院内感染的治疗提供新的思路。方法收集医院污水标本,采用双层平板法进行噬菌体分离纯化,用电镜观察其形态,测定噬菌体裂解谱、... 详细信息

目的分析1株从医院污水中分离的宽裂解谱铜绿假单胞菌噬菌体的基因组信息,了解其生物学特性,为铜绿假单胞菌院内感染的治疗提供新的思路。方法收集医院污水标本,采用双层平板法进行噬菌体分离纯化,用电镜观察其形态,测定噬菌体裂解谱、最佳感染复数(moi)和一步生长曲线;对噬菌体进行全基因组测序分析。结果从污水标本中分离纯化获得1株铜绿假单胞菌噬菌体YFY1,moi指数为0.1,一步生长曲线显示潜伏期约为50 min,爆发期约为40 min;电镜观察其头部长约63 nm,尾长约10 nm,为尾部呈短棒状的肌尾噬菌体。YFY1基因长度为61404 bp,GC含量为60.18%,其基因组注释共得到84个开放阅读框架(ORF),在注释的107个相似蛋白中有81个蛋白相似度>50%,其中64个为假设蛋白,17个为体现噬菌体功能和结构的重要蛋白。结论YFY1是一株烈性肌尾噬菌体,该噬菌体具有多种与功能相关的蛋白,可为铜绿假单胞菌感染的生物治疗提供理论依据。

关键词：铜绿假单胞菌噬菌体生物学特性宽裂解谱基因分析

腺病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞及其对细胞增殖的影响

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解放军医药杂志 2015年第10期27卷 8-10页

作者：杨淑娟樊红艳张萍朱晓红薛荣利哈小琴兰州军区兰州总医院检验中心甘肃省干细胞与基因药物重点实验室兰州730050

目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),优化腺病毒感染条件。方法全骨髓贴壁法分离培养骨髓MSCs,经形态学及表面分子标志鉴定后以携带绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒感染细胞,流式细胞术测定细胞荧光阳性率判断感染率,甲基噻唑基四唑(MTT... 详细信息

目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),优化腺病毒感染条件。方法全骨髓贴壁法分离培养骨髓MSCs,经形态学及表面分子标志鉴定后以携带绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒感染细胞,流式细胞术测定细胞荧光阳性率判断感染率,甲基噻唑基四唑(MTT)法确定不同病毒感染复数(moi)对细胞增殖的影响。结果分离培养的细胞高表达MSCs表面标志CD90和CD105,低表达造血细胞表面标志CD34和CD45,成功分离MSCs;腺病毒感染率随moi升高而增加,当moi≤100时细胞增殖率无明显变化,moi=200时细胞增殖率降低。结论 moi=100为大鼠骨髓MSCs最佳腺病毒moi。

关键词：骨髓细胞间质干细胞腺病毒科感染大鼠

鞘氨醇激酶1调控沉默信息调节因子1表达的研究

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解放军医药杂志 2017年第1期29卷 1-5,14页

作者：高瞻曾通旭王娟徐倩曹荟哲白燕青杨志华哈小琴兰州军区兰州总医院检验科兰州730050 淄博市中心医院检验科山东淄博255000 甘肃农业大学兰州730070

目的探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)与沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达的关系。方法用病毒感染复数(moi)=20 p LKO.1-sh SPK1-GFP干涉慢病毒(sh SPK1组)及p PIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),48 h后提取细胞RNA及蛋白,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)测定SIRT1基因及蛋白表达水平。用moi=20 p HIV7-U6-sh SIRT1-RFP干涉慢病毒(sh SIRT1组)及p HIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒(RFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞RNA并用RT-PCR检测细胞SPK1基因表达水平。用100 nmol 1-磷酸鞘氨醇(S1P)处理HUVECs,分别在0.5、2、24及36 h提取细胞RNA,24、48及72 h提取细胞蛋白,检测SIRT1基因及蛋白表达水平。用100 nmol S1P处理干涉过SIRT1的HUVECs检测细胞的增殖、迁移及体外管状结构形成能力。结果 sh SPK1组SIRT1基因和蛋白表达水平低于GFP-SC组(P0.05)。100 nmol S1P处理HUVECs不同时间SIRT1基因及蛋白表达水平高于未处理组,HUVECs增殖能力高于sh SIRT1组(P<0.05,P<0.01)。sh SIRT1组HUVECs迁移率低于RFP-SC组,S1P处理组高于RFP-SC、sh SIRT1组(P<0.05)。sh SIRT1组HUVECs体外管状结构形成能力低于RFP-SC组,S1P处理组高于sh SIRT1组(P<0.05)。结论 SPK1可以正向调控SIRT1表达并对HUVECs功能产生影响。

关键词：人脐静脉内皮细胞鞘氨醇激酶1 组蛋白去乙酰化酶1 细胞增殖细胞运动

SPK1调控人脐静脉内皮细胞SIRT1表达及细胞迁移的机制研究

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解放军医药杂志 2017年第1期29卷 6-9,19页

作者：高瞻曹荟哲白燕青王娟徐倩曾通旭杨志华哈小琴兰州军区兰州总医院检验科兰州730050 淄博市中心医院检验科山东淄博255000 兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050

目的探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)调控沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)迁移能力的机制。方法用病毒感染复数(moi)=20的p LKO.1-sh SPK1-GFP干涉慢病毒(sh SPK1组)和p PIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞蛋白并用蛋白免疫印迹法检测ERK、P38 MAPK及AKT磷酸化水平。分别用PD98059、SB203580及Wortmannin处理HUVECs 1 h,检测ERK、P38 MAPK及AKT信号表达及SIRT1蛋白表达情况。取抑制剂干预后的细胞进行Transwell小室迁移实验,检测细胞迁移能力。结果sh SPK1组ERK、P38 MAPK及AKT的磷酸化水平均低于GFP-SC组(P<0.05,P<0.01)。PD98059、SB203580及Wortmannin组ERK、P38 MAPK、AKT磷酸化水平及SIRT1蛋白表达水平低于对照组,HUVECs的迁移能力较对照组弱(P<0.01)。结论 SPK1可以通过ERK、P38 MAPK及AKT通路调控HUVECs SIRT1的表达及迁移能力。

关键词：鞘氨醇激酶1 组蛋白去乙酰化酶1 人脐静脉内皮细胞细胞迁移分析信号调控