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大口黑鲈虹彩病毒主衣壳蛋白单克隆抗体制备与抗原表位鉴定

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河南农业科学 2024年第10期53卷 149-158页

作者：宋占林明胜利曾磊潘佳佳赵黎明刘桃雪王江刘忠虎河南农业大学动物医学院河南郑州450046 河南农业大学农业农村部动物生化与营养重点实验室河南郑州450046 河南农业大学河南省兽医生物技术重点实验室河南郑州450046 河南省水产技术推广站河南郑州450008

以大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth bass iridovirus,LMBV)主衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)为检测靶蛋白,利用原核表达系统表达MCP重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP/20)融合,经亚克隆筛选、小鼠... 详细信息

以大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth bass iridovirus,LMBV)主衣壳蛋白(Major capsid protein,MCP)为检测靶蛋白,利用原核表达系统表达MCP重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP/20)融合,经亚克隆筛选、小鼠腹腔接种、收集腹水等过程获得单克隆抗体;利用免疫印迹技术对所制备的单克隆抗体免疫识别的特异性以及其识别的抗原表位进行研究分析,为研制适于养殖现场快速检测LMBV的胶体金检测试纸条奠定基础。结果表明,获得了1株单克隆抗体2C9-6。特异性分析结果显示,单克隆抗体2C9-6可以特异性识别真核表达的LMBV-MCP和LMBV病毒颗粒。抗原表位分析结果表明,单克隆抗体2C9-6识别LMBV-MCP的抗原表位位于LMBV-MCP蛋白N端第1—20位氨基酸。

关键词：大口黑鲈虹彩病毒主衣壳蛋白单克隆抗体抗原表位

动物科学国家级实验教学示范中心的建设与实践

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实验技术与管理 2012年第7期29卷 103-105,113页

作者：陈玉霞林峰李明李奎王志祥刘忠虎陈文河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

河南农业大学动物科学实验中心以建设国家级实验教学示范中心为契机,以培养高素质创新创业人才为目标,构建立体型实践教学平台,改革人才培养模式,创新实验教学方法,强化综合性、设计性、创新性实验项目的开发与应用,完善了管理机制和健... 详细信息

河南农业大学动物科学实验中心以建设国家级实验教学示范中心为契机,以培养高素质创新创业人才为目标,构建立体型实践教学平台,改革人才培养模式,创新实验教学方法,强化综合性、设计性、创新性实验项目的开发与应用,完善了管理机制和健全质量保障体系,从而提高学生的综合实践和创新能力,并在多种形式的全国课外科技竞赛中取得优异成绩,毕业生就业实现了"零"适应期,实验中心建设取得了明显的成效,发挥了示范与辐射作用。

关键词：实验教学示范中心中心建设动物科学

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黄河鲤肾脏的显微和亚显微结构观察

水产科学 2021年第2期40卷 255-260页

作者：樊明明宋予震吴玉臣吕玉金张丽聂丹刘忠虎河南牧业经济学院河南郑州450046 河南农业大学河南郑州450046

应用常规解剖学和组织学方法在光镜和电镜下观察成体黄河鲤肾脏的显微和亚显微结构。试验结果显示,黄河鲤的肾脏包括头肾和中肾两部分。头肾实质中没有肾单位,主要由造血组织和淋巴组织构成,可观察到黑色素巨噬细胞中心和甲状腺滤泡;中... 详细信息

应用常规解剖学和组织学方法在光镜和电镜下观察成体黄河鲤肾脏的显微和亚显微结构。试验结果显示,黄河鲤的肾脏包括头肾和中肾两部分。头肾实质中没有肾单位,主要由造血组织和淋巴组织构成,可观察到黑色素巨噬细胞中心和甲状腺滤泡;中肾实质中包含有肾小体、肾小管和拟淋巴组织,肾小体由鲍曼氏囊和与其相接触的血管球组成。肾小管由颈段、第一近曲小管、第二近曲小管、间段、远曲小管和集合管组成;拟淋巴组织包括血管、淋巴细胞、血细胞、粒细胞、黑色素巨噬细胞和甲状腺滤泡。结构观察显示,黄河鲤头肾已退化为具有造血功能的免疫器官,中肾为主要的泌尿器官,黄河鲤在硬骨鱼的进化中处于中等地位。

关键词：黄河鲤肾脏解剖学组织学

猪链球菌SC124菌株中ICE_Prophage携带耐药基因的水平转移

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3699-3705页

作者：段慧慧任仕航张宏印于瑞刘忠虎杜向党商艳红河南农业大学动物医学院河南郑州450046 河南牧业经济学院动物医药学院河南郑州450046

旨在探究猪链球菌中ICE_Prophage携带耐药基因转移的情况,使用Illumina MiSeq和Pacbio RSII平台对猪链球菌SC124菌株进行了全基因组测序,利用在线网站RAST、ICEberg 3.0、PHASTER和NCBI数据库对SC124菌株的基因组序列进行分析;用肉汤稀... 详细信息

旨在探究猪链球菌中ICE_Prophage携带耐药基因转移的情况,使用Illumina MiSeq和Pacbio RSII平台对猪链球菌SC124菌株进行了全基因组测序,利用在线网站RAST、ICEberg 3.0、PHASTER和NCBI数据库对SC124菌株的基因组序列进行分析;用肉汤稀释法测定最小抑菌浓度;通过接合试验验证ICE_Prophage携带耐药基因的可转移性;采用反向PCR检测环状中间体的存在;用竞争试验评估接合子是否具有适应性代价。结果显示:猪链球菌SC124菌株中存在携带四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类耐药基因的ICE_Prophage(ICE Ssu SC124_ΦSsuSC124);携带四环素类耐药基因的ICE Ssu SC124以5.52×10-9频率发生转移,未发现前噬菌体发生转移;ICE Ssu SC124可以形成一个大小约为3.8 kb的环状中间体;与猪链球菌BAA相比,含有ICE Ssu SC124的接合子在无药物压力选择的作用下不具有竞争优势,接合子会产生一定程度的适应性代价。综上,猪链球菌SC124菌株中存在携带四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类耐药基因的ICE_Prophage,ICE Ssu SC124可发生水平转移,其接合子可产生一定程度的适应性代价。

关键词：猪链球菌 ICE_Prophage 接合试验适应性代价

施氏魮(Barbonymus schwanenfeldii)外周血液及造血器官血细胞发生的观察

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河南科学 2020年第3期38卷 376-385页

作者：李坚段利芳徐刚杜永坤刘忠虎河南农业大学牧医工程学院郑州450046

为了解施氏魮血细胞组成类型及血细胞发生过程,利用Wright’s-Giemsa和HE染色技术,分别对其外周血涂片,血细胞发生相关器官头肾、体肾、脾脏和肝脏的组织印片及石蜡切片进行观察,并统计了各种血细胞大小,以及上述器官中血细胞各种发育... 详细信息

为了解施氏魮血细胞组成类型及血细胞发生过程,利用Wright’s-Giemsa和HE染色技术,分别对其外周血涂片,血细胞发生相关器官头肾、体肾、脾脏和肝脏的组织印片及石蜡切片进行观察,并统计了各种血细胞大小,以及上述器官中血细胞各种发育类型的组成比例.观察发现,施氏魮的血细胞包括红细胞和白细胞,白细胞主要有血栓细胞、粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等.血细胞发育历程可分为原始阶段、幼稚阶段和成熟阶段,幼稚阶段的红细胞和粒细胞又可划分为早、中、晚不同时期.施氏魮血细胞随着发育的不断成熟,核内染色质不断凝聚,胞体体积整体呈现由大变小趋势.在各脏器印片中,头肾和体肾可观察到各种类型原始及幼稚阶段血细胞,其中原红细胞在头肾中数量最多;脾脏中观察到大量幼稚阶段淋巴细胞和粒细胞,肝脏中主要为成熟红细胞,因此可见头肾和体肾为施氏魮主要的造血器官,脾为淋巴细胞和粒细胞增殖重要场所.此研究描述了施氏魮血细胞分化特征,对系统了解其免疫应答机制及进一步开展鱼类疾病防控具有重要意义.

关键词：施氏魮头肾体肾血细胞形态血细胞发生

盐水处理下大口黑鲈鱼片在冷藏期间的微生物变化

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现代食品科技 2023年第6期39卷 101-107页

作者：凌玉钊黄丽琪徐甜甜乔宇汪兰吴文锦柳忠虎熊光权魏凌云武汉工程大学环境生态与生物工程学院湖北武汉430205 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所农业农村部农产品冷链物流技术重点实验室湖北武汉430064 潜江市柳伍水产食品有限公司湖北潜江433111

该实验通过平板计数法结合16SrRNA基因测序,研究了质量分数3%的盐水处理结合真空包装的大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼片在冷藏过程中的微生物变化。结果表明,相较于超纯水浸泡(CK),3%盐水浸泡(SW)有效延缓了鱼片在贮藏期间的菌落总... 详细信息

该实验通过平板计数法结合16SrRNA基因测序,研究了质量分数3%的盐水处理结合真空包装的大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼片在冷藏过程中的微生物变化。结果表明,相较于超纯水浸泡(CK),3%盐水浸泡(SW)有效延缓了鱼片在贮藏期间的菌落总数(Total Viable Count,TVC)、肠杆菌科、乳酸菌(Lactic Acid Bacteria,LAB)、假单胞菌(Pseudomonas)和硫化氢产生菌(Hydrogen Sulfide-Producing Bacteria,HSPB)的增加。大口黑鲈鱼片在冷藏期间的优势门为变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroides)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)。贮藏初期的优势属主要为不动杆菌属(Acinetobacter)、鞘脂单胞菌属(Phingomonas)、伊丽莎白菌属(Elizabethkingia)和金黄杆菌属(Chryseobacterium),而贮藏末期为不动杆菌属。盐水处理降低了贮藏初期中不动杆菌属、伊丽莎白菌属、栖水菌属(Enhydrobacter)、巨型球菌属(Macrococcus)和沃氏黄杆菌属(Wautersiella)等优势菌群的相对丰度。采用盐水处理可以有效延缓大口黑鲈鱼片在贮藏初期的微生物生长,为大口黑鲈的保鲜应用提供参考。

关键词：盐水大口黑鲈 16SrRNA基因测序不动杆菌属

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中华大蟾蜍视网膜Müller细胞形态观察

河南农业大学学报 2015年第6期49卷 822-826页

作者：杨鹏飞赵留涛赵新芳闫峰宾杜宝宝刘忠虎河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

为了解两栖动物中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)视网膜中神经胶质细胞形态结构及分布,利用生物显微技术、投射电镜技术和免疫组化技术显示了中华大蟾蜍视网膜胶质细胞形态结构。观察结果显示,中华大蟾蜍视网膜中仅分布有Müller细胞。光镜... 详细信息

为了解两栖动物中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)视网膜中神经胶质细胞形态结构及分布,利用生物显微技术、投射电镜技术和免疫组化技术显示了中华大蟾蜍视网膜胶质细胞形态结构。观察结果显示,中华大蟾蜍视网膜中仅分布有Müller细胞。光镜下Müller细胞在视网膜中成单层分布,细胞长轴沿着眼球半径成放射状排列,胞体位于内核层,胞体发出至少2个主干突起。电镜下视网膜Müller细胞的胞质及胞核着色较周围细胞深,细胞内有明显的纤维成分,与其他神经成分易于区别。Müller细胞近巩膜侧的主干突起延伸到视杆与视锥细胞的内节与胞核交界处,并彼此相互连接形成外界膜,近玻璃体侧的突起末端形成圆锥形的终足,锥形的底部紧邻玻璃体,且在此处彼此相互连接形成内界膜。

关键词：中华大蟾蜍视网膜 Müller细胞

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贝氏隐孢子虫内生发育虫体的扫描电镜观察

畜牧兽医学报 2000年第4期31卷 341-348页

作者：张龙现宁长申高葆真郎利敏吴宁鹏刘忠虎宋建国赵金凤唐锐茂河南农业大学郑州450002

贝氏隐孢子虫内生发育各阶段虫体寄生于气管和法氏囊的微绒毛丛中 ,鸭对贝氏隐孢子虫的易感性低于鸡和丝毛乌骨鸡。滋养体呈球形 ,平均直径 1 3μm ;typeⅠ裂殖体 ,平均直径 2 4μm～ 3 0 μm ,内含 8个裂殖子 ,呈逆时针旋涡状或呈... 详细信息

贝氏隐孢子虫内生发育各阶段虫体寄生于气管和法氏囊的微绒毛丛中 ,鸭对贝氏隐孢子虫的易感性低于鸡和丝毛乌骨鸡。滋养体呈球形 ,平均直径 1 3μm ;typeⅠ裂殖体 ,平均直径 2 4μm～ 3 0 μm ,内含 8个裂殖子 ,呈逆时针旋涡状或呈桔瓣状排列 ;typeⅡ裂殖体内含 4个裂殖子 ,两种类型裂殖体的裂殖子之间填充着颗粒状残体并包围着一个大的球形残体。成熟裂殖子逸出的方式分为 4种类型。裂殖子大小为 3 0× 0 6 μm ,呈香蕉形。大配子体呈球形直径 3 3μm～ 4 2 μm ,小配子体直径为 3μm～ 3 6 μm。小配子呈子弹状 ,大小为 1 2 μm× 0 3μm ,并观察到成熟小配子的释放方式。带虫空泡可分为无球形残体和有球形残体两类 ,根据观察结果推测带虫空泡基部的梳状结构不具备营养器官的功能。

关键词：贝氏隐孢子虫内生发育扫描电镜超微结构

外源皮质酮对雏鸡法氏囊microRNA表达的影响

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畜牧与兽医 2018年第5期50卷 71-76页

作者：王免免周艳婷张蒙孙桂荣李国喜刘忠虎李奎闫峰宾河南农业大学牧医工程学院

MicroRNA（miRNA）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码小RNA,在鸡的许多生物学功能中发挥重要作用,但在鸡的应激性免疫抑制的分子调控机制中尚不完全清楚。本试验通过在日粮中添加外源皮质酮激素,构建雏鸡应激性免... 详细信息

MicroRNA（miRNA）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码小RNA,在鸡的许多生物学功能中发挥重要作用,但在鸡的应激性免疫抑制的分子调控机制中尚不完全清楚。本试验通过在日粮中添加外源皮质酮激素,构建雏鸡应激性免疫抑制模型,高通量Solexa测序技术建立雏鸡法氏囊差异miRNA表达谱,共鉴定出77个差异表达的miRNAs,34个上调,43个下调,生物学分析预测差异表达miRNA的靶基因有282个,对这些预测的靶基因进行GO和KEGG通路富集分析,结果显示这些通路主要富集到心肌收缩、精氨酸和脯氨酸代谢、RNA聚合酶、肾素-血管紧张素系统。试验结果为揭示家禽应激性免疫抑制转录后分子调控机制提供了依据。

关键词：鸡 miRNA 法氏囊免疫抑制皮质酮