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谷氨酸棒杆菌漆酶基因NCgl0908的克隆、表达及功能

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生物学杂志 2021年第4期38卷 12-16页

作者：司雅楠刘秀霞杨艳坤詹锦玲白仲虎江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院无锡214122

漆酶(Laccase)是多铜氧化酶家族中的主要成员,能够催化多种酚类和芳香类化合物的氧化,因此具有很大的工业应用潜力。虽然对漆酶的研究及应用已获得一定进展,但主要集中在植物和真菌漆酶,对细菌漆酶的研究较少。研究从谷氨酸棒杆菌(Coryn... 详细信息

漆酶(Laccase)是多铜氧化酶家族中的主要成员,能够催化多种酚类和芳香类化合物的氧化,因此具有很大的工业应用潜力。虽然对漆酶的研究及应用已获得一定进展,但主要集中在植物和真菌漆酶,对细菌漆酶的研究较少。研究从谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中分离到一个漆酶基因NCgl0908,其全长1542 bp,编码513个氨基酸。将其氨基酸序列与几种已鉴定的细菌和真菌漆酶进行序列比对,发现它们的4个铜离子结合位点的氨基酸高度保守,推测NCgl0908是一个新的漆酶基因。把NCgl0908基因克隆入表达载体pColdⅡ,并在大肠杆菌BL21中诱导表达。利用镍柱亲和层析法纯化表达产物,并以2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)作为底物检测其漆酶活性以及酶动力学参数,发现其漆酶活性为25.4 U/mL,K m为2.22×10^(-4) mol/L,V max为2.432×10^(-6) mol/(L·min)。

关键词：谷氨酸棒杆菌细菌漆酶胞外表达酶动力学参数大肠杆菌

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TLC-SERS技术体系构建及应用研究

药学研究 2021年第6期40卷 417-420页

作者：胡楠刘毅谢强胜张中湖山东省食品药品检验研究院山东济南250101

目的构建薄层色谱与表面增强拉曼光谱联用(TLC-SERS)技术支持及应用体系,实现技术优化升级和转化推广,应用于非法添加实践工作。方法将薄曼联用仪升级为薄曼一体机,升级μtrait系统非法添加模块,建设拉曼光谱云计算数据中心。结果建成... 详细信息

目的构建薄层色谱与表面增强拉曼光谱联用(TLC-SERS)技术支持及应用体系,实现技术优化升级和转化推广,应用于非法添加实践工作。方法将薄曼联用仪升级为薄曼一体机,升级μtrait系统非法添加模块,建设拉曼光谱云计算数据中心。结果建成拉曼光谱云计算数据中心,完成μtrait系统非法添加模块优化,完成薄曼一体机实验设计。结论薄层色谱与表面增强拉曼光谱联用技术应用体系建设阶段性完成,基本具备现场应用条件。

关键词：薄曼联用仪薄曼联用仪-非法添加快检系统非法添加快检

新型固定床生物反应器在细胞源猪伪狂犬病毒生产中的应用

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生物学杂志 2021年第1期38卷 106-110页

作者：聂简琪孙杨杨艳坤刘秀霞李业白仲虎江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院无锡214122

针对目前固定床生物反应器结构复杂、易产生泡沫等缺点,研发结构简单且可无泡通气的新型固定床生物反应器,并对该反应器的混合时间、k L a、细胞分布均匀性和细胞捕获能力进行测定。并进一步利用该反应器实施低密度接种Vero细胞进行细... 详细信息

针对目前固定床生物反应器结构复杂、易产生泡沫等缺点,研发结构简单且可无泡通气的新型固定床生物反应器,并对该反应器的混合时间、k L a、细胞分布均匀性和细胞捕获能力进行测定。并进一步利用该反应器实施低密度接种Vero细胞进行细胞培养并扩增猪伪狂犬病毒。试验结果表明,该新型固定床反应器的混合时间、k L a与传统STR反应器相当,细胞捕获能力良好且细胞在反应器中分布均匀。采用低密度接种时Vero细胞可在该反应器中进行良好的生长,接毒5 d后累计收获的病毒总颗粒数达到10.37 log 10 TCID 50,相当于2.3×10^5剂量疫苗。该研究为细胞源疫苗的生产提供了新的反应器与技术。

关键词：固定床生物反应器 Vero细胞猪伪狂犬病毒低密度接种疫苗

硫代艾地那非薄层色谱-表面增强拉曼光谱定性研究

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药学研究 2021年第11期40卷 721-725页

作者：刘桂花刘福堂孙晶张中湖山东阿卡迪亚药业有限公司山东济南250101 山东京卫制药有限公司山东泰安271000 山东省食品药品检验研究院山东省食品药品安全检测工程技术研究中心山东济南250101

目的以硫代艾地那非为目标检测物,测试薄层色谱-表面增强拉曼光谱(TLC-SERS)技术体系的定性检测能力,验证方法的可行性。方法薄层板放入薄曼联用仪自动点样,薄层板在展开缸展开,放回薄曼联用仪自动点胶,采集表面增强的拉曼光谱,上传TRA... 详细信息

目的以硫代艾地那非为目标检测物,测试薄层色谱-表面增强拉曼光谱(TLC-SERS)技术体系的定性检测能力,验证方法的可行性。方法薄层板放入薄曼联用仪自动点样,薄层板在展开缸展开,放回薄曼联用仪自动点胶,采集表面增强的拉曼光谱,上传TRAFIC系统,与标准硫代艾地那非表面增强拉曼光谱进行全谱相似度分析和特征峰匹配分析。结果样品拉曼光谱图与标准硫代艾地那非表面增强拉曼光谱相似度97%,特征峰匹配0.833,确定了薄层色谱-表面增强拉曼光谱定性技术体系最优采集参数,确定了检测限、重现性和胶体影响。结论薄层色谱-表面增强拉曼光谱技术体系能够快速定性复杂基质中的硫代艾地那非,薄层和拉曼光谱联用技术结合现代化信息技术,有望实现非法添加物的定性分析。

关键词： TRAFIC系统硫代艾地那非特征峰匹配相似度非法添加

甘肃小麦品种(系)面制品色泽相关基因的分布规律

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麦类作物学报 2015年第8期35卷 1091-1097页

作者：杨芳萍刘亚男郭莹冯楠何中虎李志虎夏先春甘肃省农业科学院小麦研究所甘肃兰州730070 中国农业科学院作物科学研究所北京100081 陇南高等师范专科学校甘肃成县742500

黄色素含量、多酚氧化酶、脂肪氧化酶和1B/1R易位系对小麦面粉和面团的外观品质影响很大。为明确甘肃省小麦品种（系）面粉色泽相关基因的分布状况,用Psy-A1、Ppo-A1、Ppo-D1、Ta Lox-B1和1B/1R易位系等特异性分子标记鉴定对应的基因。... 详细信息

黄色素含量、多酚氧化酶、脂肪氧化酶和1B/1R易位系对小麦面粉和面团的外观品质影响很大。为明确甘肃省小麦品种（系）面粉色泽相关基因的分布状况,用Psy-A1、Ppo-A1、Ppo-D1、Ta Lox-B1和1B/1R易位系等特异性分子标记鉴定对应的基因。结果表明,甘肃省冬、春小麦品种（系）面制品色泽相关基因等位变异分布频率存在一定差异;Psy-A1 a（68.1%）在被检测小麦品种（系）中为优势的黄色素含量基因等位变异,且在春小麦中的分布频率低于冬小麦;2AL染色体上高PPO活性等位变异Ppo-A1 a,除天水麦区分布频率（58%）较低外,其余麦区的分布频率均较高（72.4%-82.3%）;2DL染色体高PPO活性等位变异Ppo-D1 b在春小麦中分布频率较冬小麦低;2AL、2DL染色体PPO活性等位基因组合Ppo-A1 a/Ppo-D1 b（高活性）、PpoA1 a/Ppo-D1 a（中高活性）明显比Ppo-A1 b/Ppo-D1 b（中高活性）和Ppo-A1 b/Ppo-D1 a（低活性）分布频率高;甘肃省小麦品种（系）PPO活性从西部到东南逐渐增强。高活性LOX基因Ta Lox-B1 a分布频率在各麦区均较低;从甘肃省西部到东南部1B/1R易位系分布频率逐渐升高。色泽相关基因分布频率说明,甘肃省小麦品种（系）的优异色泽等位变异分布频率低,色泽品质状况较差,春小麦优于冬小麦。大部分材料仅适宜于加工普通馒头和面条。

关键词：甘肃小麦品种(系) 色泽相关基因分子检测品种改良

酿酒酵母过表达Ehrlich途径基因高效合成色醇

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食品与发酵工业 2022年第24期48卷 16-23页

作者：孙井震何玙冰杨卫华杨艳坤刘秀霞刘春立詹锦铃李业白仲虎江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江南大学粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心江苏无锡214122 长兴制药股份有限公司浙江长兴313100

色醇(indole-3-ethanol,IET)正在日益成为重要的医药和化工合成的中间体,但是其合成目前还是以化学合成为主。该文通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Ehrlich途径相关基因的研究,利用不同基因的组合,通过生物生产IET来解决化学... 详细信息

色醇(indole-3-ethanol,IET)正在日益成为重要的医药和化工合成的中间体,但是其合成目前还是以化学合成为主。该文通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Ehrlich途径相关基因的研究,利用不同基因的组合,通过生物生产IET来解决化学合成不环保、成本高的问题。该研究对涉及色氨酸代谢到IET的代谢途径中相关的13个基因根据中间产物吲哚丙酮酸和吲哚乙醛的代谢过程进行了分步骤的过表达,运用高效液相色谱对发酵液进行产物的检测,同时检测竞争途径副产物对羟基苯乙醇和苯乙醇的变化,探索出了最适合的利于IET生物生产的基因组合,并探究出了该过程的主要限速步骤,使IET在添加5 mmol/L色氨酸情况下得到了1.09 mmol/L的产量。

关键词：色醇色氨酸生物生产酿酒酵母 Ehrlich途径

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毛皮加工清洁生产的白皮鞣制技术

环境工程 2009年第2期27卷 28-30页

作者：钟艳霞张洪林刘志宏王中虎姜国柱杨勇辽宁石油化工大学环境与生物工程学院辽宁抚顺113001 河北兴业皮草有限公司河北衡水053000

研究了改性有机磷化合物在毛皮鞣制过程中的应用技术(白皮鞣制技术),替代了传统的甲醛或铬类鞣剂进行的毛皮加工生产,减少了毛皮产品及生产废液中有害物质的含量,达到了欧盟规定的技术要求,实现了环保型加工。

关键词：毛皮加工清洁生产鞣制工艺技术

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毕赤酵母GT1的原核表达与体外功能鉴定

生物学杂志 2021年第3期38卷 47-51页

作者：潘颖越董贵彬王荣斌刘国强刘春立刘秀霞白仲虎杨艳坤江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室无锡214122

为了开展体外互作实验,以pXMJ19质粒为载体构建pXMJ19-gt1-His重组质粒,通过单因素优化实验获得毕赤酵母甘油转运体GT 1的最优表达宿主为C41(DE3);最优表达条件为OD 600达到0.7时加入终浓度为0.1 mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷... 详细信息

为了开展体外互作实验,以pXMJ19质粒为载体构建pXMJ19-gt1-His重组质粒,通过单因素优化实验获得毕赤酵母甘油转运体GT 1的最优表达宿主为C41(DE3);最优表达条件为OD 600达到0.7时加入终浓度为0.1 mmol/L的异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),于30℃、110 r/min诱导10 h。通过超速离心验证了部分GT1蛋白在大肠杆菌中位于细胞质膜上,并筛选得到针对GT1重溶解率最高的去垢剂NP-40。在去垢剂环境下通过镍离子亲和层析纯化得到GT1蛋白,然后利用等温滴定量热法体外检测其与甘油的结合能力,结果表明:GT1与甘油在体外相互作用产生放热反应,且测得其与甘油的平衡解离常数K D值为6.58μmol/L。实验说明原核表达的GT1蛋白具有活性,且与甘油的体外相互作用明显,为GT1以甘油为配体进行结晶以及解析其三维结构提供了研究基础。

关键词：巴斯德毕赤酵母甘油转运体膜蛋白表达 MFS蛋白超家族蛋白-分子相互作用

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药品追溯体系融合快检技术的探索

中国药事 2020年第8期34卷 865-871页

作者：刘桂花苏美崔效庭张中湖山东阿卡迪亚药业有限公司济南250101 山东省食品药品检验研究院济南250100 辰欣药业股份有限公司济宁272000

目的:为药品追溯体系融入检验技术,强化药品追溯体系"防止假药、劣药进入合法销售渠道"功能。方法:应用定制拉曼光谱仪采集原料、辅料、药品制剂光谱信息,实现光谱信息在拉曼光谱-化药快检支撑系统(RACOFIC)和药品追溯系统中的数据共享... 详细信息

目的:为药品追溯体系融入检验技术,强化药品追溯体系"防止假药、劣药进入合法销售渠道"功能。方法:应用定制拉曼光谱仪采集原料、辅料、药品制剂光谱信息,实现光谱信息在拉曼光谱-化药快检支撑系统(RACOFIC)和药品追溯系统中的数据共享。结果:RACOFIC系统与药品追溯系统的对接,能够杜绝"监管码、批号均正确,但是药品已掉包"的现象发生。结论:基于拉曼光谱技术和现代化信息技术,药品追溯体系融合快检技术具有可行性和必要性。

关键词：药品追溯体系 RACOFIC系统拉曼光谱特征峰