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常温机械灌注条件下劈离式肝移植猪模型的建立

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中华肝胆外科杂志 2016年第1期22卷 48-51页

作者：隋明昊高伟沈中阳天津医科大学第一中心临床学院天津300192 天津市第一中心医院器官移植中心

目的总结建立常温机械灌注条件下劈离式肝移植模型的经验。方法巴马小型猪20头，供体受体各10头。供肝在常温机械灌注条件下沿Taira线进行劈离，保留右半肝。右半肝在无转流条件下行原位肝移植术。常温机械灌注过程中监测猪门静脉和肝... 详细信息

目的总结建立常温机械灌注条件下劈离式肝移植模型的经验。方法巴马小型猪20头，供体受体各10头。供肝在常温机械灌注条件下沿Taira线进行劈离，保留右半肝。右半肝在无转流条件下行原位肝移植术。常温机械灌注过程中监测猪门静脉和肝动脉流量、灌注压力和胆汁生成量，取血检测生化和血气分析指标，取肝脏组织行HE染色并观察病理变化。记录受体手术过程中血流动力学变化以及术后5天存活率和死亡原因。结果灌注过程中血流动力学、血生化和血气分析指标保持稳定，肝移植术中无受体死亡。术后第2天死亡2头，术后5天存活率为80％（8／10）。结论在常温机械灌注条件下行肝劈离术，用右半肝在无转流条件下行肝移植术建立大动物模型具有较好的稳定性和重复性，为下一步研究奠定了基础。

关键词：劈离式肝移植猪常温机械灌注

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不同类型肝移植术后免疫抑制方案应用策略

中国中西医结合急救杂志 2014年第3期21卷 194-197页

作者：邓永林沈中阳天津医科大学一中心临床学院天津300192 天津市第一中心医院器官移植中心天津300192

目的探讨不同类型肝病肝移植术后免疫抑制方案的应用策略。方法以发表的文献和天津市第一中心医院器官移植中心的实践经验，总结肝移植术后、丙型肝炎患者肝移植术后、肝癌肝移植术后、再次肝移植术后或并发感染、肾功能损伤时的免疫抑... 详细信息

目的探讨不同类型肝病肝移植术后免疫抑制方案的应用策略。方法以发表的文献和天津市第一中心医院器官移植中心的实践经验，总结肝移植术后、丙型肝炎患者肝移植术后、肝癌肝移植术后、再次肝移植术后或并发感染、肾功能损伤时的免疫抑制方案，并探讨自发性可控性耐受（SOT）与免疫抑制剂的减量、撤除方案。结果①减少剂量、联合用药是肝移植术后免疫抑制剂调整的重要策略；②维持低水平的免疫抑制强度，避免重复发生细胞排斥反应，积极实施抗病毒治疗可以减慢丙型肝炎（HCV）肝移植术后复发性肝炎的纤维化进程；③抗CD25单克隆抗体的诱导治疗和以西罗莫司（SRL）为基础的免疫维持抑制是肝癌肝移植术后生存率提高的相关因素；④再次肝移植或并发感染时，加强免疫抑制剂浓度检测，及时调整钙调磷酸酶抑制剂（CNIs）或SRL用量，在感染严重的情况下，可以考虑撤除；⑤减少CNIs用药或转换为SRL，可以减轻肝移植术后肾功能损伤的进展；⑥肝移植术后相对稳定的患者，诱导稳定而持久的免疫耐受，有计划地撤除免疫抑制剂可有20％患者实现SOT。结论肝移植术后免疫抑制方案的进展，一方面依赖于新型、不良反应更低的免疫抑制剂不断研发，另一方面则需要更为精确的基因组学、遗传药理学以及药代动力学等方法监测移植肝的损害情况，寻找准确评估免疫抑制剂效用和毒性的特异性免疫监测方法，实现免疫抑制剂的逐步撤出或停用。

关键词：肝移植免疫抑制自发性可控性耐受

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肝移植术后中远期并发症的防治任务与策略

临床肝胆病杂志 2019年第11期35卷 2386-2390页

作者：刘懿禾郑虹沈中阳天津市第一中心医院器官移植中心中国医学科学院移植医学重点实验室国家卫生健康委员会危重病急救医学重点实验室天津市器官移植重点实验室

随着肝移植技术的持续改进及关联学科领域创新成果的涌现与借鉴,肝移植术后中远期并发症在病因构成与临床转归等方面正在悄然迁变,其防治对策值得探究与调整。近年,防治肝炎复发等移植后并发症取得了突破性进展,但应加强规范化诊疗,以... 详细信息

随着肝移植技术的持续改进及关联学科领域创新成果的涌现与借鉴,肝移植术后中远期并发症在病因构成与临床转归等方面正在悄然迁变,其防治对策值得探究与调整。近年,防治肝炎复发等移植后并发症取得了突破性进展,但应加强规范化诊疗,以使移植受者最大程度获益。迄今,防治发病机制不明及成因复杂的肝移植术后中远期并发症,仍主要依赖于针对相关风险因素的长期监测与防控。维护移植肝功能、控制原发病复发、防治新发疾病及接续治疗术前并存疾病,是实施肝移植受者长期管理的主要任务方向。以此为线索,概括阐述了当前肝移植术后中远期并发症的防治任务与策略。

关键词：肝移植手术后并发症治疗学

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肝移植中减轻肝脏缺血再灌注损伤的研究进展

中华肝胆外科杂志 2014年第7期20卷 547-550页

作者：韩俊峰高伟沈中阳天津医科大学一中心临床学院器官移植科 300192 天津市第一中心医院器官移植中心

缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IRI）是一个多环节、多因素参与的病理生理过程.在肝脏移植过程中减轻肝脏IRI具有十分重要的意义,尤其对于“边缘”供肝而言.本文围绕供肝获取、供肝保存、供肝再灌注三个阶段对减轻肝脏IR... 详细信息

缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury,IRI）是一个多环节、多因素参与的病理生理过程.在肝脏移植过程中减轻肝脏IRI具有十分重要的意义,尤其对于“边缘”供肝而言.本文围绕供肝获取、供肝保存、供肝再灌注三个阶段对减轻肝脏IRI的保护策略以及最新进展进行综述.

关键词：肝移植缺血再灌注损伤

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人肝细胞缺血再灌注损伤模型的建立与验证

中华实验外科杂志 2022年第12期39卷 2363-2366页

作者：吴昊齐炳才张锦锐张赛白易张雅敏沈中阳天津医科大学一中心临床学院 300070 天津医科大学三中心临床学院 300070 天津市第一中心医院器官移植中心 300192 天津市第一中心医院肝胆外科 300192

目的:建立以及验证人肝细胞L-02缺血再灌注损伤(IRI)模型。方法:分别利用液体石蜡、氯化钴(CoCl 2)以及缺氧培养箱构建人肝细胞株L-02 IRI模型,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,利用相关试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、... 详细信息

目的:建立以及验证人肝细胞L-02缺血再灌注损伤(IRI)模型。方法:分别利用液体石蜡、氯化钴(CoCl 2)以及缺氧培养箱构建人肝细胞株L-02 IRI模型,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,利用相关试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,利用异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹(Western blot)法测定凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)以及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(bax)表达水平,通过以上方法对3种方式构建肝细胞IRI效果进行验证以及统计分析。两组间的比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果:利用液体石蜡、CoCl 2以及缺氧培养箱构建的肝细胞IRI模型的细胞活力均低于对照组,各组细胞450 nm吸光度分别为(0.698±0.021、0.622±0.029、0.725±0.025比1.086±0.123),差异有统计学意义(F=30.02,P0.05)。结论:采用液体石蜡、CoCl 2以及缺氧培养箱均可成功诱导肝细胞的IRI,在无缺氧培养箱的条件下,与CoCl 2比较,可优先选用液体石蜡的方法来构建肝细胞的IRI模型。

关键词：缺血再灌注损伤 L-02肝细胞细胞模型缺氧

心肺复苏大鼠心肌组织CyPA信号通路的研究

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中华危重病急救医学 2015年第12期27卷 965-969页

作者：王峪刘剑虹王卫利沈鹏沈中阳天津市第一中心医院急诊科 300192 天津市第一中心医院器官移植中心 300192 天津市器官移植重点实验室

目的观察心肺复苏（CPR）后大鼠心肌组织亲环素A（CyPA）信号通路的变化。方法将68只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（n=8）及心搏骤停（CA）即刻组、CPR即刻组和CPR后15、30、60、120min组，每个时间点10只。利用呼气末夹... 详细信息

目的观察心肺复苏（CPR）后大鼠心肌组织亲环素A（CyPA）信号通路的变化。方法将68只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（n=8）及心搏骤停（CA）即刻组、CPR即刻组和CPR后15、30、60、120min组，每个时间点10只。利用呼气末夹闭气管导管模拟窒息后给予机械通气、心脏按压及静脉注射肾上腺素恢复自主循环（ROSC）建立CA—CPR模型。分别于各时间点检测大鼠血流动力学；取腹主动脉血及心肌组织，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清CyPA和CD147水平，采用免疫组化及实时定量反转录-聚合酶链反应（RT—qPCR）检测心肌组织CyPA和CD147的阳性表达及mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测心肌组织基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）和髓过氧化物酶（MPO）的蛋白表达；苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察心肌组织中性粒细胞浸润情况。结果CA即刻大鼠心率降至0，动脉压降低；CPR即刻动脉压即升高至正常，随时间延长，大鼠心率约在30min时恢复；肾上腺素用量50-60嵋，ROSC时间1～4min。与假手术组比较，随ROSC时间延长，CPR120min内血清CyPA和CD147水平逐渐升高，120min达峰值[CyPA从（786．11±3．93）μg/L升至（2001．80±10．61）倒L，CD147从（2．94±0．02）μg/L升至（5．99±0．02）μg/L，P〈0．05或P〈0．01]；心肌组织CyPA和CD147的mRNA表达（A值）逐渐升高，120min达峰值（以假手术组为1，CyPA的相对表达量达2．42±0．05，CD147的相对表达量达1．88±0．10，均P〈0．01）；镜下观察免疫组化结果显示，胞膜呈褐色的阳性细胞逐渐增多、变深，说明CyPA和CD147表达均增加；心肌组织MMP-2、MMP-9、MPO的蛋白表达逐渐升高，120min时达峰值[MMP-2（灰度值）从0．396±0．021升至0．879±0．020，MMP-9（灰度值）从0．372±0．009升至0．819±0．012，MPO（灰度值）从0．176±0．005升至0．829±0．018，P〈0．05或P〈0．01]；心肌组织中未见中性粒细胞明显浸润。结论CyPA和CD147在CPR大鼠血清及心肌组织中表达上调，是炎症反应的标志物。

关键词：心肺复苏心肌组织亲环素A CD147

天津市第一中心医院器官移植中心创建研究型学科的实践与思考

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中国医院 2013年第10期17卷 13-14页

作者：沈中阳天津市第一中心医院天津市南开区复康路24号300192

在研究型医院发展战略牵引下,天津市第一中心医院器官移植中心以临床需求为导向,瞄准国际医学前沿技术,坚持以新的医学知识和医疗技术的产生与传播为使命,坚持临床与科研统筹兼顾协调发展,在自主创新中不断催生高层次人才和高水平成果,... 详细信息

在研究型医院发展战略牵引下,天津市第一中心医院器官移植中心以临床需求为导向,瞄准国际医学前沿技术,坚持以新的医学知识和医疗技术的产生与传播为使命,坚持临床与科研统筹兼顾协调发展,在自主创新中不断催生高层次人才和高水平成果,着力打造一支高层次的移植团队,构建高水平的国际交流平台,推动了临床诊疗水平持续提高。

关键词：研究型学科器官移植

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超基因:基因表达的“多面手”

中国医学科学院学报 2021年第2期43卷 265-270页

作者：刘涛王树森杨磊时乔沈中阳天津市第一中心医院中国医学科学院移植医学重点实验室天津300192 天津市第一中心医院国家卫生健康委员会危重病急救医学重点实验室天津300192 天津市第一中心医院天津市器官移植临床医学研究中心天津300192 天津市第一中心医院器官移植中心天津300192 天津市第一中心医院检验科天津300192 天津中医药大学研究生院天津301617

真核生物基因组的转录是基因表达的重要环节,转录产物不仅包括编码蛋白的信使RNA,还包括众多类型的非编码RNA。在转录过程中,有些基因位点可生成不止一种RNA分子,其中可能包括编码RNA分子,但更多的是非编码RNA分子,这类可转录生成多种RN... 详细信息

真核生物基因组的转录是基因表达的重要环节,转录产物不仅包括编码蛋白的信使RNA,还包括众多类型的非编码RNA。在转录过程中,有些基因位点可生成不止一种RNA分子,其中可能包括编码RNA分子,但更多的是非编码RNA分子,这类可转录生成多种RNA分子的基因位点被命名为超基因。根据转录模式的不同,超基因分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。本文结合实例,对各型超基因的转录特点及其在细胞中的调控作用进行综述。

关键词：超基因非编码RNA 转录基因调控

骨髓间充质干细胞联合常温机械灌注保存大鼠DCD供肝对胆管上皮细胞的影响

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中华危重病急救医学 2019年第9期31卷 1137-1142页

作者：侯宾宋红丽曹欢杨柳孙东沈中阳天津医科大学一中心临床学院 300192 天津市第一中心医院器官移植科天津市器官移植重点实验室天津市器官移植临床医学研究中心卫生部危重病急救医学重点实验室中国医学科学院移植医学重点实验室300192

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSC)联合常温机械灌注(NMP)保存大鼠心脏死亡后捐献(DCD)供肝肝移植后对胆管上皮细胞(BEC)的保护作用。方法取2~3周龄、体重40~60 g雄性SD大鼠,体外提取、培养、鉴定和扩增BMMSC至第3代。取6~8周龄、体重200... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSC)联合常温机械灌注(NMP)保存大鼠心脏死亡后捐献(DCD)供肝肝移植后对胆管上皮细胞(BEC)的保护作用。方法取2~3周龄、体重40~60 g雄性SD大鼠,体外提取、培养、鉴定和扩增BMMSC至第3代。取6~8周龄、体重200~220 g雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、冷保存组(SCS组)、单纯NMP组(NMP组)和BMMSC联合NMP组(BMMSC+NMP组),每组44只。建立心脏死亡后热缺血30 min DCD供肝模型;Sham组仅游离肝脏韧带,不阻断肝脏血供,30 min后缝合。SCS组供肝采用器官保存液(UW)冷保存4 h;NMP组和BMMSC+NMP组建立体外稳定的NMP系统装置,给予灌注液或联合BMMSC灌注4 h;建立原位肝移植术模型,并分别于肝移植术后0、1、7、14 d观察受体存活率。各组于术后各时间点采用生化法检测血清肝功能指标;通过苏木素-伊红(HE)染色观察胆管组织形态学改变;采用免疫组化法和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)定性、定量检测BEC中细胞角蛋白19(CK19)的表达。结果经BMMSC的形态、分化功能和表型鉴定,证实本实验中采用的干细胞为符合标准的BMMSC。NMP组和BMMSC+NMP组大鼠术后0、1、7、14 d存活率均较SCS组明显升高,以BMMSC+NMP组升高更为显著,术后0 d存活率达100%,14 d存活率仍明显高于SCS组和NMP组〔80.0%(16/20)比20.0%(4/20)、70.0%(14/20),均P<0.05〕。随肝移植术后时间延长,SCS组大鼠肝功能指标异常逐渐明显,术后1~7 d达峰值;光镜下显示,胆管组织损伤逐渐加重,术后7 d损伤程度最严重,表现为肝细胞出现大量"气球样"改变,胆管扩张明显并伴有大面积炎性细胞浸润;免疫组化和Western Blot均显示,BEC胞质内CK19表达逐渐减少,7 d达谷值,随后逐渐回升。BMMSC+NMP组和NMP组在肝功能、胆管病理形态学观察以及BEC中CK19表达等方面均明显优于SCS组,以BMMSC+NMP组改善更为显著,表明BMMSC联合NMP对BEC的保护作用明显优于SCS和NMP。结论通过BMMSC联合NMP体外保存大鼠DCD供肝,可以显著减轻肝移植术后BEC损伤,从而改善大鼠肝移植预后,提高移植术后存活率。

关键词：肝移植常温机械灌注缺血/再灌注损伤骨髓间充质干细胞胆管上皮细胞