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GII.26型诺如病毒的组织血型抗原结合特征

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病毒学报 2021年第6期37卷 1310-1316页

作者：李涵博丛鑫段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 深圳市第二人民医院深圳市神经外科重点实验室深圳518037

诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起全球急性胃肠炎的常见病原。组织血型抗原(Histo-blood groups antigens,HBGAs)是NoVs黏附因子(受体),能促进病毒感染宿主细胞。NoVs主要衣壳蛋白突出(Protruding,P)区是与HBGAs结合的关键结构域。本... 详细信息

诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起全球急性胃肠炎的常见病原。组织血型抗原(Histo-blood groups antigens,HBGAs)是NoVs黏附因子(受体),能促进病毒感染宿主细胞。NoVs主要衣壳蛋白突出(Protruding,P)区是与HBGAs结合的关键结构域。本研究构建了非流行毒株GII.26型NoVs P区的原核表达重组质粒,以谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione s-transferase,GST)亲和层析纯化P蛋白,人鼻病毒的3C蛋白酶去掉GST标签,通过酶联免疫吸附实验探索P蛋白与HBGAs相互作用的特点,借助同源结构模拟以及结构重叠分析其与相应糖分子之间可能存在的对接位点。结果表明,P蛋白可与包括A型、B型、AB型、O型和非分泌型的215种唾液中的大部分发生结合,但只与19种寡糖中的H双糖结合;模拟的GII.26 P单体的空间构象与GII.17类似,可通过糖结合位点的5个氨基酸与H双糖特异性结合。本研究阐明了GII.26 P蛋白与HBGAs的结合特征及潜在分子机制,为进一步揭示GII.26 NoVs可能的流行趋势及研发潜在抗病毒药物奠定一定的基础。

关键词：诺如病毒(NoVs) P蛋白组织血型抗原(HBGAs) 受体

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SA11轮状病毒反向遗传学方法的初步应用

病毒学报 2022年第4期38卷 850-857页

作者：刘夏飞李慧莹杜文静柴萨萨朱武洋段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 华北理工大学基础医学院唐山063000

轮状病毒(Rotaviruses,RV)属于呼肠孤病毒科,是分十一节段的dsRNA病毒。直到2017年,轮状病毒才建立起完全基于质粒的反向遗传学系统。本文采用美国John T.Patton教授实验室报道的11+1质粒方法,尝试了基于SA11骨架质粒和我国流行株Hu05(G... 详细信息

轮状病毒(Rotaviruses,RV)属于呼肠孤病毒科,是分十一节段的dsRNA病毒。直到2017年,轮状病毒才建立起完全基于质粒的反向遗传学系统。本文采用美国John T.Patton教授实验室报道的11+1质粒方法,尝试了基于SA11骨架质粒和我国流行株Hu05(G9P[8])VP4和VP7基因的重配。通过结合致细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE)和RT⁃PCR结果验证,证明我们分别成功拯救出rSA11和重配Hu05 VP7的单基因重配毒株(rSA11⁃VP7Hu05)。进一步通过蚀斑试验和qRT⁃PCR方法,我们又比较了rSA11⁃VP7Hu05与亲本株rSA11和Hu05的滴度和基因组复制动力曲线。本文通过对SA11轮状病毒反向遗传方法应用于重配病毒拯救的初步探索,为我国开展下一代轮状病毒疫苗的开发奠定了技术基础。

关键词：轮状病毒反向遗传学重配

免疫功能正常儿童腺病毒肺炎发生肝功能损伤的临床特征

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第5期36卷 579-585页

作者：谢乐云曾赛珍王涛余阗杨乐胡限张兵祝益民段招军湖南省人民医院(湖南师范大学附属第一医院)儿童医学中心长沙410005 湖南省急救医学研究所长沙410005 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的了解儿童腺病毒肺炎伴肝功能异常患儿的临床特征提高临床医生对腺病毒肺炎合并肝功能损伤的认识。方法回顾性收集2013年1月1日至2020年12月31日儿童社区获得性腺病毒肺炎3294例临床资料,分析肝功能正常组以及肝功能异常组临床特征... 详细信息

目的了解儿童腺病毒肺炎伴肝功能异常患儿的临床特征提高临床医生对腺病毒肺炎合并肝功能损伤的认识。方法回顾性收集2013年1月1日至2020年12月31日儿童社区获得性腺病毒肺炎3294例临床资料,分析肝功能正常组以及肝功能异常组临床特征和相关实验室检查结果,应用多变量回归分析方法分析相关因素。结果1704例纳入患儿在入院时实验室检查提示谷丙转氨酶和/或谷草转氨酶升高,肝功能损伤率(51.7%,1704/3294)。轻度损伤1671例(98.1%,1671/1704)、中度损伤28例(1.64%,28/1704)、重度损伤5例(0.29%,5/1704)。肝功能正常组与肝功能异常组进行单因素比较,肝功能异常组男性患儿比例高于肝功能正常组(68.1%,64.2%,P=0.017),且年龄较小[16(9,30)月,38(19,53)月,P<0.001]。肝功能异常组患儿更容易出现喘息(32.9%,18.7%,P<0.001)、气促(13.7%,9.1%,P<0.001)和腹泻(11.0%,4.7%,P<0.001)。实验室检查结果显示肝功能异常组患儿白细胞计数、中性粒细胞计数及血红蛋白低于正常组,淋巴细胞则高于正常组,肌酸激酶、心型肌酸激酶和乳酸脱氢酶水平较高。肝功能异常组患儿发生重症肺炎的比例(26.9%,11.2%,P<0.001)高于肝功能正常的患者,病死率明显较高(1.47%,0.25%,P<0.001)。对轻症及重症腺病毒肺炎儿童肝功能损伤机率进行比较,结果发现重症肺炎组儿童发生肝损伤更为多见(73.0%,46.6%,P<0.001),且中度及重度肝损伤均高于轻症组。进一步多变量逻辑回归分析并未发现与肝损伤的发生率显著相关因素。结论儿童腺病毒肺炎伴肝功能损伤的发生率高,以轻度损伤多见。发生肝功能损伤患儿年龄较小,喘息及气促等临床症状相对更重,重症肺炎比例及病死率更高。儿童重症腺病毒肺炎发生肝损伤比例更高,中重度损伤更为常见。对伴有不同程度肝功能损伤患儿应加强监测。

关键词：儿童腺病毒肺炎肝功能损伤

GⅡ.4基因型香港株P蛋白受体结合特征的研究

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病毒学报 2023年第1期39卷 67-74页

作者：吴铮苏韫曦丛鑫王金冬朱曦靳淼孙晓曼段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

分析GⅡ.4基因型中国香港株(GⅡ.4 HongKong,GⅡ.4 HK)P颗粒蛋白与组织血型抗原的相互作用方式以探索GⅡ.4 HK的受体结合特征。利用大肠杆菌蛋白表达系统得到GⅡ.4 HK及GⅡ.4 Sydney的P颗粒蛋白,通过寡糖和唾液结合实验研究其与不同组... 详细信息

分析GⅡ.4基因型中国香港株(GⅡ.4 HongKong,GⅡ.4 HK)P颗粒蛋白与组织血型抗原的相互作用方式以探索GⅡ.4 HK的受体结合特征。利用大肠杆菌蛋白表达系统得到GⅡ.4 HK及GⅡ.4 Sydney的P颗粒蛋白,通过寡糖和唾液结合实验研究其与不同组织血型抗原的结合特异性;对序列和结构进行分析,比较P蛋白的结构和功能特征。成功制备到GⅡ.4 HK与GⅡ.4 Sydney的P颗粒蛋白,GⅡ.4 HK和GⅡ.4 Sydney P颗粒与人A、B、AB、O型唾液均有结合,也与含fucose的H双糖寡糖有很好的结合。GⅡ.4 HK与GⅡ.4 Sydney流行株具有相似的组织血型抗原结合特征,但结合能力弱于GⅡ.4 Sydney流行株,GII.4 HK在多个抗原位点有氨基酸改变,可能引起抗原改变,有必要对GⅡ.4 HK流行情况的持续监测。

关键词：诺如病毒 P颗粒组织血型抗原唾液结合寡糖结合

加热联合维拉帕米对人舌癌耐药细胞株Tca8113/BLM耐药性的影响

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中国现代医学杂志 2009年第6期19卷 827-829页

作者：何春梅段朝军邓柯湖南大学生物医学中心生物医学纳米器件实验室湖南长沙410082 中南大学湘雅医院医学实验研究中心湖南长沙410008

目的研究加热(hyperthermia,HT)联合逆转剂维拉帕米(verapami,Vera)对人舌癌耐药细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM耐药性的影响。方法采用MTT法检测40℃加热1h后联合Vera对人舌癌亲本细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM化疗药物的敏感性... 详细信息

目的研究加热(hyperthermia,HT)联合逆转剂维拉帕米(verapami,Vera)对人舌癌耐药细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM耐药性的影响。方法采用MTT法检测40℃加热1h后联合Vera对人舌癌亲本细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM化疗药物的敏感性;流式细胞仪(FCM)检测细胞内阿霉素(Doxorubicin ADM)浓度聚积以及细胞膜上P-gp和MRP的表达。结果与单独Vera作用细胞相比,加热40℃1h联合5μmol/LVera作用细胞后,Tca8113、Tca8113/BLM细胞的IC50显著下降(P<0.01),且各组之间差异均有显著性(P<0.01),ADM浓度在两种细胞中明显增加(P<0.01),细胞膜上的P-gp和MPR荧光强度显著下降(P<0.01)。结论加热联合Vera能更好提高细胞内药物浓度的聚积,降低细胞膜上的耐药蛋白P-gp和MRP的表达,逆转人舌癌耐药细胞Tca8113/BLM对BLM的耐药现象。

关键词：加热维拉帕米 Tca8113/BLM p-gp MRP 化疗舌癌

P[4]、P[6]和P[8]型轮状病毒VP8*核心区蛋白的表达和纯化

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病毒学报 2016年第3期32卷 256-262页

作者：孙晓曼郭妮君李丹地马鑫段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 中国铁道建筑总公司北京铁建医院北京100039

为进一步深入研究我国人群中轮状病毒主要流行的P[4]、P[6]和P[8]型毒株的受体结合特点及结构基础,本研究将P[4]、P[6]和P[8]型毒株VP8*核心区(VP8*core)基因分别构建到原核表达载体pGEX4T-1和pET30a中,利用大肠杆菌表达获得轮状病毒P[4... 详细信息

为进一步深入研究我国人群中轮状病毒主要流行的P[4]、P[6]和P[8]型毒株的受体结合特点及结构基础,本研究将P[4]、P[6]和P[8]型毒株VP8*核心区(VP8*core)基因分别构建到原核表达载体pGEX4T-1和pET30a中,利用大肠杆菌表达获得轮状病毒P[4]、P[6]和P[8]型毒株VP8*核心区蛋白,并通过亲和层析分别纯化得到VP8*core-GST融合蛋白和VP8*-his标签蛋白,SDS-PAGE显示蛋白大小分别为46kDa和20kDa。综上,本研究成功构建了pGEX4T-1-VP8*core和pET30a-VP8*core重组质粒,利用原核表达系统得到VP8*coreGST融合蛋白和VP8*core-his蛋白,为VP8*蛋白的功能和结构研究提供基础。

关键词：轮状病毒 VP8＊核心区蛋白蛋白纯化

人诺如病毒NS6蛋白的表达、纯化及活性验证

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中华实验和临床病毒学杂志 2019年第6期33卷 646-649页

作者：袁越新燕庞立丽段招军内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010000 国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的在大肠埃希菌中表达人诺如病毒(norovirus,NoV)NS6非结构蛋白,为了获得高纯度且具有酶活性的人诺如病毒NS6蛋白。方法将NoV NS6蛋白基因克隆至原核表达载体pDE1中,转化至E.coli BL21感受态细胞中进行表达,产物经亲和及分子筛层析... 详细信息

目的在大肠埃希菌中表达人诺如病毒(norovirus,NoV)NS6非结构蛋白,为了获得高纯度且具有酶活性的人诺如病毒NS6蛋白。方法将NoV NS6蛋白基因克隆至原核表达载体pDE1中,转化至E.coli BL21感受态细胞中进行表达,产物经亲和及分子筛层析纯化。NS6蛋白在37 ℃条件下,酶切融合蛋白15VP1-6P,检测其酶切活性。结果 NS6蛋白在大肠埃希菌中获得了稳定、高效表达,纯化后纯度可达95%以上。NS6蛋白能够切割含3C酶切位点的融合蛋白。结论在大肠埃希菌中成功表达了具有酶切活性的NoV非结构蛋白NS6,为进一步研究NoV的致病机制奠定了基础。

关键词：人诺如病毒非结构蛋白NS6 亲和层析分子筛酶切

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干扰素抗诺如病毒感染的研究进展

病毒学报 2020年第6期36卷 1213-1220页

作者：李伯阳段招军庞立丽中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 华北理工大学基础医学院唐山063000

人诺如病毒(Human norovirus,HuNV)是导致全世界急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要病原体,疾病负担严重,目前没有有效针对HuNV的抗病毒药物或疫苗。HuNV引起的胃肠炎的病程通常只持续1~3 d,因此先天免疫应答在控制HuNV感染中起重要作... 详细信息

人诺如病毒(Human norovirus,HuNV)是导致全世界急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要病原体,疾病负担严重,目前没有有效针对HuNV的抗病毒药物或疫苗。HuNV引起的胃肠炎的病程通常只持续1~3 d,因此先天免疫应答在控制HuNV感染中起重要作用。干扰素(Interferon,IFN)是一类具有抗病毒、调节免疫等作用的糖蛋白。IFN对控制诺如病毒(Norovirus,NV)的复制非常关键,本文主要对Ⅰ型IFNs和Ⅲ型IFNs的抗NV感染的免疫作用进行综述,希望为HuNV与IFN之间的相互作用关系与机制及抗HuNV治疗提供有效信息。

关键词：诺如病毒(NV) 干扰素(IFN) 抗病毒免疫反应

2019年我国5岁以下腹泻住院患儿A组轮状病毒感染的流行特征分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第2期36卷 172-175页

作者：王明雯李静欣高升辉孙晓曼章青王宏李丹地段招军中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

目的了解2019年我国5岁以下腹泻住院患儿A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)感染的流行特征,为A组轮状病毒监测提供参考。方法收集2019年我国20省监测哨点医院的5岁以下腹泻住院儿童粪便标本及临床信息。根据《全国病毒性腹泻监测方案... 详细信息

目的了解2019年我国5岁以下腹泻住院患儿A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)感染的流行特征,为A组轮状病毒监测提供参考。方法收集2019年我国20省监测哨点医院的5岁以下腹泻住院儿童粪便标本及临床信息。根据《全国病毒性腹泻监测方案》中轮状病毒检测方法进行RVA核酸检测及基因分型。结果采集病毒性腹泻标本共5395份,检测5038份,1247份腹泻标本呈现RVA核酸阳性(1247/5038,24.75%)。RVA在福建省的阳性率最低(30/319,9.40%),在河南省的阳性率最高(182/338,53.85%);RVA在男性和女性患儿中的阳性率分别为25.24%(762/3019)和24.02%(485/2019),RVA感染无明显的性别分布特征(χ^(2)=0.96,P=0.326);RVA以12~17月龄患儿为主要易感对象(342/1033,33.11%),48~59月龄患儿RVA的阳性率较低(35/227,15.42%),RVA感染呈现明显的年龄分布特征(χ^(2)=86.78,P<0.001);RVA感染具有明显的城乡差别(χ^(2)=20.92,P<0.001)和季节特征(χ^(2)=411.42,P<0.001)。RVA基因分型结果显示G9P[8]型(994/1122,88.59%)是主要的流行优势株。结论2019年我国5岁以下腹泻住院患儿RVA感染的主要基因型为G9P[8]型,且RVA感染具有明显的年龄、地域和季节特征。

关键词：病毒性腹泻 A组轮状病毒流行特征基因型