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融合表达新冠病毒S1与N蛋白的非复制型重组腺病毒的构建与鉴定

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病毒学报 2024年第2期40卷 225-232页

作者：毛彤瑶张鹏姜苏芮李丹地段招军传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝... 详细信息

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝胶电泳、多酶切、测序等方法鉴定重组质粒正确性;重组质粒转染HEK293A细胞获得病毒毒种AdV5-S1-N并扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,有限稀释分析法测病毒滴度,Western blot方法验证AdV5-S1-N重组腺病毒S1-N融合蛋白表达情况;将AdV5-S1-N疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,第14d采集颌下静脉血,ELISA法检测血清针对S1和N蛋白抗原的特异性抗体滴度。成功获得滴度为9.45×10^(11)IU/mL的重组腺病毒AdV5-S1-N。Western blot结果发现:AdV5-S1-N感染细胞后,融合蛋白可正常表达,与抗S1蛋白及抗N蛋白抗体均有特异结合。ELISA结果显示免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对S1和N蛋白的特异性IgG抗体。应用复制缺陷型腺病毒载体成功获得融合表达SARS-CoV-2 Omicron突变株S1-N蛋白的高滴度重组腺病毒,该重组病毒能在小鼠诱导针对S1和N蛋白的特异性免疫应答,为后续深入研究和评价该候选疫苗奠定了基础。

关键词：新型冠状病毒腺病毒载体疫苗体液免疫融合表达

Structural Basis of Glycan Recognition in Globally Predominant Human P[8]Rotavirus

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Virologica Sinica 2020年第2期35卷 156-170页

作者： Xiaoman Sun Lei Dang Dandi Li Jianxun Qi Mengxuan Wang Wengang Chai Qing Zhang Hong Wang Ruixia Bai Ming Tan zhaojun duan National Health Commission Key Laboratory for Medical Virology and Viral Diseases Beijing 102206China National Institute for Viral Disease Control and Prevention China CDC.Beijing 102206China Inner Mongolia Medical University Huhehaote 010059China Institute of Microbiology Chinese Academy of SciencesBeijing 100101China Glycosciences Laboratory Department of MedicineImperial College LondonLondonUK Division of Infectious Diseases University of Cincinnati College of MedicineCincinnatiOHUSA

Rotavirus(RV)causes acute gastroenteritis in infants and children worldwide.Recent studies showed that glycans such as histo-blood group antigens(HBGAs)function as cell attachment factors affecting RV host susceptibility and prevalence.P[8]is the predominant RV genotype in humans,but the structural basis of how P[8]RVs interact with glycan ligands remains elusive.In this study,we characterized the interactions between P[8]VP8~*s and glycans which showed that VP8~*,the RV glycan binding domain,recognized both mucin core 2 and H type 1 antigens according to the ELISA-based oligosaccharide binding assays.Importantly,we determined the structural basis of P[8]RV-glycans interaction from the crystal structures of a Rotateq P[8]VP8~*in complex with core 2 and H type 1 glycans at 1.82.3?,respectively,revealing a common binding pocket and similar binding mode.Structural and sequence analysis demonstrated that the glycan binding site is conserved among RVs in the P[Ⅱ]genogroup,while genotype-specific amino acid variations determined different glycan binding preference.Our data elucidated the detailed structural basis of the interactions between human P[8]RVs and different host glycan factors,shedding light on RV infection,epidemiology,and development of anti-viral agents.

关键词： Rotavirus(RV)·P Glycan binding specificity VPS*structure Mucin core 2 Lacto-N-fucopentaose 1(LNFPl)

对两株NSP3区插入外源基因的重组轮状病毒遗传稳定性的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第1期38卷 1-6页

作者：李杉刘夏飞余俊杰李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院兰州730000 河南中医药大学第一临床医学院郑州450046 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的分析2株插入和表达外源基因的重组轮状病毒rLLR/NSP3-NLuc和rLLR/NSP3-CoV2/RBD在MA104细胞上连续传代增殖的遗传稳定性。方法将2株重组轮状病毒滴度测定后, 按照MOI0.01传至P2代, 随后按1∶100稀释并活化上一代病毒裂解液, 连续18... 详细信息

目的分析2株插入和表达外源基因的重组轮状病毒rLLR/NSP3-NLuc和rLLR/NSP3-CoV2/RBD在MA104细胞上连续传代增殖的遗传稳定性。方法将2株重组轮状病毒滴度测定后, 按照MOI0.01传至P2代, 随后按1∶100稀释并活化上一代病毒裂解液, 连续18代(P20)感染MA104细胞, 用间接免疫荧光法测定P1, P5, P10, P15, P20代细胞裂解液病毒滴度, 进行RT-PCR鉴定以及dsRNA-PAGE银染实验, 并检测rLLR/NSP3-NLuc的荧光素酶活性。结果重组轮状病毒rLLR/NSP3-NLuc在20代内均未发现插入片段丢失, 重组病毒滴度为3.85~5.16×10^(6) FFU/ml, 各代次均有较强的荧光素酶信号。重组轮状病毒rLLR/NSP3-CoV2/RBD在第6代出现了插入片段的丢失, 该重组病毒前5代的感染性滴度为:2.6~3.36×10^(6) FFU/ml。结论 NSP3基因末端插入582 bp NLuc的重组轮状病毒具有很好的遗传稳定性, 而NSP3基因末端插入885 bp RBD的重组轮状病毒仅在前5代稳定, 提示重组轮状病毒NSP3基因末端可以插入和表达外源基因, 但其稳定性需要更深入研究。

关键词：重组轮状病毒 MA104细胞遗传稳定性

儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2024年版)

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中华预防医学杂志 2024年第4期58卷 421-453页

作者：儿童轮状病毒胃肠炎专家共识编写组段招军李金松张静邓莉赵鲁卿李丹地李静欣不详传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 中国疾病预防控制中心首都儿科研究所北京中医医院

轮状病毒胃肠炎(RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重,防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场文件-2021年7月》的基础上,系... 详细信息

轮状病毒胃肠炎(RVGE)是严重威胁5岁以下儿童健康的全球性公共卫生问题。中国RVGE相关疾病负担重,防控难度大。本共识在《儿童轮状病毒胃肠炎免疫预防专家共识(2020版)》和《世界卫生组织轮状病毒疫苗立场文件-2021年7月》的基础上,系统阐述了RVGE流行病学、已上市轮状病毒(RV)疫苗的安全性、有效性和免疫保护持久性、RV疫苗免疫策略等国内外研究进展,增补了常见的RVGE诊疗方案。本共识旨在从预防为主和医防融合的角度出发,推动落实以疫苗接种为重点的RVGE综合性防控措施,降低儿童RVGE疾病负担,为从事疾病预防控制、疫苗接种、临床诊疗等多领域的工作人员提供参考。

关键词：轮状病毒胃肠炎轮状病毒疫苗免疫预防共识

Wildlife-borne microorganisms and strategies to prevent and control emerging infectious diseases

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Journal of Biosafety and Biosecurity 2021年第2期3卷 67-71页

作者： Tian Qin Xiangdong Ruan zhaojun duan Jianping Cao Junrong Liang Jing Yang Yan Jiang Mang Shi Jianguo Xu State Key Laboratory of Infectious Disease Prevention and Control National Institute for Communicable Disease Control and PreventionChinese Center for Disease Control and PreventionBeijing 102206China Survey&Planning Institute of National Forestry and Grassland Administration Beijing 100000China Institute for Viral Disease Control and Prevention Chinese Center for Disease Control and PreventionBeijing 102206China Institute of Parasitic Disease Control and Prevention Chinese Center for Disease Control and PreventionShanghai 200025China Sun Yat-sen University Guangzhou 510080GuangdongChina Institute of Public Health Nankai UniversityTianjin 300071China

China is one of the countries with the richest wildlife population.The large variety of widely distributed species act as natural or susceptible hosts for numerous infectious diseases.It is estimated that there are more than 1.2 million unknown virus species in China,and there might be 10,000–30,000 unknown bacteria in wild mammals on the Qinghai-Tibet Plateau alone.There are no less than 600,000 species of animal-borne parasites and approximately 2 million species of fungi worldwide.With rapid economic growth and globalization,humans and wildlife interact more frequently,which enhances the probability of wildlife-borne pathogens infecting humans.The occurrence of animal-borne infectious diseases will become the“new normal”we have to face in the future.Therefore,research should be carried out on wildlife-borne microorganisms and the prevention and control of emerging infectious diseases to establish an analytical framework and an evaluation technology system for risk assessment and early warning of potential animal-borne emerging infectious diseases.This will not only improve our understanding of wildlife-borne microbial communities but also enable in-depth analysis,discovery,early warning,and even prediction of major animal-borne emerging infectious diseases that might occur in the future.Furthermore,this research will reduce response times,minimize the social and economic impact and losses,enable interventions related to the emergence or spread of the disease as early as possible,and comprehensively improve our management of infectious disease outbreaks.

关键词： Wildlife Wildlife-borne microorganisms Emerging infectious diseases Prevention and control strategy Animal-borne emerging infectious diseases Evaluation technology system

2022年我国GII.17[P17]诺如病毒急性胃肠炎暴发流行病学特征

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中华实验和临床病毒学杂志 2024年第1期38卷 58-66页

作者：杨艳辉孔翔羽章青曹丽娇丛实李静欣靳淼段招军传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、卫生部医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的了解我国2022年GII.17[P17]诺如病毒(Norovirus, NoV)急性胃肠炎(acute gastroenteritis, AGE)暴发的流行病学特征。方法收集2022年1~12月AGE暴发信息及标本, 应用real-time RT-PCR对样本进行NoV核酸检测, 阳性样本通过RT-PCR扩增、测序和序列分析。结果 2022年1~12月, 共报告NoV引起的AGE暴发360起, 其中266起成功获得基因分型结果, GII.17[P17]为主要基因型之一, 为34起(12.78%, 34/266), 春季检出最多(3月6起和5月7起), 主要发生在托幼机构和小学(61.76%, 21/34)。对不同年龄组感染GII.17[P17]基因型的差异进行比较发现, 5岁以下、6~18岁、19~65岁、65岁以上这四个年龄组的GII.17[P17]基因型NoV感染病例占GII基因型NoV感染病例的比例分别为11.78%(53/450)、23.52%(32/136)、52.52%(52/99)、36.36%(4/11)。本研究14株GII.17[P17]基因组在衣壳区和聚合酶区分别属于Cluster III b和Cluster III(Kawasaki308)的SC III分支, 均与引起我国2014/15季节AGE暴发流行GII.17[P17]新变异株(GZ41621株)同属一簇。与Cluster I、Cluster II和Cluster IIIa相比, Cluster IIIb存在22个氨基酸位点变化, 本研究NoV毒株所在Cluster III b主要的氨基酸变化为:抗原表位A的T294I、Q299R, 在抗原表位D发生了一个插入突变, 人组织血型抗原受体结合位点site I的H353Q。选择压力分析检测到了大量负向选择位点, 表明负向选择对VP1基因进化起着重要作用。结论 GII.17[P17]是2022年引起我国NoV AGE暴发的主要基因型之一, 本研究的GII.17[P17]毒株与引起我国2014/15季节AGE暴发流行的GII.17[P17]新变异株(GZ41621株)仍同属一簇, 在潜在表位发生少量氨基酸变异。

关键词：诺如病毒急性胃肠炎暴发基因型

New strategy for virus discovery:viruses identified in human feces in the last decade

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Science China(Life Sciences) 2013年第8期56卷 688-696页

作者： XIE GuangCheng YU JieMei duan zhaojun National Institute of Viral Disease Control and Prevention Chinese Center for Disease Control and Prevention

Emerging and re-emerging viruses continue to surface all over the world.Some of these viruses have the potential for rapid and global spread with high morbidity and mortality,such as the SARS coronavirus outbreak.It is extremely urgent and important to identify a novel virus near-instantaneously to develop an active preventive and/or control strategy.As a cultureindependent approach,viral metagenomics has been widely used to investigate highly divergent and completely new viruses in humans,animals,and even environmental samples in the past decade.A new model of Koch's postulates,named the metagenomic Koch's postulates,has provided guidance for the study of the pathogenicity of novel viruses.This review explains the viral metagenomics strategy for virus discovery and describes viruses discovered in human feces in the past 10 years using this approach.This review also addresses issues related to the metagenomic Koch's postulates and the challenges for virus discovery in the future.

关键词： SARS冠状病毒人类粪便柯赫氏法则宏基因组基因组学控制策略环境样品

诺如病毒混合基因型致沈阳市某高校胃肠炎暴发的分子流行病学分析

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国际病毒学杂志 2024年第1期31卷 12-16页

作者：丛实李春风陈玲栗凡陈叶杨艳辉曹丽娇靳淼王冰段招军沈阳医学院公共卫生学院 110034 沈阳市浑南区疾病预防控制中心传染病防制科 110000 沈阳市疾病预防中心传染病防制所 110000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、卫生部医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206

目的明确2020年11月沈阳市一起由混合基因型诺如病毒引起的某高校胃肠炎暴发的分子流行病学特征.方法收集该起暴发的流行病学和病例临床信息,采集病例粪便或肛拭子样本、相关餐具等样本,采用实时荧光RT-PCR对胃肠炎主要病毒(诺如病毒等... 详细信息

目的明确2020年11月沈阳市一起由混合基因型诺如病毒引起的某高校胃肠炎暴发的分子流行病学特征.方法收集该起暴发的流行病学和病例临床信息,采集病例粪便或肛拭子样本、相关餐具等样本,采用实时荧光RT-PCR对胃肠炎主要病毒(诺如病毒等)进行检测,诺如病毒阳性样本进行RT-PCR扩增,PCR产物测序,采用Mega 7.0软件进行序列分析.结果2020年11月16~30日该高校共报告疑似病例229例,罹患率2.8%(229/8270).临床症状中腹泻占比最高(92.7%),不同症状之间差异有统计学意义(χ^(2)=46.683,P<0.001).在229名感染患者中,男女比为1:79(82:147);各年龄段均有发病,<20岁的人群罹患率最高53.3%(122/229);校内不同职业的罹患率差异有统计学意义(χ^(2)=433.049,P<0.001).229份病例和90份环境样本的检出率分别为34.1%(78/229)和8.9%(8/90).采用分型RT-PCR对86份诺如病毒阳性样本进行扩增及测序,其中19份样本测序成功,共分为4个基因型,分别为GⅡ.4 Sydney[P16](1份,5.3%)、GⅡ.6a[P7](11份,57.9%)、GⅡ.2[P16](5份,26.3%)和GⅠ.7b[P7](3份,15.8%),其中有1份为GⅡ.6a[P7]和GⅠ.7b[P7]混合感染,每个基因型的标本序列同源性均在99.6%~100%之间.结论该起暴发由4种诺如病毒基因型共同感染引起,存在GⅠ和GⅡ组混合感染病例,为今后高校诺如病毒胃肠炎暴发的预防控制提供了科学依据.

关键词：诺如病毒暴发混合感染学校

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生血宝合剂药渣对新西兰兔饲喂效果的研究

中国饲料 2024年第3期 59-68页

作者：贺宇于金高宋忠兴唐志书段金廒朱华旭刘红娜周建平曹兆军陕西中医药大学陕西中药资源产业化省部共建协同创新中心秦药特色资源研究开发国家重点实验室(培育) 陕西咸阳712046 中国中医科学院北京100700 南京中医药大学江苏省植物药深加工工程研究中心江苏省中药资源产业化过程协同创新中心江苏南京210023 清华德人西安幸福制药有限公司陕西西安710043

本研究首先对生血宝合剂药渣(SXBR)从营养物质和药用活性成分两方面进行成分表征,然后将0%(SXBRc组)、5%(SXBRl组)、10%(SXBRm组)和20%(SXBRh组)比例的SXBR添加到新西兰兔的基础饲粮中,对新西兰兔的生产性能、抗氧化应激功能、骨髓造血... 详细信息

本研究首先对生血宝合剂药渣(SXBR)从营养物质和药用活性成分两方面进行成分表征,然后将0%(SXBRc组)、5%(SXBRl组)、10%(SXBRm组)和20%(SXBRh组)比例的SXBR添加到新西兰兔的基础饲粮中,对新西兰兔的生产性能、抗氧化应激功能、骨髓造血功能和肠道菌群进行考察,并表征其潜在毒性。研究结果表明:SXBR含有丰富的碳水化合物、粗脂肪等营养物质,且含有大量三萜类和黄酮类等活性成分。相比SXBRc组,SXBRh组在第44、54、57天的体重增量增加了60%以上,60 d料重比降低了43.85%,且SXBR各添加组屠宰率均增加了6%以上。以上结果差异均具有统计学意义(P<0.05),表明SXBR生产性能良好。SXBRh组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性相比SXBRc组显著增强了91.70%(P=0.003),丙二醛(MDA)含量显著降低了80.62%(P=0.010)。此外,SXBR可抑制骨髓细胞凋亡,改善肠道菌群结构,具有良好的安全性。可见,SXBR是生产食草动物饲料的良好原料,也可开发为抗氧化应激、调节肠道微生态、促生长的饲料添加剂。本研究对实现SXBR饲料化应用,促进中药渣循环利用具有现实意义。

关键词：药渣循环利用饲料氧化应激微生态